El documento describe la técnica de cromatografía y sus aplicaciones. La cromatografía se utiliza para separar y purificar mezclas de compuestos. Se explican los tipos de cromatografía como cromatografía de gases, líquidos y en columna. La cromatografía en columna implica el uso de una fase estacionaria empaquetada en una columna y una fase móvil que separa los compuestos. La cromatografía en capa fina permite identificar compuestos desconocidos mediante el cálculo de su

1. 1

2. 2OBJETIVO GENERAL
Conocer y aplicar la técnica de cromatografía para llevar a cabo la
separación y/o purificación de una mezcla formada por dos o más
compuestos.

3. 3
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Llevar acabo la
purificación y separación
de los extractos tanto de
jitomate como de
espinaca, mediante la
técnica de cromatografía
en columna.
Verificar la pureza de las
fracciones separadas
y/o purificadas
mediante la
cromatografía en capa
fina.
Determinar el Rf
(Factor de retención)
de las fracciones
separadas o bien, de
los productos puros.

4. 4
CROMATOGRAFÍA
Método de separación, purificación e identificación de
los componentes de una mezcla que pueden ser
sólidos, líquidos o gases, los cuales se distribuyen entre
dos fases: una móvil y una estacionaria.

5. 5ELEMENTOS DE UNA
CROMATOGRAFÍA
FASE ESTACIONARIA FASE MÓVIL
Es aquella que permanece fija,
retiene a los solutos por
adsorción, puede ser líquido o
sólido.
Es aquella que se desplaza a
través de la fase estacionaria,
puede ser un gas o un líquido.

6. 6FUNDAMENTO DE LA
CROMATOGRAFÍA
 Separación de los
diferentes componentes
de una mezcla de acuerdo
a su afinidad por la
polaridad.

7. 7Factores que intervienen para
realizar una buena cromatografía
Los disolventes deben estar
libres de humedad
Elección de
la fase móvil adecuada
Correcta aplicación de la
muestra a separar.

8. 8
Mecanismos de Separación

9. 9Mecanismos de Separación
Diferente afinidad de adsorción de los componentes de la muestra sobre la
superficie de un sólido activo. La adsorción es la capacidad de las superficies
para fijar moléculas

10. 10Mecanismos de Separación
Diferente solubilidad de los componentes de la muestra en la
fase estacionaria (caso de la cromatografía de gases), o
diferentes solubilidades de los componentes en las fases móvil
y estacionaria (caso de la cromatografía líquida).

11. Diferente afinidad para el intercambio de iones de los componentes de la
muestra. La F.E. posee carga eléctrica y por ello interacciona con los
componentes de la muestra que tienen carga opuesta.
11Mecanismos de Separación

12. Se basa en diferencias de forma y tamaño entre las moléculas de los
distintos componentes de la muestra. En este caso, se la llama
también cromatografía de exclusión por tamaño o de tamiz molecular.
12Mecanismos de Separación

13. 13

14. 14
CROMATOGRAFÍA DE GASES
Cromatografía gas-sólido Cromatografía gas-líquido
Fase móvil: gas
Fase estacionaria: sólido
Fase móvil: gas
Fase estacionaria: liquido

15. 15CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS
Líquido-líquido
Líquido -Sólido
Fase móvil: LÍQUIDO
Fase estacionaria: SÓLIDOFase móvil: LÍQUIDO
Fase estacionaria: LÍQUIDO En ella se encuentran Fenómeno por el cual se lleva a
cabo cada una de sus
separaciones:
1. Columna
2. Capa fina
3. Papel
1. Gravedad
2. Capilaridad

16. 16

17. 17
Consiste en un tubo de calibre estrecho
que esta empacado con un sólido inerte
finamente dividido que sostiene la fase
estacionaria en su superficie. La fase
móvil ocupa los espacios abiertos entre
las partículas del empaque.
 CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

18. 18
¿QUÉ ES UNA ELUCIÓN?
La elución es el proceso en el que los solutos son lavados a través de una fase
estacionaria mediante el movimiento de una fase sólida. La fase móvil que sale de
la columna se denomina eludido o eluato.
¿Y UN ELUYENTE?
El eluyente es un disolvente utilizado
para acarrear los componentes de
una mezcla a través de una fase
estacionaria.

19. 19
¿COMO SE HACE UNA CROMATOGRAFÍA EN
COLUMNA?

20. 20
Empaque de la columna con el adsorbente y el eluyente
adecuado.
ETAPA 1.

