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Parasitologia clinica
- 1. Introducción a la Parasitología Clínica Técnicas de Laboratorio II 2014
- 2. cultativa ción Relaciones entre individuos Ambos organismos se beneficianMutualismo Sólo uno se beneficia, el otro no ComensalismoSimbiosis se beneficia ni se perjudica Parasitismo Asocia entre 2 Uno se beneficia Parásito Ser vivo que temporal o permanentemente vive a expensas de otro organismo de ≠ especie, obteniendo nutricion y morada al cual le puede ocacionar daño. Posee dependencia metabólica total y está en contacto íntimo con el H organismos de ≠ especie estrecha y perdurable capaz de modificar el comportamiento fisiológico de uno o ambos organismos El otro puede o sufrir daño no Hospedador Organismo que alberga y da alimento a otro organismo Facultativa Obligatoria
- 3. o o P ¿Es lo mismo parasitismo y parasitosis? ≠ ParasitosisParasitismo Interacción entre 2 individuos donde uno de ellos se beneficia y el otro puede o no sufrir daño Enfermedad infecciosa producida por parásitos (protozoos, artrópodos y helmintos)
- 4. Tipo de parasitismo según… >Obligatorio >Facultativo >Accidental >Temporal >Periódico >Permanente >Ectoparásito >Endoparásito Extracelular Intracelular Organos o tejidos
- 5. Clasificación simplificada Sarcodina Mastigosphora SEUDOPODIOS Sarcomastigosphora FLAGELOS Protista CiliophoraProtozoa CILIAS E U K A R I O T A COMPLEJO APICAL Apicomplexa Fungi Aphasmidea Phasmidea Nematelmintos Plantae Cestodes Trematodes Platelmintos Animalia Metazoa Arachnida Insecta Crustacea Artrópodos
- 6. uce e en el H sexual y/ asexual • P Cumpl ciclo evol formas i • H Par excepcte • P alcanza la madurez y se reproduce sexualmente • H de mayor evolución filogenética • P no alcanza madurez Sexual o se multiplica asexualmente en el H Cumple parte de su ciclo evolutivo dando formas infectivas Definitivo Intermediario Habitual Accidental • Es el H comúnmen parasitado H. Pasitado Excepcionalmente No permite desarrollo del ciclo Desarrolla igual que en HD u HI
- 7. Ciclo de vida=Ciclo biológico=Ciclo evolutivo Conjunto de etapas y transformaciones desarrollo que experimenta un P en su Directo o monoxénico Indirecto o heteroxénico P requiere un solo H para completar su ciclo P requiere más de un H para completar su ciclo
- 8. Transmisión del parasitismo Conjunto de fenómenos a través de los cuales un P pasa de una fuente o reservorio a un H susceptible Depende de… >Fuente de Infección >Modo de transmisión >Estadío infectivo >Susceptibilidad del H Tipos de transmisión >Directa (vertical/iatrogénica) >Indirecta A partir de la cual un H susceptible adquiere el P. Por ej: otros individuos (contacto directo), autoinfestación, a partirFuente de objetos, suelos, agua, alimentos contaminados, animales, artropodos contaminados, etc. Hábitat (lugar o ser viviente) donde el P vive se multiplica y/o crece permitiendo su sobrevida en la naturaleza. Sirve como fuente de infección para H susceptibles. GARANTIZA LA SUPERVIVENCIA DEL P. ≠ Reservorio
- 9. Transmisión del parasitismo • Inhalación Respiratoria Cutánea Vías: Oral Parenteral Vertical Fuente Modo de transmisión • Vertebrado • Transplante/ tranfusión • Contacto con heces, mordidas, accidente de laboratorio • Ingesta predación • Transmisión placentaria/perinatal/ lactancia • Autoinfección •Invertebrado • Picadura • Ingesta • Contacto •Elemento inerte • Contacto con algún elemento como: Sábanas Utensillos • Ingesta de alimentos y agua
- 10. Transmisión del parasitismo Pasa por el medio ambienteAbierta Dispersión en la naturaleza No pasa por el medio ambienteCerrada Busca a su H por medio de moléculas orientativas y receptores que las perciben Llega mediante alimentos o picaduras Activa Localización de un nuevo H Pasiva Mecanismo Vías de infección Modo Lugar •Activa: llega por sus propios medios F A S E S Contacto con el H Penetración •Pasiva: P no realiza acción alguna •Ectoparasitos! No penetran, se FIJAN Establecimiento de un ecotopo específico en el H Multiplicación y diferenciación/ reproducción sexual Barreras bióticas Sistema Inmune pH, PO2 …Barreras abióticas Salida del P o sus ptos para su propagación
- 11. Vector Invetebrado artrópodo capaz de transmitir P entre un vertebrado infectado y otro sano Es el HD u HI. Es la principal Mecánico Artrópodos que transportan pasivamente al P. La asociación es inespecífica, se debe a la contaminación del artrópodo Biológico Artrópodo hematófago que transmite al P en su alimentación. Presenta asociación íntima y específica con el P. El P realiza parte de su ciclo. fuente del P Multiplicativo En él el P se diferencia y divide Evolutivo En él el P sólo se diferencia.
