REACCIÓN DE LA PULPA ANTE ESTÍMULOS MECÁNICOS Y TÉRMICOS.

1. REACCIÓN DE LA PULPA
ANTE ESTÍMULOS
MECÁNICOS Y TÉRMICOS
PRESENTADO A:
Dr. Juan Carlos Munévar
PRESENTADO POR:
Jorge Gruber
Diana Marín

2. IRRITANTES MECÁNICOS Y
TÉRMICOS
DURANTE
PROCEDIMIENTOS
CLÍNICOS
GENERAMOS
 Estímulos mecánicos
 Estímulos térmicos
modificaciones en la temperatura de los tejido
pulpares induce reacciones inflamatorias,
hipersensibilidad hasta necrosis pulpar
Zach y Cohen 1965
que tanta
irritación
térmica y
mecánica
puede tolerar
la pulpa es
desconocido

3. Mecánico
Térmico
Degradación de la matriz BMP
TGF
PDGF
VEGF
FGF
ABSORCIÓN
Núcleo del
odontoblasto
Esclerosis tubular
CRISTALES
DEPOSITO
IL8
PGL
LCB
Ig-G
Atraen
Mo
DCs
PMN
HLA-DR
Alteración
membrana
APOPTOSIS
ANGIOGENESIS
Recluta célula
indiferenciada
Estimula fibra
C
SP
CGRP
Vaso dilatación
Aumento presión
Necrosis
VIA SEÑALIZACIÓN
Jun
AP1
Fos
DSPP
OC
COL
FA
LÍNEA DE CÉLULAS
PULPARES REPARADORAS
NOCH
Cadherina
Nestina

4. Lesión Cariosa
Para generar una respuesta inmune no se necesita
la desintegración de grandes cantidades de dentina
Oren de respuestas:
1. Descenso de permeabilidad dentinaria
2. Formación de dentina terciaria
3. Reacciones inflamatorias e
inmunológicas
4. Alteración de presión de vasos
sanguíneos
5. Necrosis Pulpar
COHEN, STEPHEN. Los Caminos de la Pulpa. 9 ta Ed. Editorial Médica Panamericana. 2008

5. Lesión Cariosa
Metabolitos
bacterianos
neutraliza
Degradación
Matriz
dentinal
liberación
BMP
TGF-β
Estimula
odontoblastos
Estimulación
Vasos
sanguíneos
angiogenesis
Vaso
dilatación
Alteración
citoesqueleto
Deposito
de minerales
Esclerosis
tubular
MMPS
Dentina
terciaria
Actina y mosina
Dentina reaccionaria:
FGF
PDGF
VEGF
IGF
COHEN, STEPHEN. Los Caminos de la Pulpa. 9 ta Ed. Editorial Médica Panamericana. 2008

6. Esmalte
Aumento de la formación de
dentina intratubular altamente
mineralizada
(Hipermineralización)
Dentina
Precipitación de sales minerales
disueltas dentro de los túbulos
dentinarios
Hipermineralizada en al dentina
subyacente a la dentina cariosa
desmineralizada
Reducción de la permeabilidad de
la dentina
Producción de dentina tubular
terciaria reaccionaria
CARIES DAÑO NO AGRESIVO
COHEN, STEPHEN. Los Caminos de la Pulpa. 9 ta Ed. Editorial Médica Panamericana. 2008

7. LESIÓN CARIOSA
Destrucción odontoblasto
 Diferenciación de odontoblastos
 Aspecto de la matriz refleja el estado de diferenciación
Heterogeneidad de la dentina reparativa
responsable
Dentina tubular Fribro dentina
Organizada Irregular
COHEN, STEPHEN. Los Caminos de la Pulpa. 9 ta Ed. Editorial Médica Panamericana. 2008

8. Dentinogenesis
reactiva- morfología
tubular
Dentina reparativa Irregular
COHEN, STEPHEN. Los Caminos de la Pulpa. 9 ta Ed. Editorial Médica Panamericana. 2008

9. IRRITANTES TÉRMICOS
36,5 y 45 grados centígrados
Moulding y Teplistky 1990
La temperatura entre tejidos
pulpares varía
Daños irreversibles en la
pulpa
Aumentos de temperatura
intrapulpar entre 5-10 grados
centígrados Zach y Cohen 1965

