Microscopia teoria

CURSO DE VERANOCURSO DE VERANO
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE
CHIRIQUÍ
FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES
Y EXACTAS
ESCUELA DE BIOLOGÍA
CURSO DE BIOLOGIA GENERAL
ELABORADO POR:
PROF. PABLO ANTONIO ACOSTA

MICROSCOPIA
OPTICA
Acosta, Pablo UNACHI, 2013
* En nuestro trabajo con los seres vivos encontraremos diferentes tipos de
microscopios con distintos aumentos, desde el microscopio estereoscópico
de disección que aumenta de 4 a 40 veces, hasta el electrónico que puede
aumentar hasta 100.000 veces. Generalmente trabajamos con microscopios
compuestos semiprofesionales que aumentan de 100 a 1500 veces.
A.- Microscopía óptica:
M.O. Simple: lupas monoculares y binoculares.
M.O. Compuesta:
Estereomicroscopios.
De luz ultravioleta
De fluorescencia.
De contraste de fases.
De campo oscuro
De polarización*.
Microscopía por luz reflejada.*
B.- Microscopía electrónica:
De barrido.
De transmisión.
Confocal con barrido láser.

MICROSCOPIAOPTICA
Acosta,PabloUNACHI,2013
Partes del microscopio óptico

MICROSCOPIA
OPTICA
Preparación del objeto de
estudio para microscopía
óptica:
ESTUDIO “IN VIVO”:
a.1.- Examen en fresco:
Preparaciones húmedas.
Gota pendiente.
Gota de nigrosina.
a.2.- Coloración vital.
ESTUDIO “IN VITRO”:
b.1.- Fijación:
b.2.- Inclusión
b.3.- Corte
b.4.- Tinción
b.5.- Montaje
b.6.- Etiquetado Corte, tinción y montaje de preparaciones

MICROSCOPIA
OPTICA
CORTES CON EL MICROTOMO DE
MANO:
Material de caras planas:
1.- Se toma un trozo de un par de cm. de
longitud, de barra de cortes.
2.- La barra de cortes se parte longitudinalmente
con la punta del escarpelo en dos mitades.
3.- La pinza interna de presión del microtomo
debe estar en la posición más baja. La
pinza sube o baja mediante giro del mando
inferior.
4.- Aprisionar entre las dos mitades de la barra
de cortes, el material que se desea cortar.
5.- Fijarlo con la pinza de presión del microtomo.
El corte medio de la barra debe quedar
paralelo a las caras de la pinza de sujeción
del microtomo.
Material cilíndrico:
1.- Se procede de forma análoga a como
se describe anteriormente en los
puntos 1 y 2 para el material de
caras planas.
2.- Para evitar la deformación del
material se realizan unas
excavaciones con la punta del
escarpelo, longitudinalmente en el
centro de ambas caras internas.
3.- A continuación se procede como en
el punto 3 y 4.

MICROSCOPIA
OPTICA
OBTENCIÓN DE LOS CORTES:
1.- La barra de cortes que contiene el
material a cortar se coloca al nivel de
la platina del microtomo. Se sube
girando el mando inferior o se
suprime todo lo que sobresale de la
platina si la pinza estuviese en su
posición más baja.
2.- Se da un pequeño giro al mando
elevador de la pinza.
3.- con la navaja apoyada de plano sobre
la platina, se obtiene el primer corte.
El corte debe realizarse deslizando la
navaja sobre la platina oblicuamente
de forma suave y continua.
4.- Se eleva la pinza y se obtiene de igual
manera un segundo corte.
5.- Los cortes se recogen con un
pincel o pinzas depositándose,
mojados en agua en la cubeta.
6.- Debe humedecerse el material en
el que se están realizando los
cortes bien con un pincel o
poniendo una gota de agua en el
filo de la navaja.

Estudio de células animales y vegetales.
Orgánulos celulares vegetales
Montaje de preparaciones:
PREPARACIÓN EN AGUA NO
DEFINITIVA:
1.- Porta en cubeta en plano
inclinado. Se lleva el material
laminar al porta extendiéndolo
en el agua. Escurrir el agua.
Con papel de filtro se embebe
el agua sobrante.
2.- Se coloca el cubre y se presiona
con la aguja haciendo salir el
agua sobrante y el aire, se
limpian las gotas sobrantes
con papel del filtro.