21. 21
Adición de la mezcla a separar en la columna.
ETAPA 2.

22. 22
Elución de la columna hasta lograr la separación de los
componentes de la mezcla.
ETAPA 3.

23. 23
Recuperación de las sustancias ya separadas.
ETAPA 4.

24. 24

25. 25
RECOMENDACIONES
1. Si las bandas de los componentes se
encuentran muy cercanas, cambiar la
columna por una mas larga y ancha.
2. Si las bandas están muy separadas,
cambiar la columna por una mas corta y
de menos diámetro.

26. 26
¡NO VAYAS A DEJAR
QUE SE SEQUE LA
COLUMNA!

27. Tiempo de
Retención
27
Tiempo medio
justo en el que
se encuentra
separada la
mayor
concentración de
muestra
Tiempo
Muerto
Tiempo que
transcurre
entre la
elución de 2
compuestos

28. 28

29. 29
Separación de
componentes
de plantas
medicinales
Separación de
componentes
de una síntesis
orgánica
Separación de
colorantes
APLICACIONES DE LA
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

30. 30
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

31. 31
VENTAJAS DE REALIZAR UNA
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
SIMPLE
RESULTADOS
REPRODUCIBLESRÁPIDA

32. 32FACTORES INFLUYENTES EN LA CROMATOGRAFÍA EN CAPA
FINA
Temperatura
Limpieza de
las placas
Pureza de los
disolventes
Corrientes de
aire

33. Desarrollo de la Cromatografía en Capa Fina
33
Colocación
de la
muestra
1 cm
A distancia
media de las
esquinas.
Se prepara la cámara
cromatográfica

34. El cromatograma se deja eluir colocando
el lado inferior de la placa en un
disolvente adecuado.
34
Se debe evitar el contacto directo
entre la mezcla

35. Al haber llegado
el eluyente a
una altura fija, la
placa se retira y
se seca.
Se forman
manchas
individuales
de soluto que
pueden ser o
no visibles
35

36. 36
Y si no son notorias las
manchas?
Aplica una sustancia fluorescente y
visualízala con rayos UV

37. 37
Y si aun no se notan las
manchas?
Puedes utilizar un revelador
Químico

38. Se traza una línea desde el origen
hasta la nueva posición en la placa y
se mide.
Trazamos y medimos otra línea
desde el origen hasta la altura del
eluyente
38

39. • De acuerdo al comportamiento frente al reactivo de
revelado
Valor de su Rf
39

40. Parámetro físico de un producto en cierta fase móvil.
Es formalmente equivalente al factor de retraso (R), y por tanto, esta relacionado con el
factor de retención.
La relación entre la velocidad de la zona del soluto y la de la fase móvil, que es
equivalente a una relación de longitudes.
40

41. 41
Rf =
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 (𝑋)
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑒𝑙𝑢𝑦𝑒𝑛𝑡𝑒 (𝑌)

42. Identificación de sustancias desconocidas.
Carácter especifico de cada producto.
Determinar la pureza del compuesto separado comparándolo
con un Rf predeterminado.
42

43. 43
 Útil para el análisis
cualitativo
 No requiere ningún
tipo de equipamiento
 Sencillo
 Limitaciones en estudios
cuantitativos
 Precisión y exactitud
deficientes
 Técnica no potente

44. Aplicaciones de C.C.F
Identificació
n de
sustancias
Concentració
n de una
sustancia
Grado de
pureza
Separación y
cuantificació
n de
ingredientes
activos
Cuantificació
n de
vitaminas
Separación
de
componente
s de
muestras
botánicas,
productos
naturales y
bioquimicas
Generales Particulares
44

45. 45

46. 46

47. 47
Carotenoide de
estructura
sencilla
40 átomos de
carbonos
Pigmento de
frutas y
verduras rojas.
Familia de los
β-Carotenos
Se transforma
en vitamina A
Antioxidante

48. 48
Propiedades
antioxidantes
Antioxidantes
naturales
Previene la
aparición de
cáncer
Ayudan a
reducir el
colesterol
Mantienen sanos
el cabello, la piel
y las uñas
Mejoran la falta
de visión o la
ceguera
nocturna
Propiedades de los
Licopenos

49. Parte experimental 49

50. Propiedades de los reactivos 50

51. Formula Molecular C6H14
Peso molecular 86.18 g/mol
Punto de ebullición 69°C
Punto de fusión -95.6°C
Solubilidad Insoluble en agua
Densidad 0.66 g/ml
HEXANO 3
1 0
51

