FICHA DE IDENTIFICACIÓN DE TRABAJO DE INVESTIGACIÓN
Título PRUEBA DE ELISA
Autor/es
Nombres y Apellidos Código de estudiantes
Fecha 05/10/2022
Carrera Medicina
Asignatura
Grupo
Docente Dr.
Periodo Académico °
Subsede Santa Cruz de la Sierra-BO
Copyright © (2022) por ( ). Todos los derechos reservados.
Título: Prueba de ELISA
Autor/es:
Asignatura: Dermatologia
Carrera: Medicina
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RESUMEN:
ABSTRACT:
Título: Prueba de ELISA
Autor/es:
Asignatura: Dermatologia
Carrera: Medicina
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Tabla De Contenidos
Introducción ............................................................................................................................... 4
Capítulo 1. Planteamiento del Problema.................................................................................... 6
1.1. Formulación del Problema........................................................................................ 6
1.2. Objetivos................................................................................................................... 6
1.3. Justificación .............................................................................................................. 6
1.4. Planteamiento de hipótesis.....................................7Error! Bookmark not defined.
Capítulo 2. Marco Teórico ......................................................................................................... 8
2.1 Área de estudio/campo de investigación .....................Error! Bookmark not defined.
2.2 Desarrollo del marco teórico ........................................................................................ 8
Capítulo 3. Método................................................................................................................... 17
3.1 Tipo de Investigación ................................................................................................. 17
3.2 Operacionalización de variables................................................................................. 17
3.3 Técnicas de Investigación............................................................................................. 9
3.4 Cronograma de actividades por realizar ..................................................................... 17
Capítulo 4. Resultados y Discusión ......................................................................................... 17
Capítulo 5. Conclusiones ......................................................................................................... 18
Referencias............................................................................................................................... 22
Apéndice .................................................................................................................................. 24
Título: Prueba de ELISA
Autor/es:
Asignatura: Dermatologia
Carrera: Medicina
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Introducción
Durante una infección, un individuo presenta una respuesta de anticuerpos que
eventualmente resulta en la producción de moléculas de IgG en el plasma que se unen a diversas
partes del agente infeccioso. Si estos anticuerpos están presentes en la muestra, se unirán a los
antígenos adsorbidos en los pocillos de una microplaca y permanecerán allí después del lavado, y
serán detectados por la técnica de ELISA.
Todos los anticuerpos pertenecen a un grupo de proteínas séricas conocidas como
globulinas. Cada anticuerpo se compone de una cadena de polipéptido pesada y ligera. En
general, los anticuerpos se producen en respuesta a la presencia de una respuesta antigénica. Los
anticuerpos obtenidos a partir de animales, tales como conejos, en respuesta a un antígeno se
conocen como anticuerpos policlonales.
Los anticuerpos policlonales son heterogéneos en estructura y varían en su capacidad para
unirse a antígenos. Los anticuerpos que tienen una alta afinidad por los antígenos no específicos
pueden dar reacciones cruzadas no deseadas. Tales anticuerpos también pueden dar resultados
falsos negativos. Por el contrario, los anticuerpos con constantes de unión débiles pueden no ser
tan sensibles.
Los test de ELISA (acrónimo del inglés Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay: ‘ensayo
por inmunoadsorción ligado a enzimas’) fueron desarrollados originalmente para la medición de
anticuerpos, pero también se han adaptado para detectar con éxito muestras que contienen
antígenos. Este experimento de ELISA ha sido diseñado para detectar un anticuerpo dirigido
contra un antígeno.
Una solución que contiene el anticuerpo secundario se añade a continuación a los
pocillos. Si el anticuerpo primario se ha mantenido unido bien, entonces el anticuerpo secundario
se unirá a él y permanecerán unidos después del lavado. Los anticuerpos secundarios se purifican
y se unen de de forma covalente a las enzimas tales como peroxidasa. Este acoplamiento no
afecta significativamente a la especificidad de unión y afinidad del anticuerpo o la actividad
enzimática de la peroxidasa.
