Practica nro 2 bioquimica

MANUAL DE PRÁCTICAS
Lic. Yesenia Zorrilla Gutarra
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PRACTICA DE
LABORATORIO NRO. 2
- DETERMINACIÓN DE
GLUCOSA
1. INTRODUCCIÓN
La glucosa es la principal fuente de energía para el metabolismo celular. Se obtiene
fundamentalmente a través de la alimentación, y se almacena principalmente en el
hígado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento de los niveles de
glucosa en sangre (glucemia). Para que esos niveles se mantengan y el
almacenamiento en el hígado sea adecuado, se precisa la ayuda de la insulina,
sustancia producida por el páncreas.
La glucosa es un azúcar que es utilizado por los tejidos como forma de energía al
combinarlo con el oxígeno de la respiración. Cuando comemos el azúcar en la sangre
se eleva, lo que se consume desaparece de la sangre, para ello hay una hormona
reguladora que es la insulina producida por el páncreas (islotes pancreáticos). Esta
hormona hace que la glucosa de la sangre entre en los tejidos y sea utilizada en forma
de glucógeno, aminoácidos, y ácidos grasos. Cuando la glucosa en sangre está muy
baja, en condiciones normales por el ayuno, se secreta otra hormona llamada
glucagón que hace lo contrario y mantiene los niveles de glucosa en sangre. Cuando
la insulina es insuficiente, la glucosa se acumula en sangre, y si esta situación se
mantiene, da lugara una serie de complicaciones en distintos órganos. Esta es la
razón principal por la que se produce aumento de glucosa en sangre, pero hay otras
enfermedades y alteraciones que también la provocan.
El tejido más sensible a los cambios de la glucemia es el cerebro, en concentraciones
muy bajas o muy altas aparecen síntomas de confusión mental e inconsciencia.

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El mantenimiento de la glucemia, o concentración plasmática de glucosa, en los
organismos superiores el fundamental para el funcionamiento de todos los órganos,
al ser la glucosa un metabolito energético principal.
La coordinación de los procesos metabólicos implicados en este cometido se lleva a
cabo por la relación insulina/glucagón. La ingestión de glucosa o sustancias que la
produzcan (almidón, fructosa, galactosa, proteínas, pero no grasas) va seguida, en
las personas sanas, por un aumento de la glucosa en sangre. Este aumento origina la
puesta en marcha del mecanismo regulador: aumento de la utilización de glucosa
(por glucólisis, entre otras), aceleración de la glucogenogénesis y disminución de la
glucogenólisis; todo ello ocurre principalmente mediante la secreción de insulina, una
hormona pancreática de tipo polipeptídico. En el caso de que la producción de
insulina esté disminuida, la glucosa no puede ser utilizada por las células, lo cual
ocasiona niveles elevados de glucosa en sangre (hiperglucemia); así ocurre en las
personas que sufren diabetes del tipo denominado "dependiente de insulina" o "tipo
1".
2. OBJETIVO:
 Capacitar al alumno para que conozca, maneje y determine el valor de la glucosa en
sangre, utilizando el análisis objetivo para la deducción de un resultado real.
3. PARTE TEÓRICA:
La glucosa es un glúcido o carbohidrato, más precisamente un monosacárido, la
estructura más sencilla dentro de los azúcares simples, presente en forma libre en
las frutas y la miel. Entre los carbohidratos de absorción rápida, la glucosa es la que
se absorbe más rápidamente.
La glucosa es una fuente importante de energía para la mayoría de las células del
cuerpo, incluidas las del cerebro. Los carbohidratos que se encuentran en las frutas,
los cereales, el pan, la pasta y el arroz se transforman rápidamente en glucosa en el
cuerpo, lo que eleva el nivel de dicho azúcar en la sangre.
Las hormonas producidas en el cuerpo llamadas insulina y glucagón ayudan a
controlar los niveles de azúcar en la sangre.
Es un examen que mide la cantidad de un azúcar llamado glucosa en una muestra de
sangre.
3.1. FORMA EN QUE SE REALIZA EL EXAMEN:

