El Laboratorio de Microbiología juega un papel importante al proporcionar datos precisos para ayudar en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades infecciosas. Los hemocultivos son una de las pruebas más críticas para detectar infecciones del torrente sanguíneo, ya que pueden confirmar la presencia de microorganismos en la sangre y ayudar a identificarlos y determinar la terapia antimicrobiana apropiada. El documento describe el procedimiento para la toma, transporte e interpretación de muestras de hemoc

2. El Laboratorio de Microbiología desempeña un papel integral al
proporcionar datos oportunos y precisos para ayudar en el diagnóstico,
tratamiento y control de diversas enfermedades infecciosas en
pediatría y pacientes geriátricos. Los Hemocultivos se encuentran
dentro de las pruebas diagnósticas más críticas del Laboratorio de
Medicina Pediátrica como consecuencia de la morbilidad y mortalidad
asociada con Infección del Torrente Sanguíneo
INTRODUCCION

3.  Confirmar la presencia de microorganismos en el torrente sanguíneo
 Identificar la etiología microbiana de la infección del torrente
sanguíneo
 Ayudar a determinar el origen de la infección (p.ej., endocarditis)
 Identificar un organismo para la realización de pruebas de
susceptibilidad y optimización de la terapia antimicrobiana

4. De forma general, deben realizarse, antes de la administración de la terapia
antimicrobiana sistémica, siempre que exista sospecha clínica de:
INDICACIONES DE LOS
HEMOCULTIVOS
 SEPSIS
 MENINGITIS
 OSTEOMIELITIS
 PIELONEFRITIS
 INFECCIÓN INTRAABDOMINAL
 ARTRITIS
 INFECCIONES GRAVES DE LA PIEL Y TEJIDOS
BLANDOS
 NEUMONÍA
 ENDOCARDITIS
 FIEBRE DE ORIGEN DESCONOCIDO (ABSCESO
OCULTO, FIEBRE TIFOIDEA, BRUCELOSIS, ETC.).
 LOS SIGNOS QUE ORIENTAN ESTA SOSPECHA
INCLUYEN FIEBRE O HIPOTERMIA (NEONATOS,
ANCIANOS), ESCALOFRÍOS, LEUCOCITOSIS O
GRANULOCITOPENIA, DETERIORO UNI O
MULTIORGÁNICO DE ETIOLOGÍA NO
ACLARADA, SHOCK, COMPROMISO
HEMODINÁMICO DE CAUSA DESCONOCIDA Y
COMBINACIONES DE ALGUNOS DE ELLOS.
 LA EXTRACCIÓN DE HEMOCULTIVOS ESTÁ
INDICADA, ASIMISMO, EN NIÑOS PEQUEÑOS O
ANCIANOS CON DISMINUCIÓN SÚBITA DE LA
VITALIDAD, YA QUE EN ESTAS POBLACIONES
PUEDEN NO PRESENTARSE LOS SIGNOS Y
SÍNTOMAS TÍPICOS DE LA BACTERIEMIA.

5. MATERIAL
 Ligadura de goma
 Jeringas y agujas de punción i/v
 Gasas estériles
 Guantes estériles
 Alcohol etílico 70% en Sachet o
Clorhexidina alcohólica al 2%
 Frascos de hemocultivos (para
adultos o pediátricos, según
corresponda), los cuales deben
prepararse antes de su utilización
 Mariposa
 Preparación de los frascos
 Rotular con los datos filiatorios del
paciente (nombre, apellido y número
de registro).
 Rotular con fecha y hora de
extracción (fundamental para
interpretación de los resultados).
 En frascos con código de barras,
evitar escribir o pegar etiquetas
sobre los mismos.
 En caso de toma de cada lumen del
catéter central rotular en el frasco de
que lumen se extrajo la sangre (

6. PROCEDIMIENTO DE TOMA DE MUESTRA
Hemocultivos extraídos por vías venosas
periféricas
1. Quien va a realizar la extracción lo debe de realizar con técnica aséptica
(cubrebocas, gorro, higiene de manos, bata, guantes)
2. Colocar ligadura en el paciente.
3. Palpar la vena a puncionar.
4. Realizar antisepsia con alcohol 70% sachet o clorhexidina al 2% en una zona de piel
de 5 cm de diámetro alrededor del sitio de punción, realizando círculos concéntricos,
desde adentro hacia fuera. Permitir que el alcohol se seque (1 minuto) o la
clorhexidina (2 minutos).
ATENCIÓN: no soplar para acelerar el secado del antiséptico, no tocar el área
desinfectada sin guantes estériles. Evitar hablar durante el procedimiento, para
minimizar el riesgo de contaminación de la piel preparada para la punción. Mientras
se espera secado, quitar la tapa plástica de la botella de hemocultivo y desinfectar el
tapón de goma con sachet con alcohol 70%. Dejar secar.

