Repaso de Practica Amebas FCS-UC Bioanálisis -Parasitología 4°año Amebas Patógenas Amebas de Patogenicidad Discutida Amebas de Vida libre

1. Amibas
AMEBIOSIS
AMIBAS DE PATOGENICIDAD DISCUTIDA
AMIBAS DE VIDA LIBRE
Lcda. Oriana Mundaray

2. Amebiosis/Amibiasis
Becerril 4ta Edición
Infección Humana!
Producida por el protozoario Entamoeba histolytica y afecta sobre todo al intestino grueso, aun así
puede dañar otras regiones del cuerpo.
Nombre científico: Ent- “intestino”; ameba-“amoeba”, hist- “tejido” y lisis- “destrucción”, y por sí
solo explica la naturaleza de la enfermedad que provoca.
El trastorno implica una destrucción de los tejidos intestinales.
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3. ENTAMOEBAS
MORFOLOGÍA

4. Estadios Amibas
Amibas Morfologia
Trofozoito (Forma vegetativa)
◦ Capacidad alimentación,
multiplicación, invasión,
locomoción.
◦ Membrana plasmática fina y frágil.
◦ Emite pseudópodos
Quiste(Forma de resistencia)
◦ Forma parasitaria infectante.
◦ Pared gruesa
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5. Evolución Amibas
Amibas Morfología
Cuando el trofozoíto se encuentra en
un ambiente desfavorable, se
desprende de la mucosa e inicia el
enquistamiento en la luz del intestino
grueso.
Trofozoítos
Adquieren una forma esférica, se
deshidratan y excretan parte de las
reservas alimenticias presentes en
vacuolas digestivas.
Pre-quiste
Quiste maduro tetranucleado
que se elimina con las heces.
Quiste
Se reproducen sus núcleos,
sintetizándose otro a partir del que
posee el trofozoíto . Presentan
divisiones nucleares sucesivas.
Quiste Inmaduro
Estadios
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6. Evolución Amibas
PARASITOLOGÍA - ESCUELA DE BIOANALISIS FCS UC
Amibas Morfología
Infectante

7. Trofozoítos
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Ectoplasma
Núcleo
Cariosoma
Cromatina
periférica
Endoplasma
Amibas Morfología: Entamoeba histolytica

8. ◦ Un solo núcleo
◦ Cromatina periférica adherida membrana nuclear
◦ Cariosoma puntiforme, localización central
◦ Presencia hematíes y células fagocitadas
◦ 12 a 20 micras.
Entamoeba histolytica
◦ Un solo núcleo
◦ Cromatina periférica adherida membrana nuclear
◦ Cariosoma puntiforme, localización central
◦ 12 a 20 micras.
Entamoeba dispar/ moshkovskii
Morfología E. histolytica/ dispar/moshkovskii: Trofozoítos
No se puede distinguir mediante microscopía óptica
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8
Amebiasis. (2019, octubre 15). Cdc.Gov. https://www.cdc.gov/dpdx/amebiasis/

9. E. histolytica/dispar/moshkovskii
Morfología Amibas: Quiste
La fase de Entamoeba histolytica que resiste la desecación y temperatura menor a 37 C°es el quiste, éste
representa la fase infectante del parásito. Los quistes tetranucleados contaminan alimentos y bebidas.
1 a 4 núcleos
Cromatina periférica (fina,
regular)
Cariosoma puntiforme,
localización central
-Presencia cuerpos
cromatoidales (alargados,
forma bastón, extremos
redondeados)
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10. Morfología Amebas
Indistinguibles por microscopia óptica
Complejo
Entamoeba histolytica
E. dispar
E. moshkovskii
Trofozoíto Prequiste
Quiste Maduro
Cariosoma
Glóbulo
Rojo
Membrana Plasmática
Ectoplasma
Endoplasma
Cromatina Periférica
Pared
Quística
Núcleos
Vacuolas
De Glucógeno
Cuerpos Cromatoides
Núcleos
Pared
Quística
Quiste Inmaduro

