Este documento describe un experimento para identificar carbohidratos mediante pruebas de poder reductor y formación de osazonas. Los resultados muestran que la glucosa, fructosa y sacarosa hidrolizada son reductores y forman osazonas amarillas, mientras que la sacarosa y el almidón no son reductores y no forman osazonas. Adicionalmente, se sintetizó pentaacetato de β-D-glucosa con un punto de fusión de 146°C. Las pruebas demuestran las propiedades de los carbohidrat

1. Practica VII
Poder reductor, formación de osazonas y síntesis de
pentaacetato de alfa-beta-D-Glucosa.
Integrantes del equipo 3.
QBP
Introducción.
Los carbohidratos o glúcidos son las biomoléculas más
abundantes en la naturaleza. Cada año, el proceso de
fotosíntesis de plantas y algas, convierte más de 100 000
millones de toneladas métricas de CO2 y H2O en celulosa y
otros productos vegetales. Los glúcidos pueden ser
monosacáridos,oligosacáridos(disacáridos,trisacáridos, etc.)
y polisacáridos.
Antecedentes.
Los disacáridos y los polisacáridos se pueden hidrolizar para
producir monosacáridos que reaccionan de acuerdo con los
grupos hidroxilo y carbonilo que poseen. Por ejemplo, tienen
la capacidad de reducir algunos compuestos en medio
alcalino, por lo que se han denominado azúcares reductores,
contienen un carbono anomérico libre,es decir, que no forma
parte del enlace glucosídico, y dan resultados positivos con
los reactivos de Benedict o Fehling. Los carbohidratos no
reductores son aquellos que no contienen un carbono
anomérico libre y, por lo tanto, no dan pruebas positivas con
dichos reactivos.
Objetivos.
Generales.
Evidenciar el poder reductor de algunos carbohidratos.
Destacar la importancia de la formación de ozasonas para la
identificación de azucares.
Particulares.
Observar la base de los mecanismos de reacción.
Parte experimental.
Poder reductor.
Colocar 6 tubos de ensayo en una gradilla; a cada tubo
agregar 2 mL de solución deFehling recientemente preparada
(1 mL de solución “A” y 1 mL de solución “B”) y 5 mL de
solución al 10%decada uno de los azúcares a ensayar. Agitar
cada tubo y colocarlos en un baño maría con agua hirviendo
durante dos minutos. Observar y anotar los resultados.
Formación de osazonas (glucosa y fructosa).
Colocar en un tubo de ensayo 5 mL de solución al 2% del
azúcar a ensayar, agregar 3 mL del reactivo de fenilhidrazina
recientemente preparada y 0.2 mL de solución saturada de
bisulfito de sodio; mezclar, calentar en un baño maría y
anotar el tiempo en que se forman las osazonas. Continuar el
calentamiento por 15 minutos más y enfriar lentamente;
filtrar y lavar el precipitado con agua fría, tomar con un
agitador una pequeña muestra y colocarla sobre un
portaobjetos; observar al microscopio y dibujar los cristales
de las osazonas.
Formación de osazonas de disacáridos (sacarosa y lactosa).
Preparar las osazonas delos disacáridos, siguiendo la técnica
empleada para monosacáridos; anotar el tiempo en que se
colocan los tubos en el baño maría y tomar muestras de las
mezclas de reacción a los 15, 20 y 30 minutos. Enfriar las
muestras así como la mezcla de reacción, filtrar y observar al
micros
Formación de osazonas de polisacáridos.
Colocar en un tubo de ensayo 5 mL de solución de almidón al
2% y proceder como en la técnica para monosacáridos. copio
las osazonas formadas.
Formación de osazonas de disacáridos y polisacáridos
hidrolizados (sacarosa y almidón).
Formación de osazonas de los productos de hidrólisis. Colocar
5 mL de los hidrolizados en tubos de ensayo y proceder como
en la técnica para monosacáridos.
Pentaacetato de β-D-glucosa.

2. En un mortero mezclar 2.0 g (0.01 moles) de glucosa anhidra
y 1g (0.01 moles) de acetato de sodio anhidro; pasar la
mezcla a un matraz bola de 50 mL, agregar anhídrido;
Continuar la agitación hasta que el sólido formado quede
finamente dividido y dejar reposar durante 30 minutos
agitando ocasionalmente. Filtrar el sólido y recristalizar de
agua caliente, utilizando carbón activado para decolorar.
Resultados.
Poder reductor.
Carbohidrato Resultado
Sacarosa Azul Fuerte (Negativo)
Lactosa Naranja Ladrillo (Positivo)
Glucosa Naranja Ladrillo (Positivo)
Fructosa Naranja Ladrillo (Positivo)
Almidón Azul Cielo (Negativo)
Formación de osazonas.
Carbohidrato Resultado Tiempo
Glucosa (Monosacarido) Positivo (P.P.* Amarillo) 15:00 min
Fructosa (Monosacarido) Positivo (P.P.* Amarillo) 10:50 min
Sacarosa (Disacarido) Negativo --
Lactosa (Disacarido) Negativo --
Almidón (Polisacarido) Negativo --
Sacarosa H* (Disacarido) Positivo (P.P.* Amarillo) 20:00 min
Almidón H* (Polisacarido) Negativo --
H*: Hidrolizado, P.P.*: Precipitado, Maltosa: Sin reactivo.
Pentaacetato de β-D-glucosa.
Punto de fusión: 146 °C
Discusión.
Poder reductor.
Si se calienta una suspensión de hidróxido de cobre en
solución alcalina, se forma óxido cúprico de color negro:
Sin embargo, en presencia de sustancias reductoras, se
precipita óxido cuproso de coloración parda-orín:
Los hidratos de carbono que poseen un aldehido libre o
potencialmente libre o un grupo cetónico tienen propiedades
reductoras en solución alcalina., Además, los monosacáridos
actúan como agentes reductores en soluciones débilmente
ácidas. La formación de un precipitado rojo y la decoloración
de la solución indican prueba positiva para azúcar reductor.
Formación de osazonas.
Los compuestos que contienen el grupo —CO—CHOH—
forman osazonas cristalinas con fenilhidrazina. Los cristales
de osazona tienen forma y puntos de fusión característicos lo
cual ayuda a la identificación de los azúcares reductores.
Otros datos que pueden ayudar son el tiempo de formación
de los cristales y precipitación de la osazona en frío o en
caliente.
La fenilhidrazina reacciona con el grupo carbonilo de los
azúcares dando la fenilhidrazona que a su vez reacciona con
dos moléculas más de fenilhidrazina para formar la osazona.
Tanto la glucosa, como la fructosa y la manosa forman la
misma osazona, puesto que la configuración
de los átomos de carbono 3, 4, 5 y 6 es la misma
para los tres azúcares. Ejemplo de la glucosa, fructosa y
sacarosa hidrolizada (Imágenes a la derecha; se observa el
esquema y la foto tomada).
Conclusiones.
Los distintos resultados de las pruebas nos ayudan a
identificar los diferentes carbohidratos dentro de un
compuesto y/o sustancia
Bibliografía.

3. I. León. F., (2000). Bioquímica experimental. Reverté,
España: Pág(s) 175-181