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Métodos y técnicas
inmunológicas para el
diagnóstico de
enfermedades humanas
LIC ISABEL TIMOTEO MARTINEZ
Métodos y técnicas
inmunológicas
 Son herramientas útiles para el diagnóstico de ciertas afecciones
humanas ya sean del tipo viral, bacteriano o parasitario.
Debido a la alta especialidad y sensibilidad de antígenos y anticuerpos para reaccionar, es posible
analizarlos y cuantificarlos mediante determinaciones especiales conocidas como técnicas
inmunológicas, cuya aplicación médica permite el diagnóstico de diversas enfermedades.
Las técnicas más utilizadas en el área de salud son las siguientes:
Métodos y técnicas
inmunológicas
 Aglutinación
 Citometría
 Enzimáticas
 Inmunocromatrográficas
 Nefelometría
 Radioinmunoensayo
 Radioinmunómetro
 Electroforesis
Pruebas de aglutinación
 Las pruebas de aglutinación aprovechan los sitios
de unión de los anticuerpos como los que se
presenta en la IgM, ya que gracias a su estructura
es la inmunoglobulina con mayor capacidad de
aglutinar con los antígenos.
 Entre las pruebas más utilizadas en el laboratorio se
encuentra la hemaglutinación, la cual es
característica para la identificación de grupos
sanguíneos.
Determinación de aglutinógenos
en sangre y aglutininas en suero
 La determinación de aglutinógenos en sangre y
aglutininas en suero es una técnica de laboratorio que
permite reproducir una reacción de aglutinación in vitro,
en donde se hacen reaccionar dos grupos sanguíneos
diferentes (Tipo A y tipo B) Los glóbulos rojos del
paciente A aportarán antígenos que reaccionarán con
los anticuerpos del suero del paciente tipo B, lo que
permitirá que se forme un botón aglutinante que hace
evidente la reacción.
Pruebas enzimáticas inmunológicas
 También conocidas como
enzimoinmunoanálisis, son aquellas
que se realizan entre un antígeno y un
anticuerpo, formando un complejo
que puede medirse por una reacción
colorimétrica, la cual es catalizada por
una enzima que es acoplada al
antígeno o al anticuerpo.
 La prueba de inmunoabsorción ligada a enzimas o
ELISA (Enzyme Liked Inmmunosorbent Assay, por sus
siglas en inglés) es un método inmunoenzimático más
utilizado para determinar la presencia de antígenos,
anticuerpos, medicamentos, metabolitos, etc.
 Entre otras ventajas que ofrece se encuentra los bajos
costos de equipo y reactivos que utiliza en
comparación con otras pruebas, así como su
especificidad, sensibilidad y el procesamiento de un
gran número de muestras en corto tiempo.
Pruebas enzimáticas inmunológicas
 Las pruebas enzimáticas se requiere una
enzima que se encuentre conjugada con un
anticuerpo. Por lo regular se utiliza peroxidasa
o fosfatasa alcalina: al reaccionar con el
sustrato, estas enzimas generarán productos
de reacción como el oxígeno, capaces de
oxidar un cromógeno que proporcione una
coloración que pueda medirse en un
espectrofotómetro.
Pruebas enzimáticas inmunológicas
 Hasta ahora se ha mencionado el proceso que sufre el anticuerpo;
sin embargo, también el antígeno requiere una preparación
especial, la cual consiste en unirlo a una fase sólida (placas con
pozos o tubos) cuya composición varía entre el cloruro de
polivinilo y el poliestireno.
 El antígeno se diluye en un amortiguador, que puede ser el de
acetatos, fosfatos o el de carbonos y posteriormente se procede a
su unión con la fase sólida mediante incubación. Una vez que se
encuentra pegado el antígeno a la placa, se agrega el suero
problema, los controles y se vuelve a incubar. La reacción
antígeno-anticuerpo se hace evidente al agregar anticuerpos
conjugados con enzimas y cromógeno.
Pruebas enzimáticas inmunológicas
Proceso para
realizar una
prueba ELISA.
Técnicas inmunocromatográficas
 Son técnicas muy utilizadas en el mundo,
principalmente para realizar diagnósticos rápidos.
Se caracteriza por emplear dispositivos sencillos
(casetes) en los cuales se puede transportar los
reactivos que se van a utilizar, impregnados en una
membrana por lo general nitrocelulosa.
 Los casetes poseen una
rea de almohadilla
absorbente para colocar la
muestra biológica, la cual
subirá por capilaridad
hasta el punto donde se
encuentran los reactivos
(almohadilla de
conjugados)
Técnicas
inmunocromatográficas
 La reacción antígeno-anticuerpo que se produce en la
membrana de nitrocelulosa es de fácil detección ya
que no requiere de ningún equipo ni medida para
detectarla, puesto que se revela con un color poco
visible en la línea de test.