11. Morfología E. hartmanni
Trofozoíto
• Un solo núcleo
• Cromatina periférica adherida (granos finos,
distribución regular)
• Cariosoma puntiforme, localización central
• 5 a 10µm
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12. E. gingivalis
Cariosoma puntiforme, localización
central
Un solo núcleo (2-4 µm)
Cromatina periférica (fina, regular)
5-35 µm
Diámetro
Frecuente casos mal aseo bucal, placa
bacteriana e infecciones bucales.
Ameba comensal cavidad bucal
Carece forma quística
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Morfología Amibas: Trofozoítos

13. Entamoeba coli
Morfología Amibas: Trofozoítos
Cromatina gruesa e irregular
Cariosoma grande excéntrico
Patogenicidad Discutida
Núcleo
Granular Grueso
Vacuolado
Ausencia de Hematíes y células
fagocitadas
Citoplasma
Cortos y Romos
Movimiento no direccional
Pseudopodos
15-50µm
Diámetro
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BIOANALISIS FCS UC

14. Cromatina Periférica
Entamoeba coli
Morfología Amibas: Quiste
 4 a 8 núcleos (+ 16)
 Cromatina periférica (gruesa, irregular)
Cariosoma grande y excéntrico
Diámetro: 10-35 µm
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15. Endolimax nana
Morfología Amibas: Trofozoíto y Quiste
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o 6 a 15 micras
o Un sólo núcleo
Quiste
o Forma ovalada
o 4 núcleos
o 5-10 µm
o Ausencia cromatina periférica
o Cariosoma excéntrico
o Ausencia cuerpos cromatoidales
Trofozoíto

16. Iodamoeba bütschlii
Morfología Amibas: Trofozoíto y Quiste
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Trofozoíto
Quiste
- Ausencia cromatina periférica
- Cariosoma grande y excéntrico
- 1 a 2 vacuolas glucógeno
-5-20µm
-Gránulos acromáticos (+/-)
-8-20µm
-Gránulos acromáticos(+)
-Movimiento lento

17. Trofozoítos-Núcleo (Cromatina)
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Amibas Morfología

18. Clínico epidemiológico:
Disentería
Dolor abdominal
Fiebre
Diagnóstico diferencial:
Disentería bacilar
Balantidiasis
Carcinoma colon
Colitis ulcerativa
Enteritis
Laboratorio:
Demostración parásito
Métodos inmunológicos.
Diagnóstico amebiosis
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19. Fijadores: Schaudinn, Alcohol
Polivinílico (PVA)
Coloraciones permanentes:
Hematoxilina Férrica,
Tricrómica
Consistencia de la Muestra
Diagnóstico
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DEMOSTRACIÓN
PARÁSITO
:
Selección del método depende de la consistencia de la muestra de
heces.
Líquida
Directo
( SSF-Lugol)
Coloraciones
Permanente
Blanda, Pastosa,
Formada, Dura
Directo
( SSF-Lugol)
Concentración-
Flotación (Faust)

20. Diagnóstico amebiosis
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DEMOSTRACIÓN
PARÁSITO
Demostración
parásito:
Directo Fresco y Coloraciones
Permanentes
Solución de Quenzel
Aspirado úlceras
intestinales
• Rectosigmoidoscopia
Diagnóstico

21. Diagnóstico
Entamoeba histolytica/dispar

22. Trofozoíto en Solución Salina
Desplazamiento unidireccional
La muestra debe procesarse lo
más pronto posible (Máximo 30
minutos luego de consignada la
muestra al laboratorio)
Entamoeba histolytica/dispar
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DEMOSTRACIÓN
PARÁSITO
Directo
Pseudópodo
unidireccional
Diagnostico: Trofozoíto

23. Entamoeba histolytica/dispar
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DEMOSTRACIÓN
PARÁSITO
Directo-Coloración Permanente
Eritrocitos
Tinción Quensel
Trofozoíto Entamoeba histolytica
Tinción Hematoxilina-Férrica
Trofozoíto Complejo E. histolytica/dispar
Diagnostico: Trofozoíto