52. ACETATO DE ETILO
Formula Molecular C4H8O2
Peso molecular 88.1 g/mol
Punto de ebullición 77°C
Punto de fusión -83°C
Solubilidad Poco soluble en agua *
Densidad 0.898 g/ml
3
1 0
52

53. Formula Molecular CH4O
Peso molecular 32.04 g/mol
Punto de ebullición 64.7°C
Punto de fusión -97.8°C
Solubilidad
En agua, etanol, éter, benceno,
cetonas
Densidad 0.9423 g/ml
METANO
L 3
3 0
53

54. AZUL DE
METILENO
Formula Molecular C16H18N3ClS
Peso molecular 319.85 g/mol
Punto de ebullición Se descompone
Punto de fusión 100°C
Solubilidad agua
Densidad 1.757 g/ml
1
1 0
54

55. 55Experiencia 1. Separación de Carotenos.
Colocar una columna para
cromatografía
Agregar un pequeño
trozo de algodón hasta
la base de la columna.
Empacar la columna con 4 gr. de
silica.gel
Hexano-Acetato de etilo (1:1)
Introducir circulo de papel filtro al
interior de la columna
Mantener goteo
uniforme en la llave de
salida durante todo el
procedimiento.
Asentarlo en la superficie de la silica-
gel
Llenar en su totalidad la columna
cromatográfica con el disolvente.
Esperar hasta que el
disolvente quede
ligeramente arriba de la
fase estacionaria.
Nunca permitir
que el nivel de
disolvente baje
más allá de la
superficie de la
sílica -gel

56. 56
Depositar 10 gotas del
concentrado de espinacas sobre
papel filtroisolvente
Dejar gotear el disolvente
Llenar lentamente la columna con
la mezcla de hexano-acetato de
etilo
Mantener el goteo hasta que los
pigmentos penetren en la silica- gel
Volver a abrir la llave para el
desarrollo del cromatograma
Recoger la primera fracción colorida
en tubos de ensayo numerados y
cubiertos con papel aluminio
Cuando termine de eluir, rellenar
con acetato de etilo
Recoger la segunda fracción colorida
en tubos de ensayo numerados y
cubiertos con papel aluminio

57. 57Experiencia 3. Separación por cromatografía en
capa fina de una mezcla de colorantes.
En un cromatoplaca de 5x2 cm
dibujar una línea de .5 cm del
borde inferior
Aplicar sobre esta dos puntos
equidistantes una mezcla de
colorantes
Desarrollar el cromatograma en una
mezcla de acetato de etilo-etanol
(7:3)
Dejar que eluya hasta .5 cm antes del
borde superior de la placa
Secar, observar y calcular los valores
de Rf para cada componente
Con ayuda de una micropipeta
Dejar secar
Tener cuidado de que la mezcla no
rebase los puntos de aplicación

58. 58
Bibliografías
1. F. James Holler y Stanley R. Crouch (2015) Fundamentos de Química analítica. 9ª Edición. Cengage Learning
Editores, México. Páginas 861-952
2. Gary D. Christian (2009) Química analítica. 6ª Edición. Editorial McGraw-Hill, México. Páginas 555-631
3. Gaston Charlot (1975) Curso de química analítica general. 1ª Edición. Editorial Toray-Masson, Barcelona. Páginas
135-158
4. Hobart H. Willard et. al. (1991) Métodos instrumentales de análisis. Grupo editorial Iberoamericana, México.
Páginas 505-638
5. Laura E. Romero Robles y Blanca E. Rodríguez Esparza. (2014) Química Experimental Manual de Laboratorio. 1ª
Edición. Editorial Pearson Educación, México. Páginas 39-50
6. Séamun P.J. Higson. (2007) Química analítica. 1ª Edición. Editorial McGraw-Hill/interamericana editores S.A de
C.V, México. Páginas 207-245
7. Skoog D. A. et. al. (1971) Principios de análisis instrumental. 5ª Edición. Editorial McGraw-Hill, México. Páginas
730-751
8. Skoog D. A. et. al. (1997) Fundamentos de química analítica. 4ª Edición. Editorial Reverté, Barcelona. Páginas
664-687
9. W. F Pickering (1976) Química analítica moderna. 1ª Edición. Editorial Reverté, México. Páginas 626-657
10. Xorge Alejandro Domínguez (1982) Química Orgánica Experimental. 1ª Edición. Editorial Limusa, México. Páginas
105-108