En un ELISA competitivo se une al fondo del pocillo de la microplaca un antígeno de
referencia. Se añade a los pocillos la muestra más el anticuerpo y si existe un antígeno presente
Título: Prueba de ELISA
Autor/es:
Asignatura: Dermatologia
Carrera: Medicina
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en la muestra, compite con el antígeno de referencia por la unión al anticuerpo. El material no
unido se elimina con los lavados. Cuanto más antígeno hay en la muestra, menos anticuerpo
termina unido al fondo de los pocillos a través del antígeno de referencia y, por tanto, menos
señal.
En un ELISA competitivo se une al fondo del pocillo de la microplaca un antígeno de
referencia. Se añade a los pocillos la muestra más el anticuerpo y si existe un antígeno presente
en la muestra, compite con el antígeno de referencia por la unión al anticuerpo. El material no
unido se elimina con los lavados. Cuanto más antígeno hay en la muestra, menos anticuerpo
termina unido al fondo de los pocillos a través del antígeno de referencia y, por tanto, menos
señal.
Un inmunoensayo es una prueba que mide el reconocimiento específico entre un
anticuerpo y un antígeno. A este reconocimiento químico se lo conoce como inmunocomplejo
(IC) y es tan selectivo y estrecho como una llave con su cerradura.
Se han establecido muchos formatos de ensayos ELISA cualitativos y cuantitativos; los
primeros sólo indican la presencia o ausencia del IC y los otros detectan cuánto hay de ellos.
Básicamente el método consiste en que uno de los componentes inmunológicos (ya sea al
antígeno o el anticuerpo) se inmoviliza en una fase sólida, en pocillos de una placa de
microtitulación de poliestireno o placa de ELISA.
La interacción anticuerpo-antígeno se puede visualizar mediante enzimas, unidas a
antígenos o anticuerpos secundarios. La enzima unida, que generalmente es peroxidasa de rábano
picante o fosfatasa alcalina, genera un cambio de color en el sustrato agregado que puede
medirse mediante un espectrofotómetro llamado lector de placa. Generalmente los ELISA se
llevan a cabo en placas de 96 pocillos, lo que permite medir múltiples muestras en un único
experimento y así ahorrar tiempo.
Título: Prueba de ELISA
Autor/es:
Asignatura: Dermatologia
Carrera: Medicina
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Capítulo 1. Planteamiento del Problema
1.1. Formulación del Problema
Los antígenos son añadidos a los pocillos donde algunos permanecen adsorbidos a los pocillos
por enlaces hidrófobos después de los lavados. Los antígenos pueden ser lisados, una proteína
específica o una mezcla de ambos. No hay especificidad involucrado con el proceso de adsorción
a los pocillos, aunque algunas sustancias pueden exhibir una unión diferencial
1.2. Objetivos
OBJETIVO GENERAL
 Identificar el experimento de aportar a los estudiantes el conocimiento y metodología
de la técnica del ELISA
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Identificar la ELISA directo e indirecto,
 Describir la importancia de la prueba de ELISA
 Determinar la presencia de anticuerpos contra el virus de Inmunodeficiencia
 Identificar como se utiliza la ELISA
 Describir las enfermedades que la prueba de ELISA puede diagnosticar
1.3. Justificación
Es un método utilizado para detectar cuantitativamente un antígeno en una muestra. Un antígeno
es una toxina o cualquier otra sustancia extraña, por ejemplo, el virus de la gripe o un
contaminante ambiental, que provoca que el sistema inmunitario de los vertebrados inicie una
respuesta defensiva. La diversidad de antígenos potenciales es enorme, por lo que los ELISA se
utilizan en muchas áreas de investigación y pruebas para detectar y cuantificar antígenos en una
amplia variedad de tipos de muestra. Con los ELISA se pueden analizar sustancias específicas de
interés en lisados celulares, muestras de sangre, alimentos y más. Existen cuatro tipos principales
Título: Prueba de ELISA
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Carrera: Medicina
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de ELISA: directo, indirecto, competitivo y tipo sándwich. Cada tipo se describe a continuación
con un diagrama que ilustra cómo se unen y se utilizan los analitos y los anticuerpos.
Título: Prueba de ELISA
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Asignatura: Dermatologia
Carrera: Medicina
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Capítulo 2. Marco Teórico
2.1 Desarrollo del marco teórico
DEFINICION
Título: Prueba de ELISA
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Asignatura: Dermatologia
Carrera: Medicina
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Capítulo 3. Método
3.1 Tipo de Investigación
El presente trabajo es una investigación prueba de ELISA, con un diseño de investigación de
tipo documental.
