El documento describe los fundamentos de varios analizadores utilizados en bioquímica clínica, incluyendo el espectro electromagnético, espectrofotómetros, ley de Lambert-Beer, y métodos para determinar glucosa, creatinina, colesterol, triglicéridos, calcio, amilasa, sodio, potasio y cloruros. Explica cómo funcionan estos analizadores y los principios subyacentes a los métodos de análisis.

1. FUNDAMENTO DE LOS
ANALIZADORES UTILIZADOS EN
BIOQUÍMICA CLINICA

2. Espectro Electromagnético
 Es la distribución energética del conjunto de las
ondas electromagnéticas. La radiación
electromagnética puede manifestarse de diversas
maneras como calor radiado, luz visible, rayos X
o rayos gamma. A diferencia de otros tipos de
onda, como el sonido, que necesitan un medio
material para propagarse, la radiación
electromagnética se puede propagar en el vacío
(300 0000 km/s).

3.  Una carga eléctrica acelerada crea un campo
eléctrico variable y, como explican las leyes de
Maxwell, los campos pueden abandonar la fuente
que los produce y viajar por el espacio sin soporte
material. Las ondas electromagnéticas se propagan
mediante una oscilación de campos eléctricos y
magnéticos.

8. Espectrofotómetro
 El espectrofotómetro es un instrumento que
permite comparar la radiación absorbida o
transmitida por una solución que contiene una
cantidad desconocida de soluto, y una que
contiene una cantidad conocida de la misma
sustancia.

11. Ley de Lamber-Beer
 Es una relación empírica que relaciona la absorción
de luz con las propiedades del material atravesado.
 A= abc
 a: Coeficiente de absorción
 b: longitud atravesada por la luz en el medio
 c: concentración de la sustancia
 La absorbancia es directamente proporcional a la
concentración en soluciones diluidas.

13. Calculo de absorbancia
 A) Método Directo

14.  B) Método del factor

15.  C) Método Gráfico

16.  La elaboración de la curva de calibración tiene por
objeto fundamental la determinación cuantitativa de
la concentración de solución problema, pero además
se puede evaluar el funcionamiento del
espectrofotómetro a través de la linealidad
fotométrica.

17. Pruebas y procedimientos para
demostrar que un medicamento es
intercambiable.
 Calibración, a la demostración de que un
instrumento particular o dispositivo produce
resultados dentro de límites especificados, en
comparación con los producidos por una
referencia o estándar trazable sobre un intervalo
de mediciones establecido.

18. Módulo de análisis fotométrico
 El módulo fotométrico consta de 81 cubetas de
vidrio Pyrex, que se sumerge en una incubadora
que contiene agua a 37° C ± 0.1 °C. Las cubetas
cuentan con un paso óptico cuya longitud es de 5
mm, deben llenarse con un volumen mínimo de
180 µl (para abarcar la ventana óptica) hasta un
máximo de 500 µl.

19.  La luz proviene de una lámpara de halógeno de 20
W. Un detector de fotodiodos detecta la luz
difractada, a 12 longitudes de onda fijas de 340,
375, 405, 450, 510, 546, 570, 600, 660, 700, 750 y
850 nm. Las señales se amplifican y se convierten a
absorbancia.

20.  Blanco o Testigo
Se le llama blanco o testigo al “disolvente utilizado
para preparar las soluciones estándar y las
soluciones problema”

21. Métodos de análisis fotométrico
 Un solo punto
 Dos puntos

22.  Velocidad con un intervalo
 Velocidad con dos intervalos

23.  Velocidad con dos intervalos

24. Modulo ISE
 Cada análisis se logra con la medición de la
diferencia potencial entre el electrodo de ion
selectivo y el electrodo de referencia. Se puede
determinar la magnitud de este potencial con la
ecuación de Nernst:

26. Métodos para la determinación
de Glucosa
 a) Métodos Químicos: Folín-Wu y Nelson
Somogy (estos métodos requerían una
desproteinización previa del suero y un
calentamiento prolongado para el desarrollo del
color, lo cuál provocaba una serie de
imprecisiones); el método de Hultman “o-
toluidina” es un compuesto toxico y carcinógeno.
Sin embargo ninguno de estos
procedimientos es especifico para glucosa.

