Laboratorio ELISA

1. BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR
ELISA
ELISA
LABORATORIO

2. Medicina Humana
EQUIPO
ROMULO CASTRO
VELIZ
Medicina Humana
REYNALDO ÁVILA
ROSADO
Medicina Humana
FATIMA ALDORADIN
SOTELO

3. Introducción
Tipos
Ventajas y Limitaciones
Aplicaciones Clínicas
Principio Funcional
Caso Clínico
Índice

4. INTRODUCCIÓN

5. El ELISA es una técnica que se basa
en el uso de un antígeno o un
anticuerpo marcado con una enzima;
al estar uno estos componentes
marcado y fijado a un soporte, se
interrumpe la reacción antígeno-
anticuerpo, posteriormente se le
agrega un sustratoespecifico sobre la
enzima que producirá un color
determinado observable a simplevista
o cuantificable por un
espectrofotómetro o analizar la
reacción antígenoanticuerpo. Existen
diversos tipos de ELISA los que se
marca el anticuerpo: directo,indirecto,
sándwich: Doble, Heterólogo.

6. TIPOS

7. ELISA DIRECTO
ELISA INDIRECTO

8. ELISA SÁNDWICH
ELISA COMPETITIVO

9. VENTAJAS Y
LIMITACIONES

10. VENTAJAS
Amplia aplicación
Facilidad de
uso
No requiere
equipamiento
costoso
Flexibilidad
Altamente
específico
Altamente
sensible
Altamente
reproductible
Valiosa en aplicaciones
cuantitativas

11. LIMITACIONES
Validez de anticuerpos Dificultad con
antígenos
pequeños
Tiempo y trabajo
manual
Interferencias
en muestras
complejas
No permite la
detección en
tiempo real Costos altos

12. APLICACIONES
CLÍNICAS

13. MONITOREO DE
MARCADORES TUMORALES
DETECCIÓN DE ENFERMEDADES
INFECCIOSAS
DETECCIÓN DE ENFERMEDADES
AUTOINMUNES
EVALUACIÓN DE HORMONAS Y
MARCADORES ENDOCRINOS
DETECCIÓN DE
ALERGIAS
VIH
Hepatitis
Anticuerpos antinucleares
y antitransglutaminasa
Anticuerpos IgE
específicos
Antígeno Prostático Específico
Carbohidrato-125
Alfafetoproteína
Detección de hormonas tiroideas
Medición de la hormona luteinizante

14. PRUEBAS DE EMBARAZO
DETECCIÓN DE ENFERMEDADES
INMUNOLÓGICAS
DETECCIÓN DE ENFERMEDADES
INFECCIOSAS EMERGENTES
INVESTIGACIÓN CLÍNICA
EVALUACIÓN DE ENFERMEDADES
NEURODEGENERATIVAS
Síndrome antifosfolípido
Granulomatosis de
Wegener.
Hormona gonadotropina
coriónica humana
Anticuerpos y
antígenos específico
Estudiar
biomarcadores
Alzheimer
Parkinson

15. PRINCIPIO
FUNCIONAL

16. PREPARACIÓN
DE REACTIVOS
Y MUESTRAS
RECUBRIMIENTO
DE LA PLACA
BLOQUEO INCUBACIÓN CON
LA MUESTRA
LAVADO
1 2 3 4 5
Preparar los reactivos
necesarios, que incluyen
los anticuerpos
específicos y las
soluciones de lavado.
Diluir la muestra
biológica que se va a
analizar (suero sanguíneo,
plasma, orina, etc.) si es
necesario.
Agregar una solución
que contiene la proteína
a detectar (antígeno) a
una placa de
microtitulación.
Incubar la placa para
permitir que el antígeno
se adhiera a la superficie
de la placa
(generalmente se realiza
durante la noche).
Agregar una solución
de bloqueo, como
albúmina de suero
bovino (BSA), a la placa
para evitar la unión no
específica de proteínas.
Agregar la muestra
diluida a la placa y
permitir que los
anticuerpos específicos
en la muestra se unan al
antígeno recubierto en
la placa.
Incubar durante un
período de tiempo
específico.
Lavar la placa varias
veces para eliminar las
moléculas no unidas.

17. DETECCIÓN LAVADO
NUEVAMENTE
DESARROLLO LECTURA ANÁLISIS DE
DATOS
6 7 8 9 10
Agregar un anticuerpo
secundario,
generalmente marcado
con una enzima, que se
une a los anticuerpos
primarios presentes en la
muestra.
Incubar la placa
nuevamente para
permitir que el
anticuerpo secundario se
una.
Lavar la placa para
eliminar el anticuerpo
secundario no unido.
Agregar un sustrato
para la enzima unida al
anticuerpo secundario.
La enzima catalizará
una reacción que
generará un producto
de color (o
fluorescente)
detectable.
Medir la intensidad del
color (o fluorescencia)
generada en cada pozo
de la placa con un
espectrofotómetro.
La intensidad del color
está directamente
relacionada con la
cantidad de antígeno
presente en la muestra.
Utilizar los datos
obtenidos para
determinar la
concentración del
antígeno en la muestra.
Comparar los
resultados con
estándares de
calibración para
cuantificar la cantidad
de antígeno presente.

18. CASO CLÍNICO

19. Anticuerpos
contra el VIH
Paciente informa sobre múltiples parejas sexuales sin
protección en el último año .
El médico decide realizar una prueba de detección del VIH.
Situación Clínica:
Si resulta ser positivo se procede a realizar pruebas confirmatorias para confirmar la infección por VIH.
Resultado:
Muestra de
sangre
Se lava la
placa
DETECCIÓN DEL VIH MEDIANTE ELISA
Hombre de 30 años
Detección del VIH
Preocupaciones sobre su exposición
a situaciones de riesgo.
Paciente:
Procedimiento:
Se agrega un anticuerpo
secundario para producir un
cambio de color
Prueba ELISA
para detectar
La muestra se coloca
en una placa de
microtitulación con
una proteína viral
Se mide la intensidad
del cambio de color
Antígenos p24
del VIH

20. Gracias