10. IRRITANTES TÉRMICOS
la síntesis de LTB4 y Prostaglandinas en
comparaciones con otras células pulpares
no irritadas
Estos descubrimientos indican que los aumentos de calor son capaces
de estimular a las células pulpares e inducir a reacciones
inflamatorias y a la filtración de células inflamatorias en los tejidos
Calderwood et al 1989
Aumento de temperatura
intrapulpar
5,5ºC 15% de muerte pulpar
Aumento de temperatura
intrapulpar Zach y Cohen
11ºC 60% de muerte pulpar

11. IRRITANTES TÉRMICOS
Instrumentales rotatorios
aumentaban la
temperatura en los
dientes Stüben y Hope 1964
pero en la actualidad con
el enfriamiento con agua
este no se considera
nocivo.
lámpara de fotocurado Hannig y Bott
1999, Yap et al 2004
la colocación intraoral de coronas
temporales Moulding y Teplistky 1990
la combinación de láseres en procedimientos
para blanqueamientos Oelgiesser 2003, Baik 2001

12. LASER
Alteración en la presencia y posición del
odontoblasto
Destrucción del odontoblasto
Cambio en la consistencia y posición de
la matriz extracelular
Seltzer and Bender's Dental Pulp, Kenneth. M. Hargreaves, Harold. E. Goodir, Quintessence
Pub. Chicago. 2002.

13. ESTUDIOS LASER IN VIVO
Laser de CO2
Cavidades
 Daño térmico alto
 Destrucción de odontoblasto irreversible
Laser de Er: YAG
Cavidades
 Genera la misma respuesta que
con la turbina
 Maneja niveles de energía de
3W de 10 a 30 Hertz
 No produce daño pulpar
detectable
Seltzer and Bender's Dental Pulp, Kenneth. M. Hargreaves, Harold. E. Goodir, Quintessence
Pub. Chicago. 2002.
 longitud de onda de 2940nm
utilizado con fibra obtica
 longitud de onda de 9300nm 9600nm

14. Laurell et al
la respuesta de la pulpa
ante un sistema de aire
abrasivo
Examinaron
desplazamiento de odontoblastos
alteración de las células
Respuesta inflamatoria
necrosis
120 molares
de perros
AIRE ABRASIVO
DE ALTA PRESIÓN
ALTA VELOCIDAD
la preparación con aire abrasivo genera menos reacción Pulpar que
con una pieza de mano, pero igual se necesitan más investigaciones
RESULTADO
Seltzer and Bender's Dental Pulp, Kenneth. M. Hargreaves, Harold. E. Goodir, Quintessence
Pub. Chicago. 2002.

15. IRRITANTES TÉRMICOS
El aumento de flujo sanguíneo puede actuar en la disipación del calor
ante un estimulo térmico.
Estimulo respuesta vascular generando un aumento
inmediato del flujo sanguíneo
la respuesta ante estímulos también se ve influenciada por el
grosor de la dentina
tienen baja conductibilidad
térmica
la superficie del tejido se quema
evitando variaciones en la temperatura
de la pulpa y la capacidad de respuesta
de la pulpa Brown et al 1970
Kodonas K, Gogos C, Tziafas D Endod J. 2009 Mar;42(3):247-52t .

16. IRRITANTES TÉRMICOS
El leucotrieno B4 (LTB4)
potente mediador pro inflamatorio de la cascada
del acido araquidónico
principal producto de granulocitos, polimorfo nuclear y se
ha visto en queratinocitos y células pulpares
Czarnetzki y Mertensmeler 1985
pertenece a la cascada del acido araquidónico de la 5
lipooxigenasa que esta relacionada con la prostaglandina
Okiji T, Morita I Suda H, Murota (1992)hidonic pathophysiological roles of arachidonic
acid metabolites in rat dental pulp. Proceedings of the finnish dental society 88

17. IRRITANTES TÉRMICOS
El leucotrieno B4 (LTB4)
capacidad de aumentar la permeabilidad
de los vasos sanguíneos
Esta involucrado en las reacciones
inflamatorias tempranas
secuelas como dolor, tumefacción,
reabsorción ósea y un posible rol es la
patogenesidad pulpar y periapical.
Calderwood SK, Bornstein B, Farnum EK, Stevenson MA.Heat shock stimulates the release of arachidonic acid and
the synthesis of prostaglandins and leukotriene B4 in mammalian cells. J Cell Physiol. 1989 Nov;141(2):325-33.