PREPARACIÓN EN GLICERINA, NO DEFINITIVA:
Además de las manipulaciones 1-2-3 y 4 del montaje I, se
realizarán:
5.- El porta se coloca sobre el pocillo de montar preparaciones.
Secar cuidadosamente el agua de ambos lados del porta y
la que quede cercana a la preparación, con una tira de
papel de filtro.
6.- En el centro del corte de la preparación, se depositan un par
de gotas de glicerina.
7.- Se coloca un cubreobjetos limpio apoyando primero un canto
sobre el porta y dejándolo caer.
8.- con la aguja enmangada se sacan las gotas de aire y el
exceso de glicerina.
9.- Con unas tiras de papel de filtro se limpia la preparación de
restos de glicerina o de agua. El porta debe estar limpio
antes de mirar por el microscopio la preparación.

PREPARACIÓN DEFINITIVA EN GLICERINA-
GELATINA:
Además de los pasos 1.2-3-4 y 5 del montaje II se
realizan las siguientes operaciones:
6.- Fundir lentamente a la llama del mechero, usando una
cucharilla como 0,25 cm. cúbicos de gelatina-
glicerinada. La fusión debe ser lenta para evitar
burbujas. Se vierte encima de la preparación
microscópica.
7.- Colocar un cubre sobre apoyando un canto del mismo
sobre el porta dejándolo caer sobre el porta.
8.- Con la aguja enmangada se hace salir el exceso de
gelatina y las burbujas de aire.
9.- La preparación debe reposar horizontalmente para
evitar deslizamientos del cubre hasta que la gelatina
esté endurecida.
Se coloca un cubre
sobre el porta y con la
aguja se expulsa el
exceso de glicerina.

Estudio de células animales y vegetales. Orgánulos celulares
vegetales
PREPARACIÓN DEFINITIVA EN EUPARAL:
Se realizan las cinco primeras manipulaciones del montaje anterior
seguidas de:
6.- Secado de la preparación. Para ello se usan tiras de papel de filtro.
Se pasa tres o cuatro veces el mango de la aguja enmangada,
apretando sobre la cara superior del bloque de papel de filtro,
para planchar las fibras y rugosidades.
7.- las tiras de papel de filtro se sujetan sobre el porta con los dedos de
la mano izquierda. La superficie planchada con el mango de la
aguja es que debe tomar contacto con la preparación.
8.- Secar la preparación, corriendo el dedo pulgar, un par de veces
hacia fuera.
9.- el papel de filtro se levanta de la preparación en sentido inverso a
como fue depositado. Se empieza por levantar el extremo
izquierdo llevándolo hacia el lado derecho del portaobjetos.

Estudio de células animales y vegetales. Orgánulos celulares
vegetales
10.- Se dejan caer unas gotas de alcohol
de 60º sobre la preparación.
11.- El alcohol se deja escurrir sobre el
pocillo, inclinando ligeramente el
portaobjetos.
12.- Secar la preparación del alcohol como
en los puntos 6, 7, 8 y 9 de este
párrafo.
13.- Se vuelve a humedecer la preparación
con unas gotas de alcohol de 70º.
14.- el alcohol sobrante se deja escurrir por
el porta en el pocillo, inclinando el
portaobjetos.
15.- Se vuelve a secar el alcohol como
antes.
16.- A continuación se añade alcohol de
80º y se hace el mismo procedimiento
de antes.
17.- Se repite lo mismo con alcoholes de
graduaciones de 96º y absoluto. Así
se va deshidratando la preparación.
18.- Colocar dos o tres gotas de euparal
en el centro de la preparación..

Estudio de células animales y
vegetales. Orgánulos celulares
vegetales
Colocar dos o tres gotas de euparal en el
centro de la preparación. Colocar un
cubre y con la aguja presionar para
extraer el exceso de euparal y de aire.
Se limpia con papel de filtro por arriba y por
abajo. Se debe conservar en horizontal
hasta endurecerse el euparal.

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