Bacterias Diagnostico bacteriologico UAI

1. BACTERIOLOGIA II
DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO
Cátedra de Microbiología
Facultad de Medicina

2. PACIENTE ENFERMO
Diagnostico presuntivo
•Clinico
•Epidemiologico
Dignostico microbiologico
Diagnostico de certeza
Directo
Indirecto
INFECCION BACTERIANA???
TRATAMIENTO

3. SOLICITUD DE LABORATORIO
 Nombre y apellido
 Historia Clínica
 Internación: sector- cama
 Estudios Solicitados
 Tratamiento antibiótico previo
 Diagnostico presuntivo ???
 Obra social
 Firma y sello del médico
El éxito del estudio depende en gran medida
de la comunicación entre el médico y el
laboratorio.

4. CONCEPTOS BASICOS PARA LA TOMA DE
MUESTRA
 Elegir el material que mejor represente el proceso
infeccioso
 Tomar la muestra en el momento adecuado y en lo
posible antes de que el paciente reciba ATB
 Obtener la muestra evitando contaminarla con la
flora normal del paciente
 Tamaño de la muestra adecuado
 Evitar el agregado de ATB que inhiban el desarrollo
 Utilizar un recipiente esteril y adecuado para su
conservacion y transporte
 Identificar la muestra correctamente

5. MUESTRAS
 SANGRE
 ORINA
 MATERIA FECAL
 MUESTRAS GENITALES
 LIQUIDOS DE PUNCION ( LCR, ABSCESOS, ETC)
 BIOPSIAS
 CATETERES
 MATERIALES VIAS RESPIRATORIAS SUPERIORES
 MTERIALES VIAS RESPIRATORIAS INFERIORES

6. TOMA Y CONSERVACION DE LAS MUESTRAS
Algunas muestras para estudios microbiologicos requieren la
utilizacion de medios de transporte para mantener viables
los microorganismos presentes en las mismas.
Los que se utilizan con mayor frecuencia son:
Medio de Stuart
Medio de Cary Blair

11. Hemocultivos
LCR

12. Temp ambiente
Hemocultivos
Temp ambiente
Medio conservación para
anaerobios
Materiales para cultivo
de germenes anaerobios
Heladera
Recipiente estéril
Esputo/aspirado
traqueal/BAL
Heladera
Recipiente estéril
Temp ambiente
Medio de transporte*
Secreciones vaginales
Secreciones oculares
Exudados de fauces
Heladera
Recipiente estéril
Orina
Temp ambiente
Medio de transporte*
Materia fecal
Temp ambiente
Recipiente estéril (SF)
Biopsias
Temp ambiente
Recipiente estéril
Jeringa
Líquidos de punción
CONSERVACION
ALMACENAMIENTO
MATERIAL
*Stuart; Cary Blair
QUE HAGO CON LA MUESTRA?
¿COMO LA CONSERVO?

13. DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO II
PROCEDIMIENTO TRADICIONAL
 Microscópia
 Cultivos
 Identificación de colonias
 Pruebas de sensibilidad
TÉCNICAS QUE NO INVOLUCRAN CULTIVO
 Detección de antígenos
 Anticuerpos monoclonales
 Técnicas moleculares
 Interpretación de los resultados
 Elaboración del informe final.

14. MICROSCOPÍA
• OPTICA
Fresco
Coloraciones o Tinciones:
Gram
Ziehl Neelsen
Giemsa
Kinyoun
• FLUORESCENCIA
Naranja de acridina
Auramina rodamina
Inmunofluorescencia
• CAMPO OSCURO
• CONTRASTE DE FASE

15. EXAMEN EN FRESCO

16. TINCION DE GRAM
Streptococcus spp
Staphylococcus
aureus
Neisseria
gonorrhoeae
Lactobacillus spp
Corynebacterium spp
Enterobacterias
Pseudomonas spp

17. Treponema pallidum
Campo oscuro

18. IMPORTANCIA DE LA MORFOLOGIA
MICROBIOLOGICA
• Eleccion del esquema inicial de identificacion
• Eleccion de las pruebas de sensibilidad antibiotica y los
antimicrobianos a ensayar
• Eleccion de los medios de cultivo
• Diagnostico de infecciones por microorganismos dificiles de
cultivar
CLINICA
•Reconocimiento fisiopatologico de la entidad clinica
•Presuncion del foco etiologico
• Eleccion de la terapia inicial
• Diagnostico rapido de ciertas infecciones

19. EXAMEN MICROSCOPICO DE LCR
DIPLOCOCOS GRAM (+)
DIPLOCOCO G(-)
COCOBACILO G(-)
TINTA CHINA

20. ZIEHL-NEELSEN KINYOUN
FLUORESCENCIA

21. MEDIOS DE CULTIVOS
 Sólidos
 Líquidos
 Selectivos
 Diferenciales
 Enriquecimiento

22.  ¿Cuanto tardan en crecer las bacterias?
 Todas las bacterias tardan lo mismo en
crecer?
 Tiempo de incubación
 Condiciones de incubación (temperatura,
O2)