- 12. Especificidad Parasitaria Restricción de desarrollo del P en ≠ H Oligoxénica ≠ especies, =familia Estenoxénica ≠ especies, =género Eurixénica ≠ familias Oioxénica 1 sola especie
- 13. Más definiciones… Zoonosis • Enfermedad transmisible naturalmente entre animales vertebrados y el hombre, siendo = o ≠ el ciclo en ellos. Ambos parasitados! • Condición en la cual el número y distribución geográfica de una enfermedad permanecen estables con fluctuaciones dentro de límites esperables. Endemia Epidemia • Aumento del número de casos en una zona geográfica determinada en un tiempo límitado. Parasitosis cosmolpolitas Parasitosis regionales • Se encuentran distribuidas ampliamente ya que su existencia se halla ligada a la presencia del humano (ciclo directo) o la presencia del humano y sus otros hospedadores también cosmopolitas (ciclo indirecto) • Su existencia no depende sólo del hombre sino de la presencia temporal o permanente de otros factores (físicos, biológicos o sociales) que hacen posible la vida del P y la progresión en su ciclo.
- 14. Más definiciones… • P que equivoca su hábitat dentro del H y se ubica en un sistema u órgano que no le permite desarrollarse. Parásito errático Hiperparasitismo • Parásitos que parasitan otros parásitos Multiparasitismo o superparasitismo • Cuando un H se encuentra parasitado por 2 o más especies diferentes Poliparasitismo • Presencia de gran carga de un P en un H Seudoparásitos • Elementos de diversa naturaleza confundibles con P • Helminto que requiere que su huevo pase por el medio ambiente para madurar y ser infectivo (huevo larvado) Geohelminto
- 15. Protista Hongos Animalia Planta Metazoa Protozoos (heterótrofos) Algas (autótrofos) Mohos limosos (Quimio-heterótrofos: Digestión extracelular y/o absorción de sustancias del ambiente) Procariotas (Monera) Eucariotas Seres vivos
- 17. Protozoarios Definición: organismos eucariotas unicelulares que pueden replicarse por mecanismos sexuales o asexuales. 64.000 especies de las cuales 30-40 son patógenas para el hombre • Fagocitosis o pinocitosis • Citostoma o peristoma • Difusión o transporte facilitado Alimentación • Flagelos • Cilias • Pseudópodos Locomoción • Flagelados • Amebas • Ciliados Dimorfismo (trofozoito/quiste)
- 22. Dimorfismo (flagelados) Trofozoíto Se reproducen en el hospedador Son lábiles en ambientes desfavorables Secretan pared muy resistente para generar quistes (supervivencia y diseminación) Quiste Inmóviles y no replicativos Resistentes Amebas tienen enquistamiento inducido por tasa reproducción
- 25. Reproducción Sexual material genético de 2 ancestros diferentes Asexual Progenie recibe material genético de 1 solo ancestro - Conjugación- Fisión binaria - Fusión- Esquizogonia
- 27. Enteropárasitos
- 28. Amebas: Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar, Entamoeba hartmanni, Entamoeba coli, Entamoeba polecki, Endolimax nana, Iodamoeba butschlii, Blastocystis hominis. Flagelados: Giardia lamblia, Chilomastix mesnili, Dientamoeba fragilis, Trichomonas hominis, Enteromonas hominis, Retortamonas intestinalis Ciliados: Balantidium coli Coccidios, microsporidios: Cryptosporidium parvum, Cyclospora cayetanensis, Isospora belli, Sarcocystis hominis, S. suihominis Nematodes: Ascaris lumbricoides, Enterobius vermicularis, Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Strongyloides estercoralis, Trichostrongylus spp., Trichuris trichiura, Capillaria philippinensis Cestodes: Diphyllobotrium latum, Dipylilium caninum, Hymenolepis nana, Hymenolepis diminuta, Taenia solium, Taenia saginata Trematodes: Fasciola hepatica, Fasciolopsis buski, Echinostoma ilocanum, Heterophyes heterophyes, Metagonimus yokogawai ProtozoosHelmintos Enteropárasitos