18. IRRITANTES TÉRMICOS
El leucotrieno B4 (LTB4)
tiene la capacidad de sensibilizar lo nocioceptores
factor hiperalgesico de larga duración
contribuiría con el dolor de origen
pulpar
relevante para la observación de la síntesis de mediadores
por las células pulpares ante irritantes térmicos
Madison S, Whitsel EA, Suarez-Roca H, Maixner W.Sensitizing effects of leukotriene B4 on intradental primary afferents. Pain. 1992
Apr;49(1):99-104.

19. IRRITANTES TÉRMICOS
EICOSANOIDE
Prostaglandinas
Prostaciclina
Tromboxano
leucotrienos
Estimula una diversidad
de respuestas en las
células diana
Agregación plaquetaria
Inflamatoria
Contracción del musculo liso
Cooper Housman la celula 2008

20. IRRITANTES TÉRMICOS
Cooper Housman la celula 2008
Hidrolisis
LIPOXIGENASA
CICLOXIGENASA

21. RESPUESTA TÉRMICA ANTE
PREPARACIÓN CAVITARÍA
EL CORTE DE LA DENTINA
CON FRESA
Calor por Fricción
La velocidad de rotación y
el tamaño y la forma del
instrumento de corte
Periodo de tiempo en el que el
instrumento está en contacto
con la dentina
Cantidad de presión
que ejerce la pieza
de mano
COHEN, STEPHEN. Los Caminos de la Pulpa. 5ta Ed. Editorial Médica Panamericana. 1993

22. RESPUESTA TÉRMICA ANTE
PREPARACIÓN CAVITARÍA
TURBINA
Generar una temperatura de 240 grados
centígrados Lloyd et al 1978
SIN
En velocidades de
150.000 a 250.000 rpm
En velocidades hasta
de 50.000 rpm
DAÑO SEVERO
DAÑO LEVE
HARGREAVES KM, GOODIS HE. Seltzer y Bender’s Dental Pulp.
4ta ed. Quintessence Publishing Co, Inc. 2002

23. RESPUESTA TÉRMICA ANTE
PREPARACIÓN CAVITARÍA
CORTE DE DENTINA SECO CON AIRE A
PRESIÓN
Rápida salida del
fluido dentina
Disminución de la
temperatura pulpar
Daño de la membra
de odontoblastos
Seltzer and Bender's Dental Pulp, Kenneth. M. Hargreaves, Harold. E. Goodir, Quintessence
Pub. Chicago. 2002.

24. RESPUESTA TÉRMICA ANTE
PREPARACIÓN CAVITARÍA
SIN ALTERACIÓN
COHEN, STEPHEN. Los Caminos de la Pulpa. 8 ta Ed. Editorial Médica Panamericana. 2004
CON ALTERACIÓN

25. INJURIA LEVE
ODONTOBLASTO LESIONADO
Sobre vive
Morfología no
se altera
Genera dentina
reaccionaria
Kinesina Miosina
Actina
Reorganización
del citoesqueleto
del odontoblasto
Síntesis
de
proteínas
Es rápidamente
localizada en la región
de la membrana celular
adyacente a la zona de
la herida
DENSA RED
CITO ESQUELÉTICA
Nestina

26. INJURIA SEVERA
El núcleo del odontoblasto es
aspirado dentro de los túbulos
dentinales
Muerte celular del
odontoblasto
Seltzer and Bender's Dental Pulp, Kenneth. M. Hargreaves, Harold. E. Goodir, Quintessence
Pub. Chicago. 2002.
INJURIA SEVERA
Deposito de
dentina reparadora
RENOVACIÓN CELULAR
Sistema inmune
Fibroblastos
pulpares
Células de la capa sub
odontoblastica

27. RESPUESTA ANTE LA INJURIA
Neuropeptido ( sustancia P)
Calcitonin gene-related peptide (CGRP)
Produccion
Aumento en la
pulpa
moléculas del complejo mayor de
histocompatibilidad tipo II
actividad de los macrófagos y
células dendríticas.
Seltzer and Bender's Dental Pulp, Kenneth. M. Hargreaves, Harold. E. Goodir, Quintessence
Pub. Chicago. 2002. Hernández-Guerrero JC, Jiménez-Farfán D, Castel-Rodríguez A, Garcés-
Ortiz M, Ledesma-Montes C.Immunoexpression of the HLA-DR class II molecule in cells from
inflamed dental pulp.Arch Med Res. 2006 May;37(4):461-4
HLA-DR

