Este documento describe el método de determinación de biomasa mediante el recuento de células en una cámara de Neubauer. Se explica que la biomasa es una variable importante en los bioprocesos y que los métodos directos incluyen métodos gravimétricos y de recuento celular microscópico. Luego, se detallan los objetivos, materiales y métodos para realizar el recuento celular en la cámara de Neubauer, incluyendo cómo llenarla y contar las células bajo el microscopio. Finalmente

1. DETERMINACIÓN DE BIOMASA
I.
INTRODUCCIÓN
La determinación de la biomasa es una de las variables más importantes en un bioproceso, ya
que su determinación nos lleva a la comprensión de la eficiencia del mismo. Se trata de una
variable clara para establecer las tazas de producción, de consumo de nutrientes y el cálculo
de
los
balances
demás
de
cualquier
proceso
biológico.
Los métodos clásicos de determinación de biomasa son métodos directos que se basan en el
número de células o en el peso celular. Los métodos de enumeración celular, son método de
observación, basados en propiedades físicas o en la actividad biológica. Actualmente hay un
gran interés en métodos alternativos de determinación de la biomasa. Estos métodos son
indirectos y estiman algún componente celular o alguna actividad metabólica especifica. No
requieren el examen visual de los organismos ni su incubación.
II.
OBJETIVOS
Objetivo General:
 Determinar la concentración de células por conteo en cámara Neubauer. Expresándolas
en unidades de células/mL.
Objetivo Específico:
 Reconocer la técnica de contaje en Cámara Neubauer.
 Comparar estadísticamente los valores de concentración obtenidos; de manera general y
manera aleatoria, mediante los métodos de variabilidad y desviación estándar.
III. FUNDAMENTO TEÓRICO
Biomasa es un término general que se refiere a los microorganismos presentes en un
sistema. A la vez también se puede referir como la cantidad de células, de personas o
masa de seres vivos. El objetivo de la biomasa es la reproducción de células.
La determinación de biomasa es una de las variables más importantes en un bioproceso,
ya que su determinación nos lleva a la comprensión de la eficiencia del mismo. Se trata
de una variable clara para establecer las tazas de producción, de consumo de nutrientes
y el cálculo de los balances demás de cualquier proceso biológico. Una variedad de
análisis están disponibles para la determinación de Biomasa de muestras biológicas (en
nuestro caso de la levadura Saccharomycescerevisae).
A.
Métodos directos de determinación de biomasa: Se basan en el número de células o
en el peso celular, dentro de estos métodos podemos distinguir a los siguientes:
1. Métodos gravimétricos (Peso Seco)
La cantidad total de biomasa presente en una muestra puede medirse en términos de
peso seco por unidad de volumen, ya sea como sólidos en suspensión totales (SST) o
sólidos en suspensión volátiles (SSV). Las células se separan del líquido bien por
centrifugación bien por filtración. Se expresan en g.m.s/mL.

2. 2. Métodosespectrofotométricos.
Se basan en la existencia de una relación directa entre el número total de
microorganismos presentes en una muestra y su valor de turbidez. Tras la determinación
de la turbidez de la suspensión celular mediante espectrofotometría, el resultado se
expresa en unidades de absorbancia.
3. Métodos microscópicos de recuento celular en cámaras
El recuento de microorganismos se realiza en la cuadrícula central de la cámara y se
multiplica por la profundidad, obteniéndose el número de microorganismos por unidad
de volumen (número de células/ml, generalmente).
a. CÁMARA DE NEUBAUER. Es una cámara de contaje adaptada al microscopio de campo
claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos con una depresión en el
centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula
como la que se ve en la imagen. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación entre
dos líneas consecutivas de 0.25 mm. Así pues el área sombreada y marcada L
corresponde a 1 milímetro cuadrado. La depresión central del cubreobjetos está hundida
0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos éste
dista de la superficie marcada 0.1 milímetro, y el volumen comprendido entre la
superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 milímetro cúbico, es decir 0.1 microlitro.
Conteo en cámara de Neubauer, Esta cámara se utiliza para conteo celular.
 Limpie la cámara y la laminilla de cuarzo suavemente con alcohol.
 Revise la laminilla de cuarzo que no debe estar desbordada o quebrada.
 Coloque la laminilla de cuarzo sobre la cámara en
forma vertical, este debe quedar centrada.
 Proceda a llenar la cámara. Este paso es muy
importante y definitivo en la distribución de las
células. Es recomendable llenarla con
micropipeta pequeña o con una jeringa ya que la
cámara se llena con una gota. El llenado debe ser
continuo en un solo intento.
 La cámara no puede quedar seca esto se detecta
porque en las esquinas del recuadro de llenado
se ven porciones secas. Tampoco se debe
inundar, la apariencia en la cámara es de líquido
abundante en las terminaciones del recuadro.
Figura 1. Conteo por Cámara Neubauer. Representación de la cuadricula 10 X.

3. IV. MATERIALES Y MÉTODOS
B. Metodología
Con una jeringa se tomará una cantidad de la solución previamente preparada la cual se
encuentra en un tubo de ensayo en dilución a la 10 -1 y se dejará caer unas gotas en la
cámara de Neubauer.
Se colocará la laminilla cubreobjetos sobre la portaobjetos en la zona central, para
apreciar una zona cuadriculada.
Con la ayuda de una jeringa se obtendrá una pequeña muestra del tubo de ensayo, y se
colocará en el borde del cubreobjetos. Se dejará que la solución ingrese a la cámara por
capilaridad, sin que pase a los canales laterales.
Una vez que la muestra ingrese por la cámara de Neubauer, se dejará reposar, y
posteriormente, se colocará en el microscopio.
Se realizará la cuantificación de células en las zonas de los cuadrados más pequeños de
0.05 mm. tomando precauciones para evitar contar dos veces la misma célula u omitir
alguna. Se contarán las células que estén dentro de los cuadrados las que se noten bien y
las células que estén en el lado superior y lado izquierdo de cada cuadrado de 4 x 4.

4. Luego de calcular las células en los cuadrados intermedios, extremos y los determinados
al azar, se deberá calcular el número de células/ mL (por cuadrado), y por medio de la
siguiente fórmula, se determinó el número de células por mililitro.
A la vez se deberá calcular la desviación estándar de las 25 celdas. Luego tomaremos 5
celdas al azar de la cual deberemos calcular su variabilidad (coeficiente) y su desviación
estándar para luego hacer una comparación.

5. V. RESULTADOS Y DISCUSIONES
Tabla 1.Conteo de Células en Cámara Neubauer
Tabla 2. Concentración de las células en las 25 celdas, Desviación estándar y
coeficiente de Variación 0.004
Tabla 3.Al azar 5 Células de las 25 celdas de la Cámara Neubauer

6. V. CONCLUSIONES
Se determinó la biomasa expresada en células/ml en una solución de levadura.
Se aprendió el método de recuento en la cámara de Neubauer.
Las rutas metabólicas entre las levaduras son idénticas, sugiriendo la conformación
de un grupo metabólico idéntico.
VI. RECOMENDACIONES
El margen de error en los cálculos debe ser mínimo.