La práctica tuvo como objetivos separar aminoácidos mediante cromatografía en papel, identificarlos con ninhidrina e identificar muestras desconocidas. Se aplicaron soluciones de aminoácidos al papel y se desarrolló con una mezcla de solventes, separándose los aminoácidos según su polaridad. Luego de revelar con ninhidrina y calcular los factores de retención, se logró separar cinco aminoácidos y identificar las muestras desconocidas.

1. Universidad de Guayaquil
Facultad de Ciencias Químicas
Carrera: Química y Farmacia
Guía de Prácticas de Laboratorio
Practica
N: 4
SEPARACION DE AMINOACIDOS POR CROMATOGRAFIA EN
PAPEL
Objetivos de la práctica de laboratorio
 Separar aminoácidos mediante la aplicación de la cromatografía ascendente de papel y su posterior
identificación mediante el reactivo de ninhidrina.
 Diferenciar el alfa de los aminoácidos de iminoácidos
 Separar aminoácidos mediante la aplicación de la cromatografía ascendente de papel y su posterior
identificación mediante el reactivo de ninhidrina.
 Calcular el factor de retención para cada aminoácido separado.
 Identificar las muestras desconocidas de aminoácidos.
Instrucciones o consideraciones previas
La cromatografía en papel es una técnica utilizada para análisis inorgánico cualitativo, permite llevar a
cabo la separación e identificación de sustancias, trabajando con cantidades mínimas de sustancia.
Pertenece al tipo de "Cromatografía de partición" se fundamenta en que las sustancias problema, pueden
tener diferentes coeficientes de reparto en dos disolventes de inmiscibilidad limitada.
La cromatografía es esencialmente un método de separación en el que los componentes a separar se
distribuyen entre dos fases, una inmóvil (fase estacionaria), y otra móvil (fase móvil) la cual percola a
través de la primera. El proceso cromatográfico se da como resultado de repetidos procesos de absorción-
desorción durante el movimiento de los componentes de la mezcla arrastrados por la fase móvil a lo largo
de la fase estacionario (elución), produciéndose la separación debido a las diferencias en las constantes de

2. distribución de los componentes de la mezcla entre la fase estacionaria y la móvil. A la distribución final
de los componentes en función de su posición sobre el lecho estacionario, o del tiempo en que eluyen se le
denomina cromatograma.
La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido que se queda fijo en la misma posición. La fase móvil
puede ser un líquido o un gas que corre a través de una superficie y de la fase estacionaria. Las sustancias
que están en un sistema de cromatografía interaccionan tanto con la fase estacionaria como con la fase
móvil. La naturaleza de estas interacciones depende de las propiedades de las sustancias así como también
de la composición de la fase estacionaria. La rapidez con que viaja una sustancia a través del sistema de
cromatografía depende directamente de la interacción relativa entre las sustancias y las fases móvil y
estacionaria. En el caso de una mezcla, si cada componente interacciona diferente con la fase móvil y la
fase estacionaria, cada uno de ellos se moverá diferente.
La cromatografía en papel separa a los aminoácidos con base a su polaridad. Unas cuantas gotas de una
disolución de una mezcla de aminoácidos se aplica en la parte inferior de una tira de papel filtro. A
continuación, la orilla del papel filtro se coloca en un disolvente (es usual utilizar una mezcla de agua,
ácido acético y butanol). El disolvente asciende por el papel, por acción de capilaridad, y arrastra con él a
los aminoácidos. Dependiendo de sus polaridades, los aminoácidos tienen diferentes afinidades hacia las
fases móvil (disolvente) yestacionaria (papel)y en consecuencia ascienden por el papel con distinta rapidez.
Mientras más polar sea el aminoácido, se adsorbe con más fuerza al papel, que es relativamente polar. Los
aminoácidos menos polares ascienden por el papel con una mayor rapidez porque presentan más afinidad
por la fácil móvil.

3. Los aminoácidos más polares son los que tienen cadenas laterales con carga; los siguientes en polaridad
son los que tienen cadenas laterales que pueden formar puentes de hidrogeno, y los menos polares son
aquellos con cadenas laterales de hidrocarburos. Para aminoácidos con cadenas laterales de hidrocarburos,
mientras mayor sea el grupo alquilo, el aminoácido es menos polar.
En la Cromatografía en papel o capa delgada el papel que se utiliza está fabricado con celulosa pura y
fibras de celulosa para intercambio iónico. Este papel permite separaciones eficientes y rápidas de
sustancias orgánicas o inorgánicas cargadas.

4. Reactivos de laboratorio
1. Soluciones de aminoácidos 200 mg % 2-
 Alanina
 Valina
 Arginina
 Isoleucina
 prolina
2. Solvente de desarrollo compuesto de:
 Butanol (C4H100)
 Propanol (C3H80)
 Ácido acético (O CH3COOH
3. Revelador
 Solución de ninhidrina al 0.5% C9H604
Materiales de laboratorio
1 -Cámara de cromatografía
2-Tubos capilares sin anticoagulante
3-Probeta
4-Embudo
5-Pipetas serológicas
6-Papel filtro 3 MM
7- Cinta
adhesiva

