Este documento describe un medio de cultivo enriquecido llamado agar chocolate, el cual es útil para el crecimiento de patógenos exigentes como Haemophilus spp. y Neisseria spp. aislados de muestras clínicas. Explica que el agar chocolate contiene sangre de carnero o caballo y complementos como NAD y hemina. También detalla cómo preparar, incubar y cultivar muestras en este medio, así como ejemplos de microorganismos que pueden crecer en él.

1. MEDIO DE CULTIVO: AGAR
CHOCOLATE
Mtro. Oscar Moysés Leguízamo Avendaño.
Taller:Técnicas de diagnóstico bacteriano y bioseguridad

2. GENERALIDADES
• Medio enriquecido con
complemento VX (NAD, y hemina)
de tal forma que favorece el
crecimiento de diversos patógenos
fastidiosos como Haemophilus
spp. y Neisseria spp. aislados de
materiales clínicos nobles (LCR,
aspirados invasivos) o no (sangre,
secreciones) entre otros.
• Indicado para la
investigación clínica
de microorganismos
fastidiosos en
muestras de origen
noble y en muestras
de secreciones.

3. COMPOSICIÓN
• Medio de cultivo
enriquecido.
• Se añade sangre de
carnero o caballo
antes de esterilizar
• Aislamiento de
bacterias exigentes

4. MUESTRA
• a- Tipos de muestras
• - Se pueden utilizar muestras clínicas como: orina, secreciones y otros fluidos
corporales, materiales biológicos diversos, muestras o cualquier otra muestra que pueda
contener microorganismos con capacidad de desarrollarse en este producto.
• b- Precauciones y cuidados especiales
• - Producto destinado al uso diagnóstico in vitro;
• - No usar materiales con la fecha de caducidad expirada o que presenten sello de
calidad roto o alterado.
• - Antes de descartar el material usado, esterilizar en autoclave a 121ºC por 20 minutos.
Para condicionamiento del material usado, recomendamos el uso de Detrilab.

5. INCUBACIÓN
• Fácil: Se incuban a una temperatura de 35° a
37°C, durante 18 a 24 horas.
• Difícil: Se incuban a una temperatura de 35° a
37°C, durante 18 a 24 horas pero con una
atmosfera de 5% de CO2

6. EJEMPLO
Haemophilus influenzae
neisseria gonorrhoeae
Bacitracina
Colonias clara con
aspecto aperlado.
Incubación difícil
Colonias clara grisáceas
mucoides.
Incubación fácil

7. PREPARACIÓN
• Colocar los frascos cerrados de agar base en baño maría y calentar para fundir el
medio de cultivo sólido contenido en los mismos.
• Enfriar entre 45-50 ºC, abrirlos y distribuir aproximadamente 15 ml en placas de
Petri estériles.
• Agregar 5-10 % de sangre ovina desfibrilada estéril.
• Calentar a 80 ºC durante 10 minutos mezclando frecuentemente para lisar los
glóbulos rojos presentes, tornándose de color marrón.
• Dejar enfriar a 45-50 ºC y distribuir en placas de Petri estériles.

8. ¿CÓMO CULTIVAR?
• Con asa bacteriológica estéril trabajando siempre a la llama del mechero, tomar una
mínima muestra.
• Sembrar suavemente sobre la superficie tersa del medio por el procedimiento de
agotamiento.
• Incubar las placas en posición invertida a 37ºC en aerobiosis o atmósfera de 6% de
CO2.
• Al término de 18-24 horas de incubación examinar el cultivo y determinar los
estudios a seguir según las características de las colonias.

9. MÁS EJEMPLOS.