citrato y malonato

1. INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
Práctica 13: Utilización de
carbohidratos y ácidos orgánicos

2. OBJETIVO
Realizar las pruebas bioquímicas para poner de
manifiesto las actividades metabólicas que llevan
acabo los microorganismos sobre algunos azúcares
y ácidos orgánicos que son útiles para su
identificación.

3. UTILIZACIÓN DE ÁCIDOS ORGÁNICOS
Agar citrato
de Simmons
Caldo
malonato
Incubación a
37°C por 24
hrs.
Azul de bromotimol
pH acido 6.0 pH neutro 6.9 pH alcalino 7.6

4. AGAR CITRATO DE SIMMONS
Composición
• Sulfato de magnesio
• Fosfato monoamónico
• Fosfato dipotásico
• Citrato de sodio
• Cloruro de sodio
• Azul de bromotimol

5. METABOLISMO DEL CITRATO
Se realiza en
bacterias
poseedoras de
citato permeasa
Ingresa a ciclo de
Krebs el cual para
metabolismo de
citrato es rápido
en la mayoría de
las bacterias
El desdoblamiento
del citrato involucra
una enzima que es
la citratasa (citrato
oxalacetato liasa).
Los productos en
el metabolismo
del citrato
dependen del pH
del medio .
Utilización de sales de
amonio como única
fuente de nitrógeno.,
las cuales son
degradadas a
amoniaco, lo cual
aumenta la alcalinidad
Citrato
Oxalacetato
+
acetato
Piruvato
+
CO2
pH ácido:
Principalmente
acetoína y lactato y
CO2
pH alcalino:
acetato + formato
.

6. RESULTADOS EN AGAR CITRATO DE
SIMMONS
Positivo (+): Crecimiento con un
intenso color azul en el pico de
flauta
Negativo (-): Ausencia de
crecimiento y ningún cambio en
el color (verde)

7. RESULTADOS PRÁCTICOS AGAR EN CITRATO
DE SIMMONS
Microorganismo Teórico Laboratorio 3 Laboratorio 4
Klebsiella pneumoniae
+ +
Escherichia coli
- - -
Bacillus subtilis
- - -
Salmonella typhi
+ + +
Shigella flexneri
- -
Staphylococcus aureus
- -
Pseudomonas
aeruginosa + +
Proteus vulgaris
+ +

8. CALDO MALONATO
Composición
• Sulfato de amonio
• Fosfato dipotásico
• Fosfato monopotasico
• Cloruro de sodio
• Malonato de sodio

9. METABOLISMO DEL MALONATO
El malonato es un inhibidor enzimático. Interfiere con la
oxidación del ácido succínico a ácido fumárico mediante la
inhibición de la enzima succínico deshidrogenasa.
La célula bacteriana debe contar con el ciclo del ácido
glioxílico, la célula regula la cantidad de acetil-CoA introducida en
el ciclo para su continuación, la cual es controlada por la enzima
isositratasa.
Los microorganismos no pueden crece a menos que puedan
fermentar o utilizar el malonato como única fuente de carbono.

10. RESULTADOS EN CALDO MALONATO
Positivo (+): Reacción
alcalina, cambio de color a
azul intenso.
Negativo (-): Sin cambio de
color o a color amarillo
(Fermentación de glucosa)

11. RESULTADOS PRÁCTICOS EN CALDO
MALONATO
Microorganismo Teórico Laboratorio 3 Laboratorio 4
Klebsiella pneumoniae
+ +
Escherichia coli
- - -
Bacillus subtilis
- - -
Salmonella typhi
- -
Shigella flexneri
- - -
Staphylococcus aureus
- -
Pseudomonas
aeruginosa - -
Proteus vulgaris
- -

12. Conclusión
Se realizaron las pruebas bioquímicas necesarias para
poner de manifiesto la capacidad de algunas bacterias
para metabolizar ácidos orgánicos como lo son el citrato
y el malonato, obteniendo en ambos laboratorios los
resultados tal y como los marca la bibliografía.

13. BIBLIOGRAFÍA
➢ MacFaddin, J. F. 1984. Pruebas bioquímicas para la identificación
de bacterias de importancias clínica. Editorial medica
panamericana. Mexico. Pág.. 92-97, 291-295