5. Equipos de laboratorio
1-Horno TO
100 - 120 o
c
Actividades por desarrollar/ técnica operatoria
1. Papel filtro 3MM que debe tener dimensiones aproximadas a la cámara a utilizar
2. Realizar con un lápiz una línea a 2 cm del borde inferior del papel
3. Aplique aproximadamente 5 Ml de las soluciones de aminoácidos y muestras (Alanina,
valina, arginina, isoleucina, prolina) sobre la línea trazada, deje una distancia entre
aplicaciones de 2 cm Espere a que el papel se seque.
4. En la cámara para cromatografía agregue 50 ml de solvente de desarrollo.
5. Pegue el papel en el centro de la tapa de la cámara
6. Coloque la tapa con el papel en la cámara que tiene el solvente de desarrollo
Espere a que el solvente suba por capilaridad como mínimo 10 cm 0 1:30 horas
Retire el papel y marque con lápiz hasta donde migro el solvente de desarrollo.
7. Lleve el papel a una estufa por 3 a 5 minutos a temperatura de 100 - 120 0
C
8. Retire el papel y con atomizador moje el papel con una solución de ninhidrina al 0.5 %
9. Lleve el papel al horno entre 5 a 10 minutos a una temperatura de 80 - 120 0
C.
10. Retire el papel y marque el perfil de cada aminoácido separado
11. Realizar el cálculo de factor de retención para cada aminoácido
Resultados obtenidos (Observaciones, cálculos, datos, ecuaciones, tablas, gráficos,
figuras, fotos)

6. D: Distancia desde el punto de aplicación al centro de la mancha
d: distancia desde el punto de aplicación al frente del solvente
Calcule el factor de retención para cada aminoácido separado aplicando la formula
Distancia desde el punto de aplicación al centro de la mancha
distancia desde el punto de aplicación al frente del solvente
1. 𝐕𝐚𝐥𝐢𝐧𝐚 → 𝑹𝑭 =
𝟐,𝟓
𝟓
= 𝟎, 𝟓
2. 𝐈𝐬𝐨𝐥𝐞𝐮𝐜𝐢𝐧𝐚 → 𝑹𝑭 =
𝟎,𝟔
𝟏,𝟓
= 𝟎, 𝟒
3. 𝑷𝒓𝒐𝒍𝒊𝒏𝒂 → 𝑹𝑭 =
𝟑
𝟓
= 𝟎, 𝟔
Va Is Al
Ar
Pr
d
d
D
d
d
D
D
D
d
d
D

7. 4. 𝑨𝒓𝒈𝒊𝒏𝒊𝒏𝒂 → 𝑹𝑭 =
𝟗
𝟏𝟎
= 𝟎, 𝟗
5. 𝑨𝒍𝒂𝒏𝒊𝒏𝒂 → 𝑹𝑭 =
𝟕,𝟖
𝟗,𝟐
= 𝟎, 𝟖𝟒
 La identificación se realiza por comparación numérica de los Rf de las sustancias conocidas y
desconocidas.
Reactivo -
aminoácido
Distancia Recorrida Distancia recorrida
por el solvente
R.F
Valina 2,5 cm 5 cm 0,5
Isoleucina 0,6 cm 1,5 cm 0,4
Prolina 3 cm 5 cm 0,6
Arginina 9 cm 10 cm 0,9
Alanina 7,8 cm 9,2 cm 0,84
Conclusiones
 La cromatografía es un método de análisis que permite separar, aislar e identificar componentes
estrechamente relacionados presentes en mezclas compleja. Existen diferentes tipos
cromatografía en los cuales se utilizan una fase móvil yuna fase estacionaria, los tipos de
cromatografía pueden ser en papel, en capa fina , gas, líquido, en gel y de afinidad, el
que se realizó en la práctica fue cromatografía en papel, cumpliéndose el objetivo ya que
se separaron con éxito los aminoácidos y se pudo observar la distancia recorrida de cada uno.
 El tema fue comprendido sabiendo que, en la cromatografía, la separación de las moléculas en la
mezcla depende de la tendencia relativa de ellas a asociarse con más fuerza a la fase móvil
o a la estacionaria. La diferencia interacción se manifiesta por un movimiento
diferencial, que fue el motivo de esta práctica.
 Gracias a esta práctica nos pudimos dar cuenta que la cromatografía es un proceso importante
para separar sustancias, además de que se trata de un método simple y didáctico
Recomendaciones
 Observar que los materiales se encuentren limpios, secos y sin ninguna fisura
 Separar los reactivos (en general) en vasos de precipitación de 50Ml para evitar contaminar
todo el reactivo durante su uso.
 Calcular el tiempo exacto de la estufa para evitar a que se queme el papel filtro
 Estar pendiente que el solvente por capilaridad no suba mucho y cruce la línea superior.
 Dejar todo el laboratorio limpio y en orden antes de salir.
Bibliografía.
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 ALEMANY M. (1983). Prácticas de bioquímica. Madrid — Editorial - Alhambra

8.  ALVAREZ PABLO. (1992). Manual de Bioquímica. Ed. U. de Guayaquil
 VEJAR I (2005). Prácticas de Bioquímica Descriptiva. Sonora. Ed. Unison
 PLUMMER D. (1981) Bioquímica Práctica. Barcelona. Ed. Barcelona
 Polo Díez, L. M. (2015). Fundamentos de cromatografía. Madrid, Dextra Editorial. Disponible
en https://elibro.net/es/ereader/uguayaquil/131492?page=1.