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Subido porNicole Salgado Cortes
Introducción a la Microscopía Electrónica
La microscopía electrónica utiliza electrones para ofrecer un mayor poder de resolución comparado con la microscopía óptica, permitiendo la visualización detallada de estructuras celulares. Existen dos tipos principales: la microscopía electrónica de transmisión (TEM) y la microscopía electrónica de barrido (SEM), cada una con sus propias ventajas y desventajas en cuanto a resolución y tipo de imágenes producidas. La preparación adecuada de las muestras es crucial, ya que afecta directamente la resolución y la calidad de la imagen obtenida.
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- 5. Super Resolu ción RESOLUCIÓN Poder de resoluciónde los microscopios OJO HUMANO MICROSCOPIOS ÓPTICOS MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS
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- 7. Para microscopia electrónica: Electronesa 100 kEV ≈ 0.004 nm Objetivo NA ≈ 0.01 d ≈ 0.1-0.2 nm Para muestras biológicas ≈ 1 nm Para microscopia de fluorescencia: Luz verde ≈ 500 nm Objetivo NA = 1.4 en aceite d ≈ 220 nm ÓPTICA V/S ELECTRÓNICA RESOLUCIÓN Capacidad para distinguir separadamente dos objetos que se encuentran muy juntos. λ 2Ƞ sin α d = ¡El límite de resolución esta dado por la muestra!
- 8. Como la longitudde onda de los electrones es mucho menor a la de los fotones, el microscopio electrónico tiene un mayor poder de resolución. EN CONCLUSIÓN
- 9. ÓPTICA V/S ELECTRÓNICA VENTAJAS •Imaging en células vivas • Marca en múltiples señales (colores) DESVENTAJAS • Resolución limitada por la difracción de la luz • Mala resolución en el eje Z (>600nm) • Bajo reconocimiento de estructuras y compartimentos, requiere marcaje. • Imágenes de la superficie son limitadas. VENTAJAS • Alta resolución solo limitada por la muestra • Reconocimiento de estructuras sin necesidad de marca DESVENTAJAS • Solo muestras fijadas • Limitado a muestras ultradelgadas (TEM) o superficie (SEM) • Baja sensibilidad a marca, alto background. • Requiere tiempo y personal altamente calificado.
- 10. PRINCIPIOS DE MICROSCOPÍA ELECTRONICA 1.Fuentede electrones 2.Aceleración 3.Enfoque 4.Muestra 5.Detección 6.Columna al vacío
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- 12. ACELERACIÓN Un aumento enel voltaje de aceleración resultará en una mayor penetración y mayor volumen de interacción. Efectos de la aceleración de electrones en la imagen final ¿Qué efecto tendrá esto en la imagen final?
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- 16. Fuente de electrones Aceleración Dirección MUESTRA Enfoque Detección DETRANSMISIÓN TEM | TRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPE
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- 18. DE BARRIDO SEM |SCANNING ELECTRON MICROSCOPE Fuente de electrones Aceleración Dirección MUESTRA Enfoque Detección
- 19. DETECCIÓN EN SEM Electronessecundarios Back-scatter Rayos X Mapeo de la muestra Características químicas Topografía de la superficie
- 20. TEM V/S SEM •Produce imágenes de la ultraestructura de células y sus componentes. • El rayo de electrones pasa a través de la muestra. • Detecta los electrones primarios transmitidos por la muestra. • Alta resolución (~1nm). • Contraste del espécimen por absorción de electrones. • Produce imágenes en 2 dimensiones. • Produce imágenes de superficies de células y pequeños organismos. • El rayo de electrones escanea sobre la superficie de la muestra • Detecta los electrones dispersados por la superficie de la muestra, emitidos por la excitación del rayo de electrones. • Baja resolución (~10nm) • Contraste del espécimen por dispersión de electrones secundarios. • Produce imágenes en 3 dimensiones Grano de polen en TEM y SEM
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