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Se necesita una muestra de sangre. Esto se realizará antes del procedimiento de la
glucosa a través de la venopunción o flebotomía.
3.2. PREPARACIÓN PARA EL EXAMEN:
Después de no haber comida nada (en ayunas) durante 7-8 horas.
3.3. LO QUE SE SIENTE DURANTE EL EXAMEN:
Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor
moderado, mientras que otras sólo sienten un pinchazo o sensación de picadura.
Posteriormente, puede haber algo de sensación pulsátil.
3.4. RAZONES POR LAS QUE SE REALIZA EL EXAMEN:
El médico puede solicitar este examen si uno tiene signos de diabetes. Sin embargo,
otros exámenes (prueba de tolerancia a la glucosa y examen de glucemia en ayunas)
son mejores para diagnosticar la diabetes.
El examen de glucemia también se utiliza para monitorear a pacientes que padezcan
diabetes. También se puede hacer si usted presenta:
 Un cambio en el comportamiento
 Episodios de desmayo
 Convulsiones por primera vez
¿Por qué se hace esta prueba?
 Por lo general, la prueba de glucosa en la sangre se hace para detectar la diabetes
mellitus.
¿Recomendaciones para el análisis de glucosa?
La forma más fácil de detectar la diabetes es medir la cantidad de azúcar en la
sangre (glucosa) antes de que el paciente coma o beba algo por la mañana. En la
mayoría de los casos, el paciente deberá ayunar durante la noche anterior, no
comer ni beber nada más

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Que agua después de la cena y por la mañana antes de la extracción de sangre.
4. PARTE PRÁCTICA
4.2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
4.3. PLANTEAMIENTO DE LA HIPÓTESIS
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4.4. PROCEDIMIENTOS DE EXPLORACIÓN
 Organizados en grupos de trabajo dispongan en la
mesa de trabajo los siguientes materiales y reactivos
MATERIALES Y EQUIPOS REACTIVOS
 Micropipetas de 10ul y 1.0ml
 6 tips descartables para
micropipetas
 Cronometro
 2 tubos vacutainer
 2 agujas vacutainer
 Capuchón
 Gradillas para tubo de ensayo
 Timer
 Ligadura
 Algodón
 Reactivo glucosa enzimática
 Alcohol.

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 Esparadrapo
 Centrifuga
 3 tubos de ensayo de 6 ml
 Cubetas para
espectrofotómetro
 Baño maría a 37°C
 Espectrofotómetro
MÉTODO TRINDER – PUNTO FINAL
4.4.1. PRINCIPIO:
La glucosa oxidasa (GOD) oxida a la glucosa en ácido glucónico y forma el peróxido
hidrógeno. En presencia de peroxidasa (POD) el peroxido hidrógeno reacciona con el
fenol y 4-aminofenazona y produce un complejo coloreado, cuya intensidad de color
es directamente proporcional a la concentración de glucosa en la muestra.
4.4.2. MUESTRA: (Suero/Plasma)
 Evitar muestras hemolizadas.
 Separar tan pronto sea posible las células de la sangre puesto que la glicólisis
consume la glucosa (aproximadamente 5% por hora) y proporciona falsamente
valores disminuidos.
 La glucosa en suero es estable hasta 3 días de 2-8° C.
4.4.3. ESTABILIDAD:
 Los reactivos están listos para su uso.
 Almacenar de 2- 8°C y protegerlo de la luz los reactivos son estables hasta la fecha
de expiración indicada en el rótulo.
 No congelar.
 Una vez abiertos los reactivos son estables por 2 meses de 2º- 8ºC si se evita la
contaminación.