24. Trofozoíto
Hematoxilina férrica
Desplazamiento unidireccional
Pre-quiste
Hematoxilina férrica
Entamoeba histolytica/dispar
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DEMOSTRACIÓN
PARÁSITO
Coloraciones Permanente
Quiste inmaduro
Tinción Hematoxilina férrica
Diagnostico: Trofozoíto, Pre-Quiste, Quiste Inmaduro

25. Lugol
Entamoeba histolytica/dispar
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DEMOSTRACIÓN
PARÁSITO
Directo
Diagnóstico: Quiste Maduro
Complejo
Entamoeba histolytica/dispar

26. Diagnóstico
Amebas De
Patogenicidad Discutida

27. Quiste
Directo (Lugol)
Trofozoíto
Hematoxilina férrica
Desplazamiento irregular
Entamoeba coli. Amebas comensales (Patogenicidad Discutida)
Diagnóstico: Trofozoíto y quiste
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DEMOSTRACIÓN
PARÁSITO
Coloraciones Permanente-Directo

28. Iodamoeba bütchslii. Amebas comensales (Patogenicidad Discutida)
Diagnóstico: Quiste
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DEMOSTRACIÓN
PARÁSITO
Directo: Lugol

29. Trofozoíto
H-F
Quiste
TRICRÓMICA
Trofozoíto
TRICRÓMICA
Quiste
H-F
I. bütchslii E. nana
Amebas comensales (Patogenicidad Discutida)
Diagnóstico: Trofozoíto y quiste
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DEMOSTRACIÓN
PARÁSITO
Coloraciones Permanente

30. Trofozoíto
Entamoeba coli
Trofozoíto
Entamoeba histolytica
Coloración Tricrómica
Diferencial Amebiosis
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DEMOSTRACIÓN
PARÁSITO
Coloraciones Permanente
Diagnóstico: Trofozoíto

31. 1
2
3
4
5
6
Diagnóstico
Amebiosis
Método de
Faust:
Se utiliza la solución de sulfato de zinc
al 33% p/v (Flotación)
Técnica de concentración por flotación
Punta de pipeta la porción correspondiente
al menisco.
Se utiliza la solución de sulfato de zinc al
33% p/v
Útil para la visualización de quistes y
huevos livianos.
Se utiliza la fuerza centrífuga
Se toma con asa de platino
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32. Metodo de Faust
Diagnóstico: Tecnica
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DEMOSTRACIÓN
PARÁSITO
2 a 3 min
2000 rpm
Volcar
sobrenadante
Solución de ZnSO4
(33%) (d: 1,180)
Gota de Lugol
100x / 400x
Filtrado
H2O
2 a 3 min
2000 rpm
Sacar de la
superficie
con ansa

33. Metodo de Faust
Diagnóstico: Tecnica
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DEMOSTRACIÓN
PARÁSITO

34. MÉTODOS
INMUNOLÓGICOS
- Captura coproantígenos
- ELISA indirecto
- Inmunobloting
- Inmunofluorescencia
- Reacción fijación
complemento
-Contrainmunolectroforesis
Antígenos
(heces)
Anticuerpos
(Suero)
Sólo da positivo
en amibiasis
invasiva
Es capaz de diferenciar entre E. histolytica y E. dispar
Métodos Indirectos
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Diagnóstico: Tecnica

35. Captura de coproantígenos
Placa ELISA
Anticuerpo
no marcado
Substrato
Producto
Anticuerpo
marcado Enzima
Antígeno
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MÉTODOS
INMUNOLÓGICOS Diagnóstico: Tecnica

36. AMIBAS
DE VIDA LIBRE

37. Morfología N. fowleri
Trofozoíto (Ameboide)
• Forma cilíndrica u oval
• 22 x 7 micras
• Pseudópodos lobópodos
• Cariosoma grande y central
Forma Flagelada
• Piriforme con dos flagelos largos en
la porción más ancha, con los que se
mueve formando círculos.
Quiste
• Un solo Núcleo .
• Cariosoma Grande y central .
• Aspecto estrellado.

