Trabajo fin de Prácticas en ADL Biopharma. Máster en Biotecnología Industrial y Ambiental. Universidad Complutense de Madrid (UCM).

1. MEJORA DE LA PRODUCCIÓN DE
PRISTINAMICINA
Silvia Cobelo Gómez
Directora: Alma M. Botas Muñoz // Tutora: Isabel de la Mata Riesco
INTRODUCCIÓN
La resistencia a los compuestos antimicrobianos es una de las mayores amenazas para la salud humana a nivel mundial. En este contexto, el
introducir antibióticos activos frente a bacterias multirresistentes representa una alternativa para el control de la resistencia bacteriana.
Entre ellos se encuentra la pristinamicina:
o Producida por Streptomyces pristinaespiralis
o Amplio espectro de acción
o PROBLEMA: No rentable a nivel industrial.
SOLUCIÓN
PROBLEMA:
OBJETIVOS
Desarrollo de nuevas cepas mejoradas de
Streptomyces pristinaespiralis con el fin de
incrementar la producción basal del antibiótico
pristinamicina.
✓ Mutación con luz UV
✓ Mutación con nitrosoguanidina (NTG)
✓ Genome shuffling
✓ Selección natural
METODOLOGÍA
CEPA PRODUCTORA DE PARTIDA
S. pristinaespiralis
1
SIEMBRA
EN ESTRÍA BIOENSAYO EN TACO
FERMENTACIÓN EN MATRAZ
HPLC
SELECCIÓN
MEJORES
PRODUCTORES
MUTAGÉNESIS AL AZAR
(alternando)
3 4 5
2
PRODUCCIÓNCRECIMIENTO
6 7 8
MEJORES
MUTANTES
SIEMBRA EN SLANT
RESULTADOS
REFERENCIAS
Xu, B., Jin, Z., Wang, H., Jin, Q., Jin, X. & Cen, P. (2008). Evolution of Streptomyces pristinaespiralis for resistance and production of pristinamycin by genome shuffling. Appl Microbiol Biotechnol, 80(2), 261-267.
Jin, Z., Lei, Y., Lin, J. & Cen, P. (2006). Improvement of pristinamycin-producing Streptomyces pristinaespiralis by rational screening. World Journal of Microbiology and Biotechnology, 22(2), 129-134.
Yu, G., Jia, X., Wen, J., Lu, W., Wang G., Caiyin Q. & Chen, Y. (2011). Strain Improvement of Streptomyces roseosporus for Daptomycin Production by Rational Screening of He–Ne Laser and NTG Induced Mutants and Kinetic
Modeling. Appl Biochem Biotechnol, 163, 729–743.
CONCLUSIONES
39 h
MUTANTES
MEJORADOS
UV
Genome shuffling
NTG
Selección
natural
NTG
ESPORAS
MUTANTES
MEJORADOS
PARED
MEMBRANA PROTOPLASTOS
MUTANTES
MEJORADOS
UV
28 y 32 h
0
50
100
150
200
250
300
350
Producción(%)
28 h 32 h
0
50
100
150
200
250
300
350
400
Producción(%)
28 h 32 h
0
50
100
150
200
250
300
Producción(%)
28 h 32 h
0
50
100
150
200
250
300
Producción(%)
28 h 32 h
Gráfico 1. Producción de pristinamicina por cepas mutadas con NTG
Gráfico 2. Producción de pristinamicina por cepas
mutadas mediante genome shuffling
Gráfico 3. Producción de pristinamicina por cepas mutadas
con UV
Gráfico 4. Producción de pristinamicina por cepas mutadas mediante selección natural
o Se obtuvieron nuevas cepas de S. pristinaespiralis con mayor
producción de pristinamicina que las cepas iniciales, pero
insuficiente a nivel industrial.
o Se propone aplicar un método de mutación dirigida.