28. FACTORES DE CRECIMIENTO ANTIGÉNICO
LIBERADO POR CÉLULAS PULPARES
ANGIOGENESIS
Formación de dentina reparadora antes
de la mineralización
Aumento de factores
angiogeneticos
Después de 5 horas
Disminuye los factores angiogeneticos
L. Tran-Hung, P. Laurent, J. Camps, I. Abaut. Quantification of angiogenic growth factors released
buy human dental cells after injury.. Archives of oral Biology, 53 (2008) 9-13.
NECESARIO

29. FACTORES DE CRECIMIENTO ANTIGÉNICO
LIBERADO POR CÉLULAS PULPARES
ANGIOGENESIS
Factor de crecimiento derivado
de plaquetas (PDGF)
Factor de crecimiento vascular
endotelial (VEGF)
Factor de crecimiento
fibroblastico (FGF)
Diferenciación del
sistema vascular
Neuro vascularización
del tejido dañado
Procesos de
embriogénesis y
regeneración tisular
Ferrara N. Vascular endothelial growth factor. Eur J Cancer 1996; 32:2413-22

30. FACTORES DE CRECIMIENTO ANTIGÉNICO
LIBERADO POR CÉLULAS PULPARES
Matriz de la dentina
actúa como reservorio
Factor de crecimiento derivado
de plaquetas (PDGF)
Factor de crecimiento vascular
endotelial (VEGF)
Factor de crecimiento
fibroblastico (FGF)
L. Tran-Hung, P. Laurent, J. Camps, I. Abaut. Quantification of angiogenic growth factors
released buy human dental cells after injury.. Archives of oral Biology, 53 (2008) 9-13.

31. FACTORES DE CRECIMIENTO ANTIGÉNICO
LIBERADO POR CÉLULAS PULPARES
CÉLULAS
ENDOTELIALES Factor de crecimiento
fibroblastico (FGF)
Iniciación de la reacción inflamatoria y reparativa
Estimulación y proliferación de células pulpares inmaduras y
capacidad de producción de calcio mineralizado
Reclutamiento de células parecidas al
odontoblastos en la zona de la injuria
Actúa como mitogeno
Nakao K, Itoh M. FGF-2 potently induces both proliferation and DSP expression in collagen type I gel cultures
of adults incisors immature pulp cells. Biochem Biophys Res Commun 2004;325:1052-9.
libera

32. Proliferación y migración de varios linajes de células pulpares al
sitio de injuria con la finalidad de crear una nueva matriz rica
en colágeno
A.J. Smith P.E. Murray, A.J. Sloan, J.B. Matthews, S. Zhao1.Trans-dentinal Stimulation ofTertiary
Dentinogenesis,Adv Dent Res 15:51 -54, August, 2001
irritante
LTB4
PG2
TGFB
MPP
FGF
BMP
NGF
SP

33. Inician el proceso de reparación , señales paracrinas a las células
inflamatorias y células pulpares indiferenciadas al sitio de la injuria
estimulando la respuesta angiogénica e iniciación de la reparación
REACCIÓN REPARADORA
Odontoblastos
funcionales y
fibroblastos
secretan
Factor de crecimiento
transformante TGF
Proteína morgenica ósea
BMP
Factor de crecimiento de
fibroblasto FGFs
Goldberg M, Smith AJ (2004). Cells and extracellular matrices of dentin and pulp: a biological basis for repair and tissue
engineering. Crit Rev Oral Biol Med 15:13-27. Martin P (1997). Wound healing: aiming for perfect skin regeneration.
Science 276:75-81.

34. TGFβ Y BMP Dentinogenesis 3
Reparadora Reaccionaria
TGF β-1 2
aumentada su secreción en el área de la injuria
durante los procesos de reparación y actúa
como una señal dirigiendo la regeneración
tisular
TGF β-1 y
citoquinas 1
estimular la expresión de integrinas que facilitan la
migración celular
1 Woolley K, Martin P (2000). Conserved mechanisms of repair: fromdamaged single cells to wounds in multicellular
tissues. Bioessays 22:911-919 2. Farges JC, Romeas A, Melin M, Pin JJ, Lebecque S, Lucchini M, et al. (2003). TGF-
beta1 induces accumulation of dendritic cells in the odontoblast layer. J Dent Res 82:652-65 3. . Goldberg M, Smith AJ
(2004). Cells and extracellular matrices of dentin and pulp: a biological basis for repair and tissue engineering. Crit Rev
Oral Biol Med 15:13-27.