38. Trofozoíto
Quiste
Forma ovalada
Pseudópodos filópodos
Cariosoma central
12 y 56 μm
Un solo núcleo
Aspecto estrellado
8 y 29 μm
Morfología Acanthamoeba spp.
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39. Meningoencefalitis amebiana Primaria (MAP)
Muestra: Líquido
cefalorraquídeo
Aumento presión LCR
Aspecto turbio
Aumento Polimorfonucleares
Aumento proteínas (albúmina)
Disminución glucosa
Presencia amebas
Diagnóstico N. fowleri
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40. Diagnóstico N. fowleri Cultivo en Medio Chinchilla
liquido
•Enriquecido con Escherichia coli.
• Positividad a los 8 días post cultivo.
Prueba de flagelación
• A temperatura ambiente (29-31 oC),
adicionando 3 mL de agua destilada
estéril a la superficie de las placas de
Agar, y pasando una espátula de
Drigalsky, se realiza examen al fresco(
Trofozoítos)
Ameba de Vida Libre Naegleria fowleri
Muestras Útiles Para
Diagnostico
LCR
Tejidos post mortem
Métodos Diagnostico
Recomendados
• Examen directo de LCR en fresco y con
Giemsa/Wright (Trofozoítos)
• Cultivo Xénico, con líneas celulares de
mamíferos y axénico.
• Test de Flagelación.
• Análisis Histopatológico morfológico y
acoplado a inmunofluorescencia e
inmunohistoquímica con Ac específicos.
• PCR de LCR y tejido.
Laspruebasserológicasnosondeutilidadporquelospacientessuelenfallecerantesde desarrollarunarespuestainmune detectable.

41. Trofozoítos N. fowleri
en LCR
Coloracion-Giemsa
Diagnóstico Meningoencefalitis amebiana primaria
Trofozoíto
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DEMOSTRACIÓN
PARÁSITO
Coloraciones Permanente

42. Queratitis ocular:
Muestra:
Raspado o biopsia córnea, lentes de
contacto y soluciones de limpieza de
lentes.
-Cultivo en medios específicos
-Láminas coloreadas
Diagnóstico Acanthamoeba sp.
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43. Diagnóstico
Amebas
Conservación

44. Schaudinn
Solución concentrada:
Cloruro de mercurio…………11,4 grs
Agua destilada………………..200 ml
Etanol 95%..............................100 ml
Solución trabajo:
Solución concentrada………..47 ml
Acido acético glacial…………3 ml
Almacenar en frasco ámbar
Diagnóstico Amebas: Consevación
Fijador

45. Alcohol polivinílico (PVA)
Diagnóstico Amebas: Conservación
Fijador
Solución concentrada:
Acido acético glacial……….5 ml
Glicerina……………………...1,5 ml
Solución Schaudinn……...….93,5 ml
Solución trabajo:
Solución concentrada………..100 ml
Alcohol polivinílico……………5 grs
Calentar a 75º C. Almacenar en frasco ámbar

46. Diagnóstico
Coloraciones
Permanentes

47. Diagnóstico:
Coloraciones
Permanentes
Hematoxilina férrica
Hematoxilina ……………………………10gr.
Estanol absoluto …………………….1000L
Solución Concentrada A
1
2 Sulfato ferroso de amonio.……10 gr.
Sulfato férrico de amonio ……10 gr.
Acido clorhídrico……………..….10 ml
Agua destilada…………………..1000 ml
Solución Concentrada B
Solución de trabajo
Solución concentrada A……15 ml.
Solución concentrada B …..15 ml.
3

