El urocultivo es un análisis de orina que detecta agentes microbianos que causan infecciones. La muestra ideal es la primera orina de la mañana. Se requieren de 3 a 5 ml de orina estéril en un frasco. Los principales microorganismos que causan infección urinaria son E. coli, Klebsiella pneumoniae y Proteus mirabilis. El recuento de colonias en placa o método del asa calibrada cuantifican las bacterias en la orina para diagnosticar una infección.

1. Alumno: José Pedromiguel Calle Angulo

2. Definiciones Urocultivo: Es el análisis que se le realiza a la orina para detectar con exactitud y presión cual es el agente microbiano que esta causando una infección en un organismo.

3. Principios generales La muestra ideal es la de la mañana debido a que la cuenta bacteriana es mayor. Se requiere de 3 a 5ml de orina en un frasco estéril, también se puede obtener mediante una sonda uretral, suprapúbica o permanencia. La muestras para urocultivo no se toman de bolsas recolectoras de orina que forman parte de un sistema de drenaje a través de una sonda. Se lleva la muestra al laboratorio y se examina lo más pronto posible, de no ser así, la orina se puede refrigerar hasta dos horas antes de someterla a cultivo. Para establecer bacteriuria, se toman 2 muestras de chorro medio. Las muestras deben de obtenerse antes de la administración de cualquier antibiótico. El personal de salud debe instruir al paciente respecto a la técnica adecuada para recolectar la muestra.

4. Colección de muestras Punción suprapúbica Catéter

5. Recepción de la muestra Las muestras deben venir acompañadas de su respectiva hoja de pedido donde deben llenarse todos los datos solicitados por el laboratorio : Nombre y Apellido completo Nº de Historia Clínica edad sexo servicio y cama tipo de muestra: catéter, suprapúbica, etc. recibió antibióticos en los últimos 7 días, si es así anotar nombre del ATB y dosis control o sospecha de algún germen anterior

6. Rechazo de la muestra Si las solicitudes y/o las muestras no cumplen los requisitos mínimos indispensables para su correcto procesamiento el laboratorio deberá rechazarlas, algunos de los criterios a tomar en cuenta son: Muestras que no evidencian ser refrigeradas + de 2 horas de colección. Rechazar orinas de más de 24 horas colectadas. Rechazar muestras de Sonda foley. Rechazar la orina de la bolsa de un paciente con catéter. Si ha sido inadecuadamente colectada, transportada y manipulada la muestra no debe ser recepcionada.

7. Microorganismos observados Organismos que son uropatógenos reconocidos y crecen bien en medios de rutina en 24 hrs: Estos incluyen E.coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, y Pseudomona aeruginosa . Estos patógenos constituyen la causa del 80% de los bacilos gram negativos aislados. Enterobacter y Citrobacter son también comúnmente aislados. Enterococcus, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus aureus y Streptococcus agalactiae son los gram positivos más frecuentemente aislados. Organismos que son uropatógenos reconocidos y no crecen en medios de rutina: Mycobacterium tuberculosis, Chlamidia trachomatis, Neisseriae gonorrhoeae se desarrollla. Organismos que pueden ser uropatógenos, pueden requerir medios especiales y más de 24 hrs: Corynebacterium urealyticum, Corynebacterium seminale éstos se desarrollan en A.Sangre CNA.; Haemophylus influenzae, H. parainfluenzae, estos de desarrollan en A. chocolate Gardenella vaginalis en altos recuentos se ha asociado a UTI éste se desarrolla en Human Blood Agar. Todos estos medios especiales deben incubarse por 48 hrs. En CO2. Organismos que no son uropatógenos pero pueden aislarse de uretra y orina: Gran variedad de gérmenes colonizan la uretra y el área genitourinaria, estos incluyen anaerobios, Actinomyces spp, Lactobacillus, Streptococcos alfa-hemolíticos, Staphylococcos coag-negativa , y pequeños números de gram negativos.

8. Métodos Método de conteo en placa o recuento de colonias (Método de Kass): Se homogeniza la muestra mediante agitación. Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1ml de orina en 9.9ml de caldo tripticasa o de suero fisiológico estéril. Se preparan diluciones de 1:1000 y 1:10 000 a partir de la dilución 1:100. Se deposita 1ml de cada dilución en placas petri estériles que contienen agar Tripticasa o medio CLED, Mediante rotación suave se favorece la distribución homogénea de la siembra. Se incuban todas las muestras a 37 0 C de 24 a 48 horas. Para calcular el número de colonias se eligen las placas que contengan de 30 a 300 colonias. Contadas estas basta multiplicar su número por la dilución respectiva para obtener la cuenta total.

9. Método del asa calibrada: Esta estimación cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de agar sangre o medio CLED en una muestra de orina, sin centrifugar, empleando un asa de platino calibrada (4mm. De diámetro). Después de incubar las muestras a 37 0 C durante 24 a 48 horas, se cuenta el número de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100, ya que el asa de platino contiene 0.01ml de orina.

10. Procedimiento

11. Inoculación Usar el asa calibrada, flamear, dejar enfriar, mantener en posición vertical introducir solo el aro debajo del nivel de la orina previa mezcla de la orina sin centrifugar. Método para introducir el asa calibrada

12. Estriar en la placas de cultivo de la siguiente manera: Estriar de arriba hacia el centro de la placa y estriar la orina en una serie de pasos de ángulo de 90º a través del inóculo Incubación Una vez sembradas las placas deben incubarse durante 24 horas a 35 - 37° C. Sin flamear el asa estriar atravesándola línea del inoculo en el sentido de las flechas.

13. Lectura Los resultados del estudio cuantitativo se reportan de la siguiente manera: No hubo desarrollo bacteriano. Menos de 10 000 colonias por ml. Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml. Más de 100 000 colonias por ml. Cuando se obtienen dos recuentos sucesivos con más de 100 000 colonias por ml., la probabilidad de infección es del 80%, cifra que se eleva a 95% si el mismo resultado se obtiene en 3 recuentos sucesivos. Por lo general las muestran contaminadas tienden a mostrar cuentas inferiores a 10 000 colonias por ml, cuando el recuento revela valores intermedios, entre 10 000 y 100 000 colonias por ml, el examen debe repetirse.

14. Métodos cualitativos Se usan para identificar que microorganismo es el causante de la enfermedad. Se usan medios de cultivo tanto enriquecidos como selectivos.