35. FACTOR DEL CRECIMIENTO
NERVIOSO ( NGF)
Sensible a liberación de señales durante
la injuria
NEUROPÉPTIDOS PROCESOS DE REGENERACIÓN
FGF2
ANGIOGENESIS MITOGENOS
LIBERADO DESDE LA MATRIZ
Nilsson J, von Euler AM, Dalsgaard CJ (1985). Stimulation of connective tissue cell growth by substance P and substance K.
Nature 315:61-63. Sano M, Iwanaga M (1996). Re-examination of the local control by nerve growth factor of the outgrowth of neurites in PC12D
cells. Brain Res 730:212-222.
Nugent MA, Iozzo RV (2000). Fibroblast growth factor-2. Int J Biochem Cell Biol 32:115-120.
Martin P (1997). Wound healing: aiming for perfect skin regeneration. Science 276:75-81.

36. CALCIO
Las células dañadas liberan
Mediador de señalización para células no dañadas
Regulación de la reorganización del citoesqueleto
Liberación de citoquinas pro inflamatorias
Woolley K, Martin P (2000). Conserved mechanisms of repair: fromdamaged single cells to wounds in multicellular tissues. Bioessays 22:911-919.

37. GENES TEMPRANOS
C-JUN Y C-FOS
Activadores de división celular
(protooncogenes )
Ayudan a responder a los tejidos
que han sufrido perdida celular
proteasas
CODIFICA
Estimulo del daño Respuesta celular crónica
Woolley K, Martin P (2000). Conserved mechanisms of repair: fromdamaged single cells to wounds in multicellular tissues. Bioessays 22:911-919.
COLAGENASA
GELATINIZAS

38. GENES TEMPRANOS
Células similares a
odontoblastos alterados por la
injuria
C-JUN Y JUNB
ACTIVADOR
AP-1
Proteína heterodimerica
JUN
B-Jun
C-Jun
D-Jun
FOS
C-Fos
B-Fos
Fra-1
Fra-2
Woolley K, Martin P (2000). Conserved mechanisms of repair: from damaged single cells to wounds in multicellular tissues. Bioessays 22:911-919.

39. AP-1
GENES TEMPRANOS
estimuladas entre los minutos de la herida
mejora la expresión de TGFβ-1
osteocalcina
fosfatasa alcalina colágeno tipo 1
T.A. Mitsiadis and C. Rahiotis Parallels between Tooth Development and Repair: Conserved Molecular Mechanisms following Carious and Dental
Injury, J Dent Res 83(12):896-902, 2004

40. NOTCH- NESTINA- CADHERINAS
Diferenciación célula –célula
similar al odontoblasto
Proliferación
migración
VÍA NOTCH
Evento molecular temprano
en reparación tisular
Organización de la capa sub
odontoblastica
receptores expresados en las células
precursoras del odontoblasto
T.A. Mitsiadis and C. Rahiotis Parallels between Tooth Development and Repair: Conserved Molecular Mechanisms following Carious and Dental
Injury, J Dent Res 83(12):896-902, 2004

41. NOTCH- NESTINA- CADHERINAS
NOTCH 2
Células pulpares
localizadas en zonas del
daño
ACTIVADO
En las células endoteliales después de la lesión pueden
reflejar crecimientos de nuevas vasos en la pulpa
regenerativa
T.A. Mitsiadis and C. Rahiotis Parallels between Tooth Development and Repair: Conserved Molecular Mechanisms following Carious and Dental
Injury, J Dent Res 83(12):896-902, 2004

42. NOTCH- NESTINA- CADHERINAS
NOTCH INTERACTÚA Las vías de señalización de
TGFβ-1
Disminucion de la expresión del
Notch2 en la pulpa
TGFβ-1 BMP
Aumenta
expresión de la
NESTINA
T.A. Mitsiadis and C. Rahiotis Parallels between Tooth Development and Repair: Conserved Molecular Mechanisms following Carious and Dental
Injury, J Dent Res 83(12):896-902, 2004