23. Estufa
de cultivo
Jarra de anerobios

24.  Microscopía
 Utilización del metabolismo (utilización de azúcares, compuestos
orgánicos, etc. )
 Identificación serológica (látex)
 Demostración de toxinas y factores de patogenicidad
 Métodos automatizados
 Identificación según características genotípicas (hibridación ,
PCR)
 HPLC
IDENTIFICACION DE CULTIVOS

25. Urea - y +
Citrato + y -
Api

26. Métodos automatizados

27. DETERMINACION DE LA SENSIBILIDAD
ANTIBIOTICA
 METODO de REFERENCIA: CIM
Medio liquido
 Medio solido: E-test
CIM; CBM
16 8 4 2 1 0.5 0.25 mg/L
 Dilución en medio solido

29. • DIFUSIÓN EN AGAR ó Kirby-Bauer
Estandarizado para especies de crecimiento rápido
Halo de inhibición
•BACTERIAS SENSIBLES
•BACTERIAS MODERADAMENTE RESISTENTES
•BACTERIAS RESISTENTES

30. DIA 1
MUESTRA
EJ:orina,heces,
sangre,etc
Ej: sangre(suero)
LABORATORIO
Observación microscópica
Ensayos rápidos
Siembra de cultivos
Serologia
Informe preliminar
Exámen de los cultivos
Identificación rápida Aislamiento
Pruebas bioquímicas
Determinación de susceptibilidad a antibióticos
PACIENTE INFECTADO??
INFORME FINAL
DIA 2
DIA 3
Identificación completa

31. ANTIBACTERIANOS
-Droga de origen natural o sintético capaz de lisar
bacterias o inhibir su desarrollo.
-Poseen “toxicidad selectiva”
CLASIFICACIÓN DE LOS ANTIBIOTICOS
•Según su efecto: bacteriostático
bactericida
•Según su espectro amplio espectro
espectro reducido.
•Según su mecanismo de acción

32. MECANISMOS DE ACCION DE LOS
ANTIBIOTICOS

33. FAMILIAS DE ANTIBIOTICOS
-Beta-lactámicos:
Penicillinas,Cefalosporinas,
Carbapenemes, Monobactamos
-Aminoglicósidos
Amikacina, gentamicina
-Tetraciclinas:
Minociclina, Tetraciclina
-Sulfonamidas y Trimetoprima
-Quinolonas:
Ac.pipemidico, ciprofloxcina, norfloxacina
-Cloranfenicol
-Polipeptidos
Polimixina B, Colistin
-Macrólidos
Eritromicina, Claritromicina
-Lincosamidas:
Clindamicina, Lincomicina
-Glicopéptidos:
Vancomicina, Teicoplanina
-Estreptograminas:
Linezolid
-Rifampicinas
-Nitroimidazoles: Metronidazol
Isoniacida, Etambutol,
Pyrazinamida, Etionamida

34. INTERACCIONES ENTRE ANTIMICROBIANOS
 Sinergismo: la actividad debida a la
combinación de antimicrobianos es mayor a la
suma de los efectos inidividuales de cada uno de
ellos.
 Antagonismo: la acción combinada de dos
antimicrobianos , es menor que la del agente
más efectivo solo.
 Indiferencia: la acción combinada de dos
antimicrobianos no produce un efecto mayor
que el predecible por las actividades individuales
de cada uno.

35. ASOCIACIÓN DE ANTIBIÓTICOS
PARA QUE SE USAN?
 Obtener un efecto bactericida máximo
 Evitar la aparición de mutantes resistentes
 Tratar una infección polimicrobiana

36. RESISTENCIA BACTERIANA A LOS ANTIBIOTICOS
 NATURAL
Se transmite hereditariamente y es propia de cada género
ó especie. Ej: Proteus, Providencia, Morganella son
resistente a los antibióticos polipeptídicos
 ADQUIRIDA
Indica que un microorganismo inicialmente sensible a un
determinado antiótico desarrolla resistencia al mismo.
 PRIMARIA
 SECUNDARIA
- mutación genética
- adquisición de material genético extracromosomal.

37. MECANISMOS DE RESISTENCIA
A) Impermeabilidad
B) Modificación enzimática
del antibiótico
C) Modificación del sitio
blanco.
D) Eflujo

38. BETA LACTAMASAS
 Enzimas que inactivan los antibioticos beta-lactámicos:
penicilinas y cefalosporinas
CLASIFICACION
1) Según su espectro: * espectro ampliado
* espectro extendido
2) Según localización de los genes codificantes:
*cromosómicas
*plasmídicas
3)Según su localización: * extracelulares
* periplásmicas

39. PRODUCCION DE BETA LACTAMASAS POR BACTERIAS
GRAM POSITIVAS

40. PRODUCCION DE BETA LACTAMASAS
POR BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
MECANISMO DE ACCION DE
PENICILINA
EN BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

41. INHIBIDORES DE BETA LACTAMASAS
CARACTERÍSTICAS
 Estructura similar a los antibióticos beta-lactámicos.
 No tienen actividad antibiótica propia, o es muy baja.
 Alta afinidad por beta lactmasas. (Inhibidores “suicidas”)
 Se usan asociados a los antibióticos beta-lactámicos.
 Sulbactam
 Acido clavulánico
 Tazobactam

42. IMPERMEABILIDAD A LOS ANTIBIOTICOS

43. EFLUJO

44. Muchas gracias