- 29. Única muestra en SF que debe mantenerse refrigerada y ser analizada antes de las 3 hs. Ventaja: Identificación de formas vegetativas de P Desventajas. Debe ser procesada rápidamente. Protozooarios: fases negativas/descarga cíclica de quistes -> falsos negativos Recolección de 5 a 6 muestras, una muestra por día. Formol 5% - 10% (formalina); PVA (alcohol polivinilico) (PVA+EtOH+MgCl2 o ZnSO4); SAF (solución amortiguada de formol) (sodium acetate–acetic acid-formalin); MIF (merthiolate-Iodo-formol); PAF (fenol-EtOH-formol); líquido de Schaudinn (HgCl2, EtOH, AcH). Ventajas. No requiere procesado inmediato. Se cubre fases negativas de protozoarios. Desventaja. No se detectan las formas vegetativas de los protozoarios. Seriada/fijada Frescas Muestras
- 30. Examen directo Técnicas de enriquecimiento (centrifugación o sedimentación; flotación; métodos bifásicos) Métodos Especiales (Baerman; Harada-Mori; Graham; eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo) Coloraciones permanentes (colorante tricrómico de Gomori; hematoxilina férrica; Ziehl Nelsen; Ziehl Nelsen modificada) Tinciones-coloraciones transitorias (lugol; solución iodoidura de D’Antoni; MIF; azul de metileno) Técnicas
- 31. Identificación de P por su forma y motilidad Examen directo Montaje húmedo directoFrotis del material disuelto en SF Pero… para la identificación detallada hace falta técnicas de coloración Coloraciones transitorias: Lugol; Sn de Iodo-iodurada de D’Antoni MIF Permiten observar las formas parasitarias con mayor detalle Hymenolepis nana Mueren los trofozoítos Strongyloides stercoralis Observación de trofozoítos (40x), quistes (40x), huevos (10x), larvas (10x)
- 32. Fijación de la muestra, tinciones…
- 33. Técnicas de enriquecimiento (centrifugación o sedimentación; flotación; métodos bifásicos) Test de sedimentación o centrifugación Líquidos menos densos que los elementos parasitarios P quedan en el sedimento Desventaja: queda mucho residuo con la muestra a analizar
- 34. Técnicas de enriquecimiento (centrifugación o sedimentación; flotación; métodos bifásicos) Test de flotación Líquidos más densos que los elementos P P quedan en la superficie de los líquidos Variantes: ** Faust : ZnSO4. ** Willis: NaCl sat, dejando decantar 30–45 min. ** Willis–Molloy: NaCl sat, llenando el tubo hasta el borde con la Sc sat y colocando un portaobjetos en la superficie del tubo, dejando decantar 30-45 min. ** Sheather: Sc sat de sacarosa, centrifugando 1 min a 1500 rpm o siguiendo la técnica de Willis Molloy.
- 35. Técnicas de enriquecimiento (centrifugación o sedimentación; flotación; métodos bifásicos) Métodos bifásicos Métodos bifásicos: Charles - Barthelemy (Ácido cítrico – formol – éter)
- 36. Métodos Especiales (Baermann; Harada-Mori; Graham; eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo) Baermann Strongyloides stercolaris
- 37. Métodos Especiales (Baermann; Harada-Mori; Graham; eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo) Baermann Se basa en el termotropismo de las larvas. H2O 40-42°C 1-3 hs Separación de las larvas de las heces. Recuperación de larvas vivas de nematodes (Strongyliodes spp. y fitoparásitos) Strongyloides stercolaris – larva rhabditiode
- 38. Métodos Especiales (Baermann; Harada-Mori; Graham; eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo) Harada-Mori Basada en el hidrotropismo de las larvas. Cultivo de larvas filariformes: Strongyloides spp., Necator spp., Ancylostoma spp.