43. NOTCH- NESTINA- CADHERINAS
CADHERINAS
Odontoblastos durante los procesos
de reparación del diente
ACTIVADOS
De reorganización del tejido pulpar después
de la lesión.
FUNCIÓN
Filamento de actina α- Actinina Cadherina β Actinina
Vinculina
Exterior celular
T.A. Mitsiadis and C. Rahiotis Parallels between Tooth Development and Repair: Conserved Molecular Mechanisms following Carious and Dental
Injury, J Dent Res 83(12):896-902, 2004

44. NOTCH- NESTINA- CADHERINAS
NESTINA
por los odontoblastos tanto de los que
se encuentran en la zona de la lesión
como lejos de la misma
Expresada
remodelación
la actividad secretora del odontoblasto después de un daño
Involucrada
la activación de Notch, N-cadherina, y nestina durante la regeneración pulpa
puede garantizar un continuo equilibrio entre los odontoblastos y los
progenitores a convertirse en odontoblastos
T.A. Mitsiadis and C. Rahiotis Parallels between Tooth Development and Repair: Conserved Molecular Mechanisms following Carious and Dental
Injury, J Dent Res 83(12):896-902, 2004

45. UNIONES GAP
Intenso periodo de síntesis
Ayuda a facilitar el intercambio de metabolitos durante
la alteración del fluido locan en sangre
Mantiene la posición y
polaridad del odontoblasto
Formación de dentina
reaccionaria
T.A. Mitsiadis and C. Rahiotis Parallels between Tooth Development and Repair: Conserved Molecular Mechanisms following Carious and Dental
Injury, J Dent Res 83(12):896-902, 2004

46. ESTRÉS TÉRMICO INDUCEN LA SÍNTESIS DEL
MEDIADOR INFLAMATORIO LEUCOTRIENO B4 EN
CÉLULAS PULPARES HUMANAS
Eberhard J, Zahl A, Dommisch H, Winter J, Acil Y,
Jepsen S. Department of Operative Dentistry and
Periodontology, University Hospital Schleswig-
Holstein, Campus Kiel, Germany. Int Endod J.
2005 Dec;38(12):882-8.

47. Medir Leucotrieno B4
síntesis
Células de
pulpa
dentaria
Cultivos
Choque de calor
Inducidos
Adecuadas
Células pulpares
Células madres DPSC
DSPP
CARACTERIZACIÓN
ESTIMULACIÓN
Térmica de las células
Transcripción
reversa de la
polimerasa
A distintas
temperaturas
Conteo de células
Se expresaron en los
dos grupos
Aumento de síntesis de LTB4
en los cultivos estimulados
Eicosanoides
Cromatografia
liquida de alta
eficasia de fase
reversa
Expresion
Se observo expresion
del eicosanoide

48. La temperatura dentro
de tejidos de la pulpa
36,5 y 45 ° C
varía
Procedimiento
Cambios
INFLAMACIÓN
HIPERSENSIBILIDAD
NECROSIS PULPAR
Extensión de la
lesión térmica
tolerada la pulpa
Mecanismos de
la lesión
Cambios de la pulpa
Estudios
Histológicos
Zach y Cohen 1965
KIaiber et al. 1985
Ozturk et al. 2004
Cambios celulares
NO principios inflamatorios
Ni cambios metabólicos
Mediadores
inflamatorios
Evaluación
Sintetizados
CÉLULA PULPAR
Herramienta valiosa

49. Aumento de los mediadores INFLAMATORIA
Reacción
Humoral Celular
Necrosis celular
Generando
Potente
Leucotrieno B4
Pro inflamatoria

50. Cultivo de las células
pulpares
Células
pulpares
primarias
6 molares
sanos
18-32 años
Removido tejido duro
Tejido blando
Medio de cultivo alpha medium
(Bíochrom, Berlín, Germany)
Sustitución
10% suero
fetal de ternero 37°C
Atmosfera
de 5% de CO2
2 a 5 repeticiones
Experimentos
realizar
MATERIALES Y MÉTODOS

51. Cultivo de las células pulpares
Stem cells
Pulpares
Dr S. Shi
Bethesda,
MA, USA
Penicilina
10 ųg mL
Medio de cultivo alpha medium
Bíochrom, Berlín, Germany
Sustitución
20% suero
fetal de
ternero
Atmosfera
de 5% de CO2
Subcultivadas
5 veces
Experimentos
antes
Glutamina
(10 ųL mL
Anfotericina B
10 ųmg mL
Acido ascórbico
30 ųg mL