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 Mantener los frascos cerrados cuando no están en uso. No usar los reactivos en
caso de turbidez.
4.4.4. PROCEDIMIENTO:
 calibración y absorbancia del espectrómetro
 Método:……………………………. punto final en Incremento
 Longitud de onda:…………….510 nm (500-520 )
 Cubeta:…………………………….1 cm de vía óptica
 Temperatura:……………………37°C
 Tiempo de reacción:…………5 - 10 minutos
 Lectura:…………………………...Cont ra reactivo blanco
 Reactivo/Muestra:…………....1/100
 Toma de muestra través de la venopunción o flebotomía se utilizan las venas
situadas en la flexura del codo. La estudiante encargada de tomar la muestra
utilizará guantes, una aguja (con una jeringa o tubo de extracción).
 le pondrá un tortor (cinta de goma-látex) en el brazo para que las venas retengan
más sangre ya parezcan más visibles y accesibles.
 limpiará la zona del pinchazo con un antiséptico y mediante una palpación
localizará la vena apropiada y accederá a ella con la aguja. Le soltarán el tortor.
 Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizará una aspiración (mediante
la jeringa o mediante la aplicación de un tubo con vacío).
 al terminar la toma, se extrae la aguja y se presiona la zona con una torunda de
algodón o similar para favorecer la coagulación y se le indicará que flexione el
brazo y mantenga la zona presionada con un esparadrapo durante unas horas
 Colocar en baño maría de 5-10 min para que se coagule la muestra
 Centrifugación de la muestra 3000 rpm 3-5 min
 Rotular los 3 tubos de ensayo R. Blanco, Estándar y muestra.
4.4.5. PREPARACION DE SOLUCIONES:

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 Mezclar e incubar de 5-10 minutos a 37°C en baño maría.
 luego leer la absorbancia del estándar (abstd) y la muestra (absm) contra el
blanco de reactivo en el espectrofotómetro.
 Los volúmenes de reacción pueden ser variados proporcionalmente sin ninguna
modificación en el cálculo.
4.4.6. RESULTADOS DE CÁLCULOS:
CALCULAR LA CONCENTRACIÓN DE GLUCOSA EN LA MUESTRA USANDO LA
SIGUIENTE FÓRMULA:
Abs muestra
Abs estándar
x100
4.4.7. VALORES:
VALORES DE REFERENCIALES:
 PREMATUROS: 30mg/dl(1.6 mmol/L)
 RECIÉN NACIDOS: 40-60mg/dl(2.2 ÷ 3.3 mmol/L)
 NIÑOS: 60 - 100 mg/dl (3.8 ÷ 6.10 mmol/L)
 ADULTOS: 70 - 110 mg/dl (3.8 ÷ 6.10 mmol/L)
VALORES NORMALES:

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Si le hicieron un examen de glucemia en ayunas, un nivel entre 70 y 100
miligramos se considera normal.
Si le hicieron un examen de glucemia aleatorio, los resultados normales dependen
de cuándo fue la última vez que comió. La mayoría de las veces, los niveles de
glucemia estarán por debajo de 125 mg/dL.
Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre laboratorios.
Hable con el médico acerca del significado de los resultados específicos de su
examen.
Los ejemplos anteriores muestran las mediciones comunes para los resultados de
estas pruebas. Algunos laboratorios usan diferentes medidas o pueden evaluar
distintas muestras.
4.4.8. SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES
SI LE HICIERON UN EXAMEN DE GLUCEMIA EN AYUNAS:
 Un nivel de 100 a 125 mg/dL significa que usted tiene una alteración de la
glucosa en ayunas, un tipo de prediabetes. Esto incrementa el riesgo para la
diabetes tipo 2.
 Un nivel de 126 mg/dL o mayor casi siempre significa que usted tiene diabetes.
Los niveles aleatorios de glucosa en la sangre superiores a los normales pueden
ser un signo de diabetes. En alguien que tenga diabetes, puede significar que la
enfermedad no está bien controlada. El médico probablemente ordenará una
glucemia en ayunas o un examen de tolerancia a la glucosa, dependiendo del
resultado del examen aleatorio.
OTROS PROBLEMAS MÉDICOS TAMBIÉN PUEDEN PROVOCAR NIVELES DE GLUCOSA EN LA
SANGRE SUPERIORES A LO NORMAL, COMO:
 Hipertiroidismo
 Cáncer pancreático
 Pancreatitis