7. 5. Retirar guantes con lo que se realizaron las indicaciones previas
y calzarse otros guantes estériles.
6. Extraer la sangre por punción venosa.
7. Inyectar directamente la sangre en el frasco de hemocultivo (no
es necesario cambiar la aguja).
8. Si se utilizan frascos para cultivo aerobio y anaerobio, inocular
primero la botella para aerobios y luego la de anaerobios.
9. Invertir la botella varias veces para mezclar.
10. Descartar la aguja en forma segura (contenedor rojo de
paredes rígidas)
11. Desechar todo el material utilizado

8. HEMOCULTIVOS EXTRAÍDOS POR VÍAS VENOSAS
CENTRALES
En caso de sospecha de bacteriemia relacionada a
catéter (BRC) se debe realizar muestras pareadas
mediante la extracción de sangre por venopunción
periférica y a través del catéter venoso central (todos
los lúmenes), en igualdad de volumen y con un
intervalo entre ambas muestras menores a 5
minutos, empezando por la venopunción periférica.
Cada muestra debe colocarse en diferentes frascos
de hemocultivo, consignando tanto en los frascos
como en la solicitud cuál es la muestra extraída por
catéter central (también llamada RETROCULTIVO) y
cuál por vena periférica. (Recomendado para
catéteres de larga permanencia (30 días o más).

9. TRANSPORTE Y CONSERVACIÓN DE LAS
MUESTRA
Una vez obtenida la muestra e
inoculados los frascos de hemocultivos,
deben identificarse adecuadamente en
cuanto a los datos del paciente y las
parejas de frascos correspondientes a
cada una de las extracciones.
Deben enviarse rápidamente al
laboratorio conservándolos en todo
momento a temperatura ambiente. No
se deben conservar en estufas que
podrían ocasionar que cuando este
frasco se introdujese en el incubador
inteligente ya hubiera llegado a la fase
de crecimiento estacionario y por tanto
no se detectase como positivo.
RECEPCIÓN Y REGISTRO DE LOS
HEMOCULTIVOS
A su llegada al laboratorio es
fundamental verificar que los frascos
están correctamente identificados en
cuanto al paciente y la extracción de
la que proceden. Se recomienda, una
vez registrada la entrada, la
introducción inmediata de los
mismos en incubadores específicos.
Estos aparatos disponen de
programas informáticos que
registran el momento de entrada del
frasco, la curva de crecimiento, el
tiempo de positividad, el momento
de descarga e incluso la cantidad de
sangre que contienen, entre otros
parámetros.

10. MEDIOS DE CULTIVO, REACTIVOS Y PRODUCTOS
MEDIOS DE CULTIVO:
Frascos de hemocultivos. Cada control de
enfermería del hospital solicitará los frascos al
Almacén General. Deben almacenarse a
temperatura ambiente. El tipo de frascos que
deben utilizarse y la empresa que los suministra
será decisión del Servicio de Microbiología.
 Medios de cultivo para subcultivos e
identificación:
 Agar sangre (Nevera a 4ºC)
 Agar chocolate (Nevera a 4ºC)
 Agar Brucella (Nevera a 4ºC)
 Agar Mueller Hinton (Nevera a 4ºC)
 Agar MacConkey (Nevera a 4ºC)
 Agar CNA (Nevera a 4ºC)
 Medios específicos para hongos (Nevera a
4ºC)
 Medios específicos para anaerobios (Nevera
a 4ºC)
Tubos de agua destilada estéril
(Temperatura ambiente)
Sistemas de identificación:
- Discos de optoquina (Nevera a 4ºC)
- Discos de bacitracina (Nevera a 4ºC)
- Discos de novobiocina
- TSI
- Coagulasa
- DNasa
- Bilis-esculina
- Tubos para pruebas bioquímicas
- Tiras para la determinación de oxidasa
(Nevera
a 4ºC)
- Reactivos para tinciones
Discos de antibióticos para
determinación de sensibilidad (Nevera
4ºC)

11. EXAMEN BACTERIOLÓGICO
Aislamiento y
Identificación
En la cabina de seguridad biológica, donde se
encuentran todos los frascos que el sistema
ha detectado como sospechosos de
crecimiento colocados por orden numérico,
se introduce en cada uno de los tapones de
goma de los frascos una aguja con su
jeringa.
Tras invertir los frascos con una ligera
agitación, se extraen de los mismos 2 ml de
caldo que se introducen en un tubo estéril
rotulado con el número del frasco.
 Tinción GRAM:
Colocar en el interior de la cabina
portaobjetos rotulados con el número de
registro de cada frasco y una "V" si se trata
de un frasco aerobio o una "N" si es uno
anaerobio
Subcultivos
A todos los frascos sospechosos de
crecimiento se les realizarán subcultivos
en agar sangre, agar chocolate con
IsoVitalex y agar Brucella
Identificación y antibiograma preliminares
Dependiendo del resultado de la tinción
de Gram se realizarán pruebas específicas
de identificación y antibiograma
preliminares utilizando como inóculo
unas gotas del caldo de cultivo de los
frascos de hemocultivo.
a) Cocos grampositivos en racimos
b) Cocos grampositivos en cadenas o
diplococos.
c) Cocos gramnegativos.
d) Bacilos gramnegativos.
e) Cocobacilos gramnegativos.
f) Bacilos grampositivos.

12. INFORME DE RESULTADOS POSITIVOS
Tras el crecimiento de los microorganismos
en los medios de cultivo se identificarán y se
realizarán pruebas de sensibilidad por los
métodos estándar. Los microorganismos
considerados como contaminantes se
identificarán sólo al nivel de genero.
Obtenida la información definitiva, se
emitirá un informe escrito. Se informará
también verbalmente en el caso de que los
resultados sean discrepantes con los
proporcionados previamente INFORME DE RESULTADOS NEGATIVOS
Los hemocultivos negativos permanecerán
en incubación durante 5 o 21 días según
su caso y transcurrido ese tiempo se
informarán como estériles o negativos.