52. Expresión de DSPP
RT-PCR
Primers
5'-TCA CAA GGG AGA AGG GAA TGG-3'
5'-CTT GGA CAA CAG CGA CAT CCT-3
promotor
Reversa
TaqPolymerase III
(Invitrogen, Karlsruhe. Germany).
enzimas
Secuencias en termociclador
4) 72 °C
30 seg
1) 95 °C
5min
2)95 °C
30 seg
3) 63 °C
30 seg
44 ciclos
ARNasa
Rnase mini kit; Qiagen, Hilden, Germany
Trasncriptor reversa ADN
Superscript ID;Invitrogen
Separar A.C Alineamiento primers AND polimerasa Reducir errores

53. Control interno
βactina
RT-PCR
Primers
5'-CATGGATGATGATATCGCCGCG-3'
5'-ACATGATCTGGGTCATCTTCTCG-3'
promotor
Reversa
Secuencias en termociclador
4) 72 °C
1min
1) 95 °C
5min
2)95 °C
15 seg
3) 63 °C
30 seg
Repetido
30 veces
Separar A.C
Alineamiento
prmers
AND
polimerasa
Reducir
errores

54. Expresión de DSPP
Fragmentos clonados
DSPP
β-actina
Controles positivos
Agua Control negativo
Productos del
PCR
2% gel de agarosa
separados

55. Estimulación Térmica
Células estimuladas
37 °C
38 °C
39 °C
49 °C
42 °C
45 °C
5 y 30 seg.
Células control 36 °C
4 veces
cada unos
posos de Agua
precalentada Temperatura constante
Mantener
Controlar
temperatura
Termómetro digital
Precisión
0.1 °C.

56. Estimulación Térmica
Después del estimulo
Cultivadas 2h a 37°C Atmosfera de 5% de CO2
Incubadas 5 min a 37°C
Acido araquidónico
Concentración 1. 5
ųmol- L
Lavadas Buffer de salina fosfatasa
congeladas -80°C Contadas
cámara de
Neubauer
en

57. Cromatografía líquida de alta
presión de fase reversa (RP-HPLC),
Técnica
separar
componentes de
una mezcla
basándose diferentes
interacciones
químicas
Substancias analizadas columna
cromatográfica.
entre

58. Cromatografía líquida de alta
presión de fase reversa(RP-HPLC),
Compuesta Fase inmóvil
apolar
Cilindro
Partículas
Redondeadas
apolares
Características
químicas. + Retención por
Moléculas
apolares
con
Alta
presión
Fase
Móvil polaridad
moderada
bombeo
de liquido
Paso de
moléculas
Evalúa la
retención
De moléculas

59. Cromatografía líquida de alta
presión de fase reversa (RP-HPLC),
Extrajeron
Eicosanoides
De la muestra
La mezcla para
la reacción
homogenizo
Extrajeron
lípidos
10 min. a
-20 °C
200ųl
Metanol
congelado
centrifugo
A 1500g en 0°
por 10 min
adicionando
almaceno
centrifugo
A 1500g en 0°
por 10 min

60. Cromatografía líquida de alta
presión de fase reversa (RP-
HPLC),
Material
obtenido
acidificado
Acido
trifluroacetico
homogenizo
A temperatura
ambiente
Cilindro
HyPURITyTMElite
C18
0.5 mL-min
cargado
RP-HPLC
Gynkotek. Germering,
Germany)
flujo
en
con
Tamaño de
partícula (5
ųm)
Acido
Trifluruoacetico
Con acetonitrilo
Acetonitrilo
Con metanol

62. RESULTADOS
RT-PCR
Primer
β-Actina Gel de agarosa
Separado a un 2%
Indicador
Odontoblasto
Los 2 Cultivos celulares
Expreso
DSPP

63. Síntesis de LTB 4 después de la
estimulación térmica
39° a 40°
Celular pulpares primarias
DPSC
LTB4
Aumento
42° a 45°
Disminuyo
Estímulos
5- 30 s
p= 0,059
p= 0,346
Celulas madres de la pulpa
Celulas pulpares principales
No fueron estadísticamente
significativo