48. Frotis en lámina
portaobjeto
Incubación Sol.
Schaudinn 12 h
a temp. amb
Yodo 3% -
Etanol 70%
5 min
Etanol 95%
5 min
Etanol 70%
5 min
H2O
destilada
10 min
FIJACIÓN HIDRATACIÓN
Sol. de
trabajo
5 min
H2O
grifo
5 seg
Núcleo
H2O
destilada
10 min
Etanol 70%
5 min
TINCIÓN
Medio de
montaje Cubreobjetos
Listo para
observar
Etanol 95%
5 min
Etanol
absoluto
5 min
Xileno
10 min
DESHIDRATACIÓN
MONTADO
Diagnóstico:
Coloraciones
Permanentes
Hematoxilina férrica

49. 1
2
3
4
5
6
Diagnóstico:
Coloraciones
Permanentes
Tricrómica
Cromotropo 2R
..........................………………………………………………………..0,6 gr.
Agua destilada
………………........………………………………………………………100mL.
Verde Claro 2R
………………………………………………………………………..…….0,15gr.
Verde Brillante FCF
……………………………………………………………………………...0,15 gr.
Acido fosfotúngistico
……………………………………..…………………………………………0,7gr.
Acido acético glacial
……………………………………………………………..………………….1mL.

50. Visualización
EN MICROSCOPIO
REPRESENTACIÓN DE LAMINAS EN EL LABORATORIO

51. Cariosoma
Endoplasma
Ectoplasma
Visualización
al
Microscopio
Complejo Entamoeba histolytica/ E. dispar.
Trofozoíto
Coloraciones Permanente:
Hematoxilina Férrica (H-F)

52. Visualización
al
Microscopio
Complejo Entamoeba histolytica/ E. dispar.
Quiste Inmaduros
Coloraciones Permanente:
H-F y Tricrómica
Cuerpos Cromatoides
Núcleos
Vacuola de Glucógeno
Tinción: Hematoxilina férrica
Tinción: Tricrómica
Núcleos

53. Visualización
al
Microscopio
Complejo Entamoeba histolytica/ E. dispar.
Trofozoítos
Coloraciones Permanente:
H-F
Entamoeba histolytica en corte de Hígado
a

54. Cariosoma
Nucleoplasma
Cromatina
Periférica
Tinción: Hematoxilina férrica
Tinción: Tricrómica
Entamoeba coli
Trofozoíto
Coloraciones Permanente:
Visualización
al
Microscopio

55. Entamoeba coli
Quiste
Coloraciones Permanente:
Más de 4
núcleos
Tinción: Hematoxilina férrica
Tinción: Tricrómica
Visualización
al
Microscopio

56. Endolimax nana
Trofozoíto
Coloraciones Permanente:
Visualización
al
Microscopio
Vacuolas alimenticias que contienen bacterias
Tinción: Hematoxilina férrica (100x)
Tinción: Tricrómica (100x+Zoom)

57. Endolimax nana
Núcleos:
de 1 a 4
Hematoxilina férrica (100X)
Trofozoíto-Quiste
Coloraciones Permanente
Directo
Visualización
al
Microscopio
Tinción: Tricrómica
Forma elíptica
La morfología nuclear es equivalente a la observada en el
trofozoíto
Directo SSF
Directo SSF

58. Endolimax nana vs. Entamoeba coli
Quiste
Directo, SSF
Visualización
al
Microscopio
Endolimax nana
Entamoeba coli

59. Iodamoeba bütschlii
Trofozoíto
Coloraciones Permanentes
Visualización
al
Microscopio
Cariosoma
central
Núcleo sin
cromatina
periférica
Tinción: Hematoxilina férrica
Tinción: Tricrómica

60. Visualización
al
Microscopio
Iodamoeba bütschlii
Quiste
Coloración Permanente
Directo
Vacuola
Vacuola
Tinción: Hematoxilina férrica
Lugol
Tinción: Tricrómica

61. Visualización
al
Microscopio
Entamoeba histolytica
Trofozoíto
Coloración Permanente (H-F)
Trofozoítos Entamoeba histolytica en tejido.

62. GRACIAS