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 Tumores raros, entre ellos feocromocitoma, acromegalia, síndrome de Cushing
o glucagonoma
LOS NIVELES DE GLUCOSA EN LA SANGRE INFERIORES A LO NORMAL
(HIPOGLUCEMIA) PUEDEN DEBERSE A:
 Hipopituitarismo (un trastorno de la hipófisis)
 Hipotiroidismo
 Insulinoma (muy poco común)
 Muy poco alimento
 Demasiada insulina u otros medicamentos para la diabetes
4.4.9. RIESGOS:
Las venas y las arterias varían de tamaño de un paciente otro y de un lado del
cuerpo a otro, razón por la cual obtener una muestra de sangre de algunas
personas puede resultar más difícil que de otras.
OTROS RIESGOS ASOCIADOS CON LA EXTRACCIÓN DE SANGRE SON LEVES, PERO
PUEDEN SER:
 Sangrado excesivo
 Desmayo o sensación de mareo
 Hematoma (acumulación de sangre debajo de la piel)
 Infección (un riesgo leve cada vez que se presenta ruptura de la piel)
5. CONSIDERACIONES:
Muchas formas de estrés intenso (por ejemplo, traumatismo, accidente
cerebrovascular, ataque cardíaco y cirugía) pueden aumentar temporalmente
los niveles de glucosa en la sangre.
ENTRE LOS FÁRMACOS QUE PUEDEN AUMENTAR LAS MEDICIONES DE LA GLUCOSA ESTÁN
LOS SIGUIENTES:
 Ciertos medicamentos para tratar la esquizofrenia y la psicosis
 Betabloqueadores (como propanolol)

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 Corticosteroides (como prednisona)
 Estrógenos
 Glucagón
 Isoniazida
 Litio
 Anticonceptivos orales (píldoras anticonceptivas)
 Fenotiazinas
 Fenitoína
 Salicilatos (ver sobredosis de ácido acetilsalicílico (aspirin))
 Diuréticos tiazídicos (como hidroclorotiazida)
 Triamtereno
 Antidepresivos tricíclicos
ENTRE LOS FÁRMACOS QUE PUEDEN DISMINUIR LAS MEDICIONES DE GLUCOSA
ESTÁN LOS SIGUIENTES:
 Paracetamol
 Alcohol
 Esteroides anabólicos
 Clofibrato
 Disopiramida
 Gemfibrozilo
 Inhibidores de la monoaminoxidasa (IMAO)
 Pentamidina
6. REFLEXIÓN:
1. ¿Qué es la prueba de glucosa en la sangre?
2. ¿Por qué se hace esta prueba?
3. ¿Cómo preparo a mi hijo para esta prueba?
4. ¿Cómo se hace esta prueba?
5. ¿Cómo conoceré el resultado de la prueba?
6. ¿Qué significa el resultado de la prueba?
7. ¿Qué sucede si el resultado de la prueba no es normal?
7. APLICACION:

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1. Averiguar cuantos técnicas y métodos existe para determinar la glucosa
2. ¿Qué otras pruebas complementarias serán necesarias para complementar la
prueba de tolerancia a la glucosa?
3. ¿Cómo es la glucosa a falta de insulina?
8. BIBLIOGRAFÍA:
-http://colombiamedica.univalle.edu.co/Vol38No1/html/v38n1a10.pdf
-http://www.netdoctor.es/XML/verArticuloMenu.jsp?XML=000437
-http://www.ferato.com/wiki/index.php/Glucosa
-http://www.medicinapreventiva.com.ve/laboratorio/glicemia.htm
-http://external.doyma.es/pdf/277/277v27n106a13105169pdf001.pdf
-http://www.uned.es/pea-nutricion-y-dietetica-I/guia/diabetes/prodinsu.htm
-http://jama.ama-assn.org/cgi/data/297/2/230/DC1/1

Practica nro 2 bioquimica

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