64. DISCUSIÓN
Experimentos actuales proporcionan
datos cuantitativos de una respuesta
celular inducida por estímulos
térmicos, que no pueda ser generado
por histológico estudios
Proporcionan información de
reacciones celulares en los tejidos
de la pulpa que podrían ser
inducidos por varios tratamientos
dentales en la práctica odontológica

65. 40 y 45 ° C durante la foto
polimerización de compuestos
materiales Hannig & Bott 1999
Las temperaturas en el tejidos de la pulpa
dental, resultados procedimientos dentales
osciló entre 37 y 40 ° C para la preparación de
los tejidos duros Cavalcanti et al. 2002, Ozturk et al. 2004
DISCUSIONES
38 y 41 ° C para la irradiación con
láser Oelgiesser et al. 2003
acumulados a 44 ° C para la
fabricación de coronas temporales
Teplitsky 1990

66. Se ha considerado que se sintetiza DSPP
secretada por odontoblastos se
encuentra exclusivamente en los extractos
de la matriz extracelular de la dentina
Weinstock Leblond y 1973, Butler 1998
se ha demostrado que DSPP se
expresó en osteoblasto y hueso
Qin et al. 2002
los análisis Northern blot DPSC resultaron
ser negativos para DSPP, lo que sugiere un
fenotipo indiferenciado Gronthos et al. 2000
DISCUSIONES

67. La expresión observada de ARNm de
DSPP en DPSC en el presente estudio, lleva a
que los procesos de diferenciación que han
ocurrió durante el cultivo o los mecanismos de
regulación de transcripción DSPP también
involucrados
DISCUSIONES
A largo plazo el cultivo en las condiciones pertinentes puede
demostrar el potencial de díferenciacion de la Línea DPSC,
que también fue acompañado por la expresión de DSPP en
experimentos de trasplante Gronthos et al2000

68. LTB 4 pertenece a los mediadores de
ácido araquidónico de la cascada de la
lipooxigenasa, que están relacionados
con la ciclooxigenasa y prostaglandinas
DISCUSIONES
LTB 4 es un principal
producto de granulocitos
Samuelsson, 1972
en los queratinocitos
Black et al 1985
En células de la encía
Eberhard et al. 2002
tejidos de la pulpa inflamada eran capaces de la
producción de LTB 4 y alterar la estimulación con el
calcio

69. DISCUSIONES la capacidad de LTB4 para aumentar la
adhesión de leucocitos a los tejidos
endoteliales también sugiere que este
mediador activa reacciones inflamación
En el presente estudio, se demostro
que un choque de calor de 38-40 ° C
aumentó significativamente la síntesis
de LTB 4
Choque de calor entre 42 y 45 ° C
inducirá la síntesis de
prostaglandinas y LTB 4 en las células
de los mamíferos Calderwood et al. 1989
leves cambios térmicos son capaces de estimular la PC y puede
inducir a las reacciones inflamatorias y a la filtración de células
antinflamatorios en los de los tejidos de la pulpa.

70. La pregunta que surge es si hay una
función biológica además de eventos
inflamatorios que pueden atribuirse
a la síntesis de LTB 4 observada en PC.
DISCUSIONES
LTB4 sensibilizan los mecano
receptores C- A-delta de la piel
peluda de las extremidades
posteriores de ratas Martin et al1987
Estudiaron los efectos de LTB 4 en la
actividad de los nervios aferentes
primarias que inervan la dentina de
los caninos en la los gatos adultos
demostrando una alta relacion
Madison et al. 1992

71. los resultados proporcionan evidencias
que LTB4 es capaz de sensibilizar a los
nocioceptores y puede ser un
factor de hiperalgesias duradera, que puede
contribuir al dolor de origen pulpar
DISCUSIONES
Se sugiere que la acción de LTB4 pueden ser
relevantes para la síntesis observada del
mediadores de PC inducidas por choque de
calor
las vías de señalización y la capacidad de los receptores de PC
implicados en la inducción de LTB 4 por golpe de calor y en
relación con la percepción del dolor clínico aún no se han
estudiados

72. CONCLUSIONES
El presente estudio demostró la capacidad del PC para
sintetizar el ácido araquidónico LTB4 mediador en respuesta
al golpe de calor
LTB 4 tiene la capacidad para inducir reacciones
inflamatorias y para sensibilizar a las terminaciones
nerviosas aferentes nocioceptivas.
La síntesis de LTB 4 es inducida por los cambios de
temperatura menores, que son relevantes para diferentes
situaciones clínicas.