Seminario biologia molecular Mariana Ramirez Juana Ossa

1. Presented by: Juana Valentina Ossa and Mariana Ramírez
Third semester. Medicine.
Universidad Pontificia
Bolivariana

2. Proteus mirabilis
- Gram- negative bacteria that belongs to the Enterobacteriaceae bacterial family.
- It´s the main cause besides Escherichia coli, of symptomatic infections associated to the
urinary tract, such as cystistis and pyelonephritis, sometimes leading to the formation of
urinary stones
- Most UTIs (Urinary Tract Infections) associated with this bacteria are consequent to the
catheter usage
- The virulence of this microorganism is due to several factors such as: Urease and protease
production, fimbriae-mediated bacterial attachment to the uroepithelium and hemolysin
https://www.hygiene-in-practice.com/pathogen/proteus-mirabilis-en/

3. PCR
- Polymerase Chain Reaction
- PCR is a technique used to amplify a specific DNA region
- PCR is based on using the ability of DNA polymerase to synthetize a new strand that complements the
template strand
- The objective of PCR is to produce enough copies of the target DNA, to make possible the analysis
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/probe/docs/techpcr/

4. PURPOSE OF THIS ARTICLE
To evaluate the genetic linkage among P.mirabilis isolated from patients suffering from UTI

5. ERIC-PCR
- Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Polymerase Chain Reaction
- Las secuencias ERIC se encuentran en una variedad de genomas bacterianos, incluido el P.
mirabilis
- Hace posible la evaluación de la variabilidad clonal y parentesco filogenético de estos
microorganismos
- Fue utilizado para evaluar la eficiencia, fiabilidad y la habilidad discriminatoria para realizar
estudios en microorganismos, también para determinar la variabilidad genética entre los
diferentes grupos

6. Análisis Cluster
- Realiza una agrupación de los microorganismos, de acuerdo a sus características genéticas
- En este estudio, se analizaron unas cepas de Proteus estos fueron agrupados según sus
características
- Fueron organizadas en 7 grupos homogéneos (A-G)

7. Extracción de DNA
- Separación y purificación del DNA con el fin de poder estudiarlo, analizarlo o manipularlo. En estudios,
es utilizado para se analizar y diagnosticar a pacientes con enfermedades neurodegenerativas, cáncer,
infecciones.
- DNA extraído se le midió la calidad mediante muestras de gel de agarosa al 1% y luego se le realizó
electroforesis para verificar la pureza y la integridad de la muestra
Alberto Checa Rojas. (2016). Extracción de ADN. 2020, Septiembre 7, Conogasi.org Sitio web: http://conogasi.org/articulos/extraccion-de-adn/

8. Identificación de P. mirabilis aislados
292 muestras de orina fueron aleatoriamente recolectadas de pacientes que padecen de infecciones
del tracto urinario (Enero-Junio 2018)
P. mirabilis aislados fueron identificados mediante pruebas bioquímicas y microbiológicas:
- Producción de catalasa y ureasa*
- Producción de gas a partir de glucosa
- Motilidad*
- Producción de ácido sulfhídrico (H2S)*
- Rojo de metilo (Methyl Red. MR)
Inoculación de los P. mirabilis confirmados en trypticase soy broth con 15% de glicerol a -20°C

9. Resultados
Fig. 1. ERIC-PCR profiles of 60 clinical P. mirabilis
isolates.

10. Resultados
Fig. 1. ERIC-PCR profiles of 60 clinical P. mirabilis
isolates.

11. Resultados
Fig. 1. ERIC-PCR profiles of 60 clinical P.
mirabilis isolates.

12. Resultados
Fig. 2. Dendogram obtained from ERIC - PCR
fingerprinting of 60 clinical isolates of P. mirabilis.
Isolates were clusters into seven clusters (A-G)
Diferencia del 53%
Cluster predominante: C La mayoría de los P. mirabilis
encontrados, tienen un patrón de banda muy similar
3-27 en el cluster B tienen patrones de banda
similares

13. Discussion
Author Agree or disagree
Li et al
Due to the accuracy, speed, reproducibility, sensitivity, specificity, and
reliability of PCR-based techniques, they are most commonly used for the
evaluation of different DNA fingerprints
Agree
Jacobsen and
Shirtliff
UTIs caused by P. mirabilis are usually complicated by renal damage and
urinary stones and may even progress to bacteremia and sepsis
Agree
Armbruster and
Mobley
This microorganism can be found in a wide range of environments; however, it
frequently resides in the human gastrointestinal tract (GIT) in a commensal
manner
Agree

14. Conclusion
- Through molecular biology, it is possible to study the genetics of microorganisms such as P.
mirabilis and establish the reasons why they cause infectious diseases such as UTIs
- Studying the genome of microorganisms, is possible to determined a correct treatment plan,
avoiding situations such as antibiotic resistance
- Molecular biology allows to analyze the ways external factors can affect the functioning and
metabolism of the microorganism that causes the disease

15. Mapa
conceptual
Mariana Ramírez

16. Mapa conceptual: Juana Ossa