3.2 Operacionalización de variables
Se realizó una investigación documental, en base a los libros de inmunología e infectologia
referidos por el docente
.
3.3 Técnicas de Investigación
Se realizó la reunión de información de acuerdo al temario, Inclusión laboral de Personas con
Discapacidad en el Órgano Ejecutivo, desde la bibliografías médicas y de páginas virtuales
existentes.
3.4 Cronograma de actividades por realizar
La presente bibliografía fue desarrollada a lo largo de un mes, siendo así, abajo se encuentra en
detalle el esquemático del desarrollo:
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Capítulo 4. Resultados y Discusión
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Capítulo 5. Conclusiones
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Referencias
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Carrera: Medicina
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ANEXOS:

Monografia de ELISA.doc

  • 1.
    FICHA DE IDENTIFICACIÓNDE TRABAJO DE INVESTIGACIÓN Título PRUEBA DE ELISA Autor/es Nombres y Apellidos Código de estudiantes Fecha 05/10/2022 Carrera Medicina Asignatura Grupo Docente Dr. Periodo Académico ° Subsede Santa Cruz de la Sierra-BO Copyright © (2022) por ( ). Todos los derechos reservados.
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    Título: Prueba deELISA Autor/es: Asignatura: Dermatologia Carrera: Medicina Página 2 de 13 RESUMEN: ABSTRACT:
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    Título: Prueba deELISA Autor/es: Asignatura: Dermatologia Carrera: Medicina Página 3 de 13 Tabla De Contenidos Introducción ............................................................................................................................... 4 Capítulo 1. Planteamiento del Problema.................................................................................... 6 1.1. Formulación del Problema........................................................................................ 6 1.2. Objetivos................................................................................................................... 6 1.3. Justificación .............................................................................................................. 6 1.4. Planteamiento de hipótesis.....................................7Error! Bookmark not defined. Capítulo 2. Marco Teórico ......................................................................................................... 8 2.1 Área de estudio/campo de investigación .....................Error! Bookmark not defined. 2.2 Desarrollo del marco teórico ........................................................................................ 8 Capítulo 3. Método................................................................................................................... 17 3.1 Tipo de Investigación ................................................................................................. 17 3.2 Operacionalización de variables................................................................................. 17 3.3 Técnicas de Investigación............................................................................................. 9 3.4 Cronograma de actividades por realizar ..................................................................... 17 Capítulo 4. Resultados y Discusión ......................................................................................... 17 Capítulo 5. Conclusiones ......................................................................................................... 18 Referencias............................................................................................................................... 22 Apéndice .................................................................................................................................. 24
  • 4.
    Título: Prueba deELISA Autor/es: Asignatura: Dermatologia Carrera: Medicina Página 4 de 13 Introducción Durante una infección, un individuo presenta una respuesta de anticuerpos que eventualmente resulta en la producción de moléculas de IgG en el plasma que se unen a diversas partes del agente infeccioso. Si estos anticuerpos están presentes en la muestra, se unirán a los antígenos adsorbidos en los pocillos de una microplaca y permanecerán allí después del lavado, y serán detectados por la técnica de ELISA. Todos los anticuerpos pertenecen a un grupo de proteínas séricas conocidas como globulinas. Cada anticuerpo se compone de una cadena de polipéptido pesada y ligera. En general, los anticuerpos se producen en respuesta a la presencia de una respuesta antigénica. Los anticuerpos obtenidos a partir de animales, tales como conejos, en respuesta a un antígeno se conocen como anticuerpos policlonales. Los anticuerpos policlonales son heterogéneos en estructura y varían en su capacidad para