La inmunodifusión radial es una técnica que puede determinar cuantitativamente la concentración de un antígeno. Involucra incorporar un anticuerpo en agarosa fundida dentro de una caja de Petri, cortar pozos para antígenos de concentración conocida y muestras desconocidas, y medir el diámetro de los anillos de precipitación formados para construir una curva de calibración y determinar la concentración de muestras desconocidas.

1. INMUNODIFUSIÓN
INMUNOLOGIA APLICADA
CARLOS ALBERTO
VIZCARRA PARRA 4-03

2. 
La reacción antígeno-anticuerpo (Ag-Ab)
es una unión molecular entre el epitope
(antígeno) y la región hipervariable del
anticuerpo, mediante interacciones no
covalentes o secundarias.

3. 


Puentes de hidrógeno
Fuerzas iónicas
Fuerzas de van der Waals.
Estas fuerzas sólo se convierten en agentes
de unión efectivos cuando ocurren a
distancias muy cercanas.

Las interacciones hidrofóbicas intervienen
también y constituyen el 50% de la fuerza
total.

4. 
La asociación Ag-Ab está determinada por
la ley de acción de masas, es reversible y
está definida por una constante de
equilibrio.
Ag + Ab
Ag—Ab

5. La afinidad se refiere a la fuerza de unión entre el
anticuerpo y un epitope.
La avidez se refiere a la fuerza de unión mostrada
por los anticuerpos a un antígeno complejo.
La
reacción entre un anticuerpo determinado y el
antígeno que ha dado lugar a su producción se
conoce como interacción específica.

6.  Reacción primaria
 Reacción secundaria

La reacción primaria es la formación del
complejo Ag-Ab y la reacción secundaria es la
evidencia de esos complejos mediante la
observación de un fenómeno, el cual depende
de la naturaleza del antígeno, las propiedades
de los anticuerpos y la presencia de otros
factores en el medio de reacción.

7. 
La precipitación ocurre con la mayoría de
los antígenos, debido a que éstos tienden
a ser multivalente, es decir, tienen varios
determinantes antigénicos por molécula,
al que los anticuerpos pueden enlazarse.

Cada anticuerpo, a su vez, tiene por lo
menos dos sitios de unión para los
antígenos, de modo que se entrecruzan
formando una gran matriz de agregados
antígeno:anticuerpo.

8. 
Cuando el Ag y el Ab difunden uno hacia a otro
en agar, formando una banda o halo de
precipitación visible.

10. 
Esta técnica se realiza en placas de agar en
donde se practican pocillos, en uno de estos
pozos se coloca el suero o muestras a
investigar y en el resto se coloca el anticuerpo
preparado frente a la sustancia que se quiere
identificar.

11. Cuando difunden, ambos sistemas se
encontrarán y se formará en la zona de
equivalencia
el
complejo
Ag-Ab
correspondiente que se hace visible en forma
de una línea de precipitación.

12. 
En una preparación que contenga varios
antígenos, se obtendrán múltiples líneas de
precipitado.

La técnica de Ouchterlony permite
identificar sustancias según la forma de
unirse las líneas de precipitación de dos o
varios sistemas.

14.  La inmunodifusión
radial (IDR) es una
técnica que puede
determinar
cuantitativamente
la concentración de
un antígeno.
Es una técnica
sensible que es
usada
clínicamente para
detectar niveles
de proteínas
plasmáticas.


15. 
Un anticuerpo es incorporado en agarosa
fundida, la cual es vertida dentro de una
caja de Petri la cual se deja solidificar.

Se cortan pequeños pozos dentro de la
agarosa y estos son llenados con
concentraciones conocidas de antígeno
correspondientes al anticuerpo, con el
objeto de construir una curva de
calibración.

16. 
Las muestras desconocidas se colocan
dentro de los pozos.

Los antígenos en solución difundirán hacia
fuera del pozo en un patrón circular
rodeando al pozo.

El anticuerpo está presente en exceso y la
difusión del antígeno continuará hasta que
se forme un precipitado antígenoanticuerpo en forma de anillo estable.

17. 
En esta línea es donde está presente el
mayor número de complejos, ya que en
ese punto el antígeno y el anticuerpo están
en proporciones iguales. Esta es conocida
como la zona de equivalencia.

Generalmente toma de 24 a 48 horas para
que ocurra la difusión óptima y la
precipitación se haga evidente. Para cada
antígeno, se formará una precipitación final
en anillo de cierto diámetro.

18. 
De las concentraciones conocidas estándar, se
traza una curva de calibración, colocando en
los ejes: concentración de antígeno vs
mediciones de diámetro cuadrado de los
anillos. A partir de esta curva de calibración
lineal, la presencia y cantidad de antígeno en
las muestras desconocidas pueden ser
determinadas.