- 39. Métodos Especiales (Baermann; Harada-Mori; Graham; eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo) Test de Graham Detección de huevos de Enterobius vermicularis (oxiurus). Toma de muestra con cinta de celulosa o gasa, a la mañana antes de levantarse e higienizarse. Al menos 4 muestras seriadas. Cinta: sobre portaobjeto. Gasa: en Sc fisiológica, recuperando el sedimento por centrifugación.
- 41. Métodos Especiales (Baermann; Harada-Mori; Graham; eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo) Test de eclosión de huevos Schistosoma spp.
- 42. Métodos Especiales (Baermann; Harada-Mori; Graham; eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo) Test de eclosión de huevos Determinar viabilidad de huevos de Schistosoma spp. (miracidios vivos) Basada en el fototropismo positivo de los miracidios liberados por los huevos. Muestra: orina o materia fecal.
- 43. Métodos Especiales (Baermann; Harada-Mori; Graham; eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo) Recuento de huevos Seguimiento de la evolución de una infestación, eficacia de un tratamiento. Estimación de la carga parasitaria en el caso de: Ascaris lumbricoides Trichuris trichiura Uncinarias Stoll Kato Deposiciones de 24 hs 4g heces + 15 ml NaOH Recuento en 150 µl Deposiciones de 24 hs 50 mg en porta - cubrir con papel celofán c glicerina, agua y verde de malaquita. Dejar 1h para que se aclare# huevos contados x 100 = #huevos/4 g de heces
- 44. Métodos Especiales (Baermann; Harada-Mori; Graham; eclosión de huevos; rto de huevos; cultivo) Técnica de cultivo Cultivo de larvas filariformes: Strongyloides spp., Necator spp., Ancylostoma spp. Imita las condiciones de la naturaleza.
- 45. Coloraciones permanentes (colorante tricrómico de Gomori; hematoxilina férrica; Ziehl Nelsen; Ziehl Nelsen modificada) Colorante tricrómico de Gomori Tinción de muestras frescas y fijadas. Observaciones: Fondo: verde, Citoplasma de protozoarios: azul – púrpura Cromatina: rojo o rojo - púrpura Entamoeba histolytica – dispar - quistes Entamoeba histolytica – GR en el citoplasma - trofozoíto Entamoeba coli - quiste
- 46. Coloraciones permanentes (colorante tricrómico de Gomori; hematoxilina férrica; Ziehl Nelsen; Ziehl Nelsen modificada) Hematoxilina férrica de Heindenhain Método largo y engorroso. Observaciones: Tinción azul grisácea Núcleos e inclusiones más oscuras. Tinción de muestras frescas y fijadas. D. fragilis * Hematoxilina 5% p/v, EtOH 50%v/v, sulfato de amonio ferroso 5% p/v, sulfato de amonio férrico 5%p/v, HCl cc 5%v/v. D. fragilis trofozoítos de Giardia intestinalisQuistes de Entamoeba histolyticaI. buetschlii trofozoíto
- 47. Tinciones-coloraciones transitorias (lugol; solución iodoidura de D’Antoni; MIF; azul de metileno) Lugol Entamoeba histolytica - quiste E. coli - quiste Blastocystis hominis - quiste
- 49. Cestodes • Los cestodes son gusanos platelmintos que tienen forma acintada • Son hermafroditas y no poseen aparato digestivo • El alimento lo absorben a través de la cutícula externa • La cabeza o Escolex es el órgano de fijación, poseen ventosas y en ocasiones ganchos • Ciclofilideos: losproglotides no presentan orificios de postura • Pseudofilideos: los huevos se eliminan al exterior en forma inmadura, a través de un orificio de postura
- 50. Taenias spp
- 53. Nematodes • Son gusanos cilíndricos • Tienen sexo separados: Dioicos, en general los machos son mas pequeños que las hembras • La parte posterior de los machos termina en forma enrollada, las hembras en forma recta • El gusano adulto tiene cutícula • Tienen migración larval a través de los tejidos corporales
- 55. necator americanus y ancylostoma duodenale