unirse a antígenos. Los anticuerpos que tienen una alta afinidad por los antígenos no específicos pueden dar reacciones cruzadas no deseadas. Tales anticuerpos también pueden dar resultados falsos negativos. Por el contrario, los anticuerpos con constantes de unión débiles pueden no ser tan sensibles. Los test de ELISA (acrónimo del inglés Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay: ‘ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas’) fueron desarrollados originalmente para la medición de anticuerpos, pero también se han adaptado para detectar con éxito muestras que contienen antígenos. Este experimento de ELISA ha sido diseñado para detectar un anticuerpo dirigido contra un antígeno. Una solución que contiene el anticuerpo secundario se añade a continuación a los pocillos. Si el anticuerpo primario se ha mantenido unido bien, entonces el anticuerpo secundario se unirá a él y permanecerán unidos después del lavado. Los anticuerpos secundarios se purifican y se unen de de forma covalente a las enzimas tales como peroxidasa. Este acoplamiento no afecta significativamente a la especificidad de unión y afinidad del anticuerpo o la actividad enzimática de la peroxidasa. En un ELISA competitivo se une al fondo del pocillo de la microplaca un antígeno de referencia. Se añade a los pocillos la muestra más el anticuerpo y si existe un antígeno presente
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    Título: Prueba deELISA Autor/es: Asignatura: Dermatologia Carrera: Medicina Página 5 de 13 en la muestra, compite con el antígeno de referencia por la unión al anticuerpo. El material no unido se elimina con los lavados. Cuanto más antígeno hay en la muestra, menos anticuerpo termina unido al fondo de los pocillos a través del antígeno de referencia y, por tanto, menos señal. En un ELISA competitivo se une al fondo del pocillo de la microplaca un antígeno de referencia. Se añade a los pocillos la muestra más el anticuerpo y si existe un antígeno presente en la muestra, compite con el antígeno de referencia por la unión al anticuerpo. El material no unido se elimina con los lavados. Cuanto más antígeno hay en la muestra, menos anticuerpo termina unido al fondo de los pocillos a través del antígeno de referencia y, por tanto, menos señal. Un inmunoensayo es una prueba que mide el reconocimiento específico entre un anticuerpo y un antígeno. A este reconocimiento químico se lo conoce como inmunocomplejo (IC) y es tan selectivo y estrecho como una llave con su cerradura. Se han establecido muchos formatos de ensayos ELISA cualitativos y cuantitativos; los primeros sólo indican la presencia o ausencia del IC y los otros detectan cuánto hay de ellos. Básicamente el método consiste en que uno de los componentes inmunológicos (ya sea al antígeno o el anticuerpo) se inmoviliza en una fase sólida, en pocillos de una placa de microtitulación de poliestireno o placa de ELISA. La interacción anticuerpo-antígeno se puede visualizar mediante enzimas, unidas a antígenos o anticuerpos secundarios. La enzima unida, que generalmente es peroxidasa de rábano picante o fosfatasa alcalina, genera un cambio de color en el sustrato agregado que puede medirse mediante un espectrofotómetro llamado lector de placa. Generalmente los ELISA se llevan a cabo en placas de 96 pocillos, lo que permite medir múltiples muestras en un único experimento y así ahorrar tiempo.
  • 6.
    Título: Prueba deELISA Autor/es: Asignatura: Dermatologia Carrera: Medicina Página 6 de 13 Capítulo 1. Planteamiento del Problema 1.1. Formulación del Problema Los antígenos son añadidos a los pocillos donde algunos permanecen adsorbidos a los pocillos por enlaces hidrófobos después de los lavados. Los antígenos pueden ser lisados, una proteína específica o una mezcla de ambos. No hay especificidad involucrado con el proceso de adsorción a los pocillos, aunque algunas sustancias pueden exhibir una unión diferencial 1.2. Objetivos OBJETIVO GENERAL  Identificar el experimento de aportar a los estudiantes el conocimiento y metodología de la técnica del ELISA OBJETIVOS ESPECÍFICOS  Identificar la ELISA directo e indirecto,  Describir la importancia de la prueba de ELISA  Determinar la presencia de anticuerpos contra el virus de Inmunodeficiencia  Identificar como se utiliza la ELISA  Describir las enfermedades que la prueba de ELISA puede diagnosticar 1.3. Justificación Es un método utilizado para detectar cuantitativamente un antígeno en una muestra. Un antígeno es una toxina o cualquier otra sustancia extraña, por ejemplo, el virus de la gripe o un contaminante ambiental, que provoca que el sistema inmunitario de los vertebrados inicie una respuesta defensiva. La diversidad de antígenos potenciales es enorme, por lo que los ELISA se utilizan en muchas áreas de investigación y pruebas para detectar y cuantificar antígenos en una amplia variedad de