espermiograma

1. Facultad de ciencias de la Salud
Tecnología Médica – Lab. Clínico, Hematología y banco de sangre
Integrantes: - Sebastian Pilco
Fecha: 25/06/2019
Asignatura: Bioanálisis Clínico II

2. Fluido producto de la
eyaculación
2 a 4 ml (abstinencia de 7
días)
90% Líquido seminal 10% Espermios
Nutrientes (Fructuosa, Zinc,
Cálcio, Fósforo)
Hormonas: Testosterona
Enzimas: Fosfatasa Ácida
50 – 150 millones / ml de semen

3. Célula haploide producto de la espermiogénesis
Acrosoma: Contiene enzimas hidrolíticas cuya misión es la separación de las células del cumulo que rodea al ovocito
Procursor: Espermatogonias (células madre). Son diploides
Núcleo: Haploide, contiene el par cromosómico del macho.
Cuello: Contiene mitocondrias que aportan energía para el movimiento.
Cola o Flagelo: Estructura que genera movilidad en el espermio.

4. Testículos
Productoras de espermios y hormonas. Órgano
glandular. Ocurre la espermatogénesis.
Epididimo
- Órgano que se forma por túbulos, que conecta
los testículos a los túbulos deferentes. En él
maduran los espermios durante 12 días
Próstata
- Órgano glandular
- Aporta el 15 – 20% del vol. total de semen
- Aporta: Nutrientes (Zinc, Calcio, Potasio);
Espermina (olor) y Enzimas (Fosfatasa ácida)
Vesícula
Seminal
- Productoras del 60% del vol. total de semen.
- Secreta mucoide rico en fructuosa (energía)
Glándula
de Cowper
- Aporta el 15 – 20% del vol. total de semen.
- Segrega líquido alcalino que lubrica y
neutraliza la acidéz de la uretra antes del paso
de los espermios.

5. Abstinencia durante 3 a 6
días
Obtener mediante
masturbación.
Previo aseo
genital
Debe ser fresca, hacer llegar antes de los 30
min. No usar muestras pasadas las 2 – 3
horas.
El laboratorio debe contar con un cuarto
acomodado para toma de muestra.
Frasco estéril, de uso exclusivo.

6. Obtenida mediante coito interrumpido, felatio,
preservativo o si uso lubricante
Muestras emitidas pasadas 2 – 3 horas.
No se cuida la temperatura: 20 – 40°C

7. Estudio del líquido
seminal desde tres
aspectos:
Físico Bioquímico Microscópico

8. LICUEFACCION
Fibrina enzima fibrinolitica
Se informa si no se licua en 1 hora
Ya que podría tener un problema prostático

9. Volumen
pH
Color
Blanco amarillento (pioespermia)
Blanco grisáceo
Color rojo: Hemospermia
(Patológico)
Olor Mohoso, flor de castaña, agua de cuba
Aspecto
Heterogéneo: Si es recién emitida
Homogéneo: Pasados 30 minutos
(licuefacción)
7,5 – 8,3 Según Joel
7,35 – 7,5 Según Ganong
Se debe depositar 1 gota de semen y leer
despues de 30 segundos
pH > 8: Infección seminal o alteración prostática
pH < 7,2: Déficit funcional de la vesícula seminal
Viscosidad
Con una varilla de agitación de
debe introducir en la muestra y
quitarla para que forme el hilo.
3 – 6 ml. Hasta 15 ml.
Opalescente

10. FUNDAMENTO
Técnica: Colocar entre cubre y portaobjeto, una gota de
semen y una gota de colorante y se observa al
microscopio dentro de las 2 primeras horas.
La eosina es un colorante que sólo tiñe a las
células muertas.
Valores Normales: - Espermios muertos coloreados de 0 – 5%.
- Espermios vivos inmóviles no coloreados hasta 40%.
- Espermios vivos móviles no coloreados 60% o más.

11. Cálculo: Para obtener la concentración de espermios se
multiplica el total de espermios contados por 1000.
Dilución: 100 ul: 900 ul de solución de macomber y
saunders
Técnica Macomber y Saunders: Después de la
licuación del semen, con una pipeta para
recuento de glóbulos blancos se aspira semen
hasta la marca 11, se homogeniza y se carga la
cámara de Neubauer.
Valores Normales: Hiperespermia ………………………… 120 – 300 millones/𝒄𝒎𝟑
Normoespermia ………………………… 60 – 120 millones/𝒄𝒎𝟑
Hipoespermia ………………………… 30 – 60 Millones/𝒄𝒎𝟑
1000 𝑥 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑥 𝑛° 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑥 𝑝𝑟𝑜𝑓𝑢𝑛𝑑𝑖𝑑𝑎𝑑
𝑠𝑢𝑝𝑒𝑟𝑓𝑖𝑐𝑖𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎

12. Técnica:
1.- uso de guantes obligatorios, luego depositar una gota de semen sobre el portaobjeto y con un cubreobjeto homogenizar la
muestra, realizar un extendido con el semen y dejar que se seque.
2.- Preparar el Giemsa diluido ( 2 gotas de Giemsa en 1ml de agua destilada.
3.- Una vez seco, cubrir el frotis con 15 – 20 gotas de May Grunwald. Dejar reposar por 3 minutos.
4.- Agregar 15 – 20 gotas de agua destilada, mezclar, soplar y dejar reposar 1 minuto. Luego botar el liquido del frotis.
5.- Agregar el Giemsa diluido y dejar reposar por 15 minutos.
6.- Lavar el extendido con agua destilada o corriente, cuidando de que el flujo de agua no sea abundante y no escurra
directamente sobre el extendido, ya que puede desprenderse completamente.
7.- Dejar secar en forma inclinada.
La morfología del espermio se valora
mediante recuentos diferenciales de los
tipos de espermatozoides morfológicos
normales y anormales de las
extensiones teñidas, el semen normal
contiene entre un 20 – 30% de formas
anormales.

18. MOVILIDAD
- Movilidad espermática: - movilidad inmediata a la hora (80% de movilidad)
- movilidad a las 2 horas
- movilidad a las 8 horas
- movilidad a las 16 horas
- movilidad a las 24 horas (La movilidad disminuye
al10%)
- El otro criterio a observar: A la hora y a las 3 horas

19. MOTILIDA
D
Tipo a: Movilidad rápida y progresiva
Tipo b: Movilidad progresiva lenta o perezosa
Tipo c: Movilidad no progresiva
Tipo d: Inmóvil
Grado 0: Espermios inmóviles
Grado I : Espermios con movimiento pendular sin
movimiento
Grado II: Espermios con movimiento pendular con
desplazamiento
Grado III: Espermios con movimiento progresivo lento
Grado IV: Espermios con movimiento progresivo rápido
Donde la suma del grado III y IV debe ser mayor al 50%
(Rango Normal)
Normal:50% de
los
espermatozoides
con movimiento
tipo a + b

20. PROCEDIMIEN
TO
• 50uL de muestra
• Porta atemperado a 37°C
• Se deja estabilizar unos 60 segundos
• Observamos a 100 aumentos
• La muestra homogénea
• Se pasa a 400x enfocando
• Y a la hora se hará el directo, movilidad
y motilidad
• Se contaran entre 100 a 200 células

21. - Se sellan los extremos de los tubos y se colocan a 37°C, anotando el tiempo inicial.
- Se observan cada 5 minutos hasta que comience la decoloración y se continua hasta la decoloración total.
- Se informara el tiempo inicial y el tiempo de decoloración total.
- Valor normal: La fertilidad optima de decoloración se produce en 15-30 minutos, y
casi en una hora cuando es moderada.
- El azul de metilo debe prepararse en el momento de usarse, debido a su mala
conservación.
Reactivos Testigo Problema
Azul de metilo 0,01% 1 ml 0,5 ml
Muestra -- 0,5 ml

22. FUNDAMENTO
Valores Normales: 200 – 400 Mg%
- Se agita y se coloca en baño maría por 8 minutos a 80°C.
- Se enfrían los tubos y se lee en el fotocolorímetro. Se hace la comparación con el tubo más próximo,
restándoles el valor del blanco.
- Pipetear el ácido clorhídrico al 30% bajo campana y con propipeta
100 mg% 200 mg% 400 mg%
Reactivos/Bateria Blanco Problema Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3
Sol. De Esperma -- 1 ml -- -- --
Agua Destilada 1 ml -- -- -- --
Sol. Testigo de Fructosa -- -- 1 ml 1 ml 1 ml
Sol. De Resorcina 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
Ácido Clorhidrico 3 ml 3 ml 3 ml 3 ml 3 ml
Solucion madre de 1 g%

23. Fructosa % ABSORBANCIA
0 0
100 0,07
200 0,13
400 0,27

25. Se basa en que la hidrolisis del P-nitrofenilfosfato produce la
liberación del P-nitrofenol, en medio alcalino/acido
desarrollando un color amarillo. Como la fosfatasa de la
esperma es mayor que la sanguínea deben aplicarse diluciones
a la muestra.
- Mezclar por inversión y leer al
fotocolorímetro.
reactivos blanco problema
sustrato tamponado 0,5 ml 0,5 ml
incubar a 37°C por 3 minutos
dilucion de esperma 0,1ml
incubar a 37°C por 30 minutos y retirar
NaoH a 0,02N 5ml 5ml
dilucion de esperma 0,1ml

26. Valores Normales
- 55.000 – 137.000 mUI/mL.
- 1.000 – 2.500 UKA/ mL.
- Recordar que para construir la curva 0,1 miliMol = 167 mUI/L; que es igual a 100 microMoles = 167 mUI/L.
- Luego se debe interpolar la absorbancia de la muestra en la curva, el valor de la interpolación debe multiplicarse por 1000, debido a la dilución.
Blanco Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5
Sol. Estandar de P-nitrofenol -- 0,5 ml 1 ml 2 ml 3 ml 4 ml
Hidroxido de Sodio 0,02N 5 ml 4,5 ml 4 ml 3 ml 2 ml 1 ml
uMoles de P-nitrofenol/ml 0 uMoles 0,05 uMoles 0,1 uMoles 0,2 uMoles 0,3 uMoles 0,4 uMoles