27.  b)Métodos enzimáticos: Glucosa oxidasa
(Muller, 1928) y Hexocinasa (Slein, 1963),
estos métodos dan el máximo grado de
especificidad y confiabilidad.
El rojo de quinonimina se lee a 510 nm y el

28.  C) Métodos electroquímicos: La mayoría de las
cintas reactivas utilizan el método electroquímico,
estas llevan electrodos que proporcionan una
corriente de electrones proporcional a la cantidad de
glucosa oxidada. Permiten obtener resultados con
una alta precisión.

29. Métodos para la determinación
de creatinina
 La mayoría de las técnicas fotométricas para la
determinación de creatinina, se basan en la
reacción de Jaffé descrita en 1886, sin embargo
no es específica para creatinina ya que
interfieren en concentraciones elevadas la
glucosa, ácido urico, ácido ascorbico, urea,
bilirrubina etc.

30.  El método de Jaffé en el que se utiliza la tierra de
Fuller y la cromatografía de alta resolución es el
método de referencia. Sin embargo la reacción de
Jaffé modificada por Bonsnes-Taussky se considera
el método de elección, debido a su sencillez y bajo
costo.

31. Métodos para la determinación
de Colesterol
 Las técnicas enzimáticas, para la determinación
de colesterol, resultan adecuadas debido a su
especificidad, exactitud y aplicabilidad. El ácido
ascórbico, la bilirrubina y concentraciones
elevadas de albumina pueden interferir en la
actividad de la colesterol oxidasa. Sin embargo,
se considera que los métodos enzimáticos para
determinar colesterol están sujetos a menor error
que los métodos químicos.

33. Métodos para la determinación
de Triglicéridos
 Los resultados obtenidos con los métodos
químicos se consideran suficientemente precisos
y exactos, sin embargo, las manipulaciones y el
tiempo necesario para realizarlos los hacen poco
prácticos, por ello los métodos totalmente
enzimáticos son los más recomendables.

35. Métodos para la determinación
de calcio 2+
 La mayoría de los métodos establecidos para
medir el calcio total, en realidad estiman la
concentración total por titulaciones,
precipitaciones y determinaciones
espectrofotométricas, en las cuales se utilizan
una gran variedad de moléculas orgánicas para
formar complejos coloridos con el calcio. Como
métodos de referencia se aplica la absorción
atómica, flamometria y la espectrometría de
masas.

37. Métodos para la determinación de
Amilasa
 A) Métodos que miden la disminución de la
velocidad o de la turbiedad.
 B) Métodos colorimétricos como el iodométrico o
amiloclástico.
 C) Métodos enzimáticos en los cuales se acopla
una segunda enzima, para producir un
compuesto colorido.

39.  Una unidad de actividad enzimática (símbolo U) es
la cantidad de enzima que en una reacción
enzimática cataliza la conversión de 1 µmol de
sustrato por minuto. Se utiliza también en
combinación con otras unidades (U/mg de proteína
o U/L) para señalar, respectivamente, la actividad
enzimática específica o la concentración de
actividad enzimática.

40. Métodos para la determinación de
sodio+, potasio+ y cloruro-
 El método de fotometría de flama para medir el sodio
y potasio es el método de referencia, la potenciómetro
con electrodo de ión selectivo tiene la misma
precisión que la flamometría.
 Los cloruros se miden por titulación mercurométrica,
titulación coulométrica-amperométrica,
espectrofotometría y con electrodo de ion selectivo. El
método de referencia es la titulación coulométrica.

41.  Se puede determinar la concentración de una especie
electroactiva en una disolución empleando un electrodo
de referencia (un electrodo con un potencial conocido y
constante con el tiempo) y un electrodo de trabajo (un
electrodo sensible a la especie electroactiva) y un
potenciómetro.
 Cloruros: electrodos de mebrana sólida con sales de
amonio cuaternarias.
 Potasio: electrodo de membrana líquida tipo PVC con
valinomicina
 Sodio: electrodo de membrana liquida tipo PVC con
corona de éter
 Referencia: electrodo de cloruro de plata/plata