 Además se puede comparar el resultado con un
control que también se revela en una línea que se
encuentra en la misma membrana.
Técnicas
inmunocromatográficas
 Las ventajas de la inmunocromatrografía que ofrece son: bajo costo, no requiere refrigeración;
manejo sencillo, fácil transportación, se puede analizar sangre total, suero, plasma y orina; es
sensible y permite un diagnóstico rápido de diversas enfermedades ya que detectan bacterias, virus,
parásitos, así como hormonas.
Técnicas
inmunocromatográficas
Inmunocromatografías
 Las reacciones antígeno-anticuerpos que realizan en los
inmunoensayos permiten diagnosticar enfermedades infecciosas
como chagas, hepatitis B y C, VIH, entre otras, así como detectar
hormonas y confirmar condiciones fisiológicas como el
embarazo.
 No obstante, y a pesar de tanto avance en la ciencia, algunas técnicas son difíciles de reproducir
en algunos lugares debido a que se requiere de un equipo para su lectura como los
espectofotómetros, por lo que se hizo indispensable desarrollar estas técnicas que permiten su
traslado a sitios de difícil acceso en donde se puera realizar un diagnóstico rápido y confiable.
Vacunas
 La definición de vacunación puede realizarse desde el
punto de vista de la inmunización activa, la cual
consiste en aplicar agentes infecciosos o sus productos
para obtener una respuesta inmune de protección.
 En conclusión, la vacunación es una práctica en el cual
se induce una respuesta inmune protectora ante
enfermedades infecciosas, y se caracteriza por generar
una memoria gracias a la producción de linfocitos T y
B.
Las vacunas pueden ser aplicadas por medio de 4 vías:
 Oral (VO)
 Aérea
 Intramuscular (IM)
 Parenteral
Vacunas
Vacunas
 De acuerdo con el número de agentes infecciosos
que previenen se clasifican en monovalentes;
cuando protegen contra una enfermedad
específica y polivalentes; cuando protegen contra
más de una enfermedad.
 Son producidas a través de microorganismos vivos
atenuados, microorganismos inactivos, toxinas,
componentes de agentes infecciosos y
recombinantes.
Metodos y tecnicas inmunologicas

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Metodos y tecnicas inmunologicas

  • 1. Métodos y técnicas inmunológicas para el diagnóstico de enfermedades humanas LIC ISABEL TIMOTEO MARTINEZ
  • 2. Métodos y técnicas inmunológicas  Son herramientas útiles para el diagnóstico de ciertas afecciones humanas ya sean del tipo viral, bacteriano o parasitario.
  • 3. Debido a la alta especialidad y sensibilidad de antígenos y anticuerpos para reaccionar, es posible analizarlos y cuantificarlos mediante determinaciones especiales conocidas como técnicas inmunológicas, cuya aplicación médica permite el diagnóstico de diversas enfermedades. Las técnicas más utilizadas en el área de salud son las siguientes: Métodos y técnicas inmunológicas  Aglutinación  Citometría  Enzimáticas  Inmunocromatrográficas  Nefelometría  Radioinmunoensayo  Radioinmunómetro  Electroforesis
  • 4. Pruebas de aglutinación  Las pruebas de aglutinación aprovechan los sitios de unión de los anticuerpos como los que se presenta en la IgM, ya que gracias a su estructura es la inmunoglobulina con mayor capacidad de aglutinar con los antígenos.  Entre las pruebas más utilizadas en el laboratorio se encuentra la hemaglutinación, la cual es característica para la identificación de grupos sanguíneos.
  • 5. Determinación de aglutinógenos en sangre y aglutininas en suero  La determinación de aglutinógenos en sangre y aglutininas en suero es una técnica de laboratorio que permite reproducir una reacción de aglutinación in vitro, en donde se hacen reaccionar dos grupos sanguíneos diferentes (Tipo A y tipo B) Los glóbulos rojos del paciente A aportarán antígenos que reaccionarán con los anticuerpos del suero del paciente tipo B, lo que permitirá que se forme un botón aglutinante que hace evidente la reacción.
  • 6. Pruebas enzimáticas inmunológicas  También conocidas como enzimoinmunoanálisis, son aquellas que se realizan entre un antígeno y un anticuerpo, formando un complejo que puede medirse por una reacción colorimétrica, la cual es catalizada por una enzima que es acoplada al antígeno o al anticuerpo.
  • 7.  La prueba de inmunoabsorción ligada a enzimas o ELISA (Enzyme Liked Inmmunosorbent Assay, por sus siglas en inglés) es un método inmunoenzimático más utilizado para determinar la presencia de antígenos, anticuerpos, medicamentos, metabolitos, etc.  Entre otras ventajas que ofrece se encuentra los bajos costos de equipo y reactivos que utiliza en comparación con otras pruebas, así como su especificidad, sensibilidad y el procesamiento de un gran número de muestras en corto tiempo. Pruebas enzimáticas inmunológicas
  • 8.  Las pruebas enzimáticas se requiere una enzima que se encuentre conjugada con un anticuerpo. Por lo regular se utiliza peroxidasa o fosfatasa alcalina: al reaccionar con el sustrato, estas enzimas generarán productos de reacción como el oxígeno, capaces de oxidar un cromógeno que proporcione una coloración que pueda medirse en un espectrofotómetro. Pruebas enzimáticas inmunológicas
  • 9.  Hasta ahora se ha mencionado el proceso que sufre el anticuerpo; sin embargo, también el antígeno requiere una preparación especial, la cual consiste en unirlo a una fase sólida (placas con pozos o tubos) cuya composición varía entre el cloruro de polivinilo y el poliestireno.  El antígeno se diluye en un amortiguador, que puede ser el de acetatos, fosfatos o el de carbonos y posteriormente se procede a su unión con la fase sólida mediante incubación. Una vez que se encuentra pegado el antígeno a la placa, se agrega el suero problema, los controles y se vuelve a incubar. La reacción antígeno-anticuerpo se hace evidente al agregar anticuerpos conjugados con enzimas y cromógeno. Pruebas enzimáticas inmunológicas
  • 11. Técnicas inmunocromatográficas  Son técnicas muy utilizadas en el mundo, principalmente para realizar diagnósticos rápidos. Se caracteriza por emplear dispositivos sencillos (casetes) en los cuales se puede transportar los reactivos que se van a utilizar, impregnados en una membrana por lo general nitrocelulosa.
  • 12.  Los casetes poseen una rea de almohadilla absorbente para colocar la muestra biológica, la cual subirá por capilaridad hasta el punto donde se encuentran los reactivos (almohadilla de conjugados) Técnicas inmunocromatográficas
  • 13.  La reacción antígeno-anticuerpo que se produce en la membrana de nitrocelulosa es de fácil detección ya que no requiere de ningún equipo ni medida para detectarla, puesto que se revela con un color poco visible en la línea de test.  Además se puede comparar el resultado con un control que también se revela en una línea que se encuentra en la misma membrana. Técnicas inmunocromatográficas
  • 14.  Las ventajas de la inmunocromatrografía que ofrece son: bajo costo, no requiere refrigeración; manejo sencillo, fácil transportación, se puede analizar sangre total, suero, plasma y orina; es sensible y permite un diagnóstico rápido de diversas enfermedades ya que detectan bacterias, virus, parásitos, así como hormonas. Técnicas inmunocromatográficas
  • 15. Inmunocromatografías  Las reacciones antígeno-anticuerpos que realizan en los inmunoensayos permiten diagnosticar enfermedades infecciosas como chagas, hepatitis B y C, VIH, entre otras, así como detectar hormonas y confirmar condiciones fisiológicas como el embarazo.  No obstante, y a pesar de tanto avance en la ciencia, algunas técnicas son difíciles de reproducir en algunos lugares debido a que se requiere de un equipo para su lectura como los espectofotómetros, por lo que se hizo indispensable desarrollar estas técnicas que permiten su traslado a sitios de difícil acceso en donde se puera realizar un diagnóstico rápido y confiable.
  • 16. Vacunas  La definición de vacunación puede realizarse desde el punto de vista de la inmunización activa, la cual consiste en aplicar agentes infecciosos o sus productos para obtener una respuesta inmune de protección.  En conclusión, la vacunación es una práctica en el cual se induce una respuesta inmune protectora ante enfermedades infecciosas, y se caracteriza por generar una memoria gracias a la producción de linfocitos T y B.
  • 17. Las vacunas pueden ser aplicadas por medio de 4 vías:  Oral (VO)  Aérea  Intramuscular (IM)  Parenteral Vacunas
  • 18. Vacunas  De acuerdo con el número de agentes infecciosos que previenen se clasifican en monovalentes; cuando protegen contra una enfermedad específica y polivalentes; cuando protegen contra más de una enfermedad.  Son producidas a través de microorganismos vivos atenuados, microorganismos inactivos, toxinas, componentes de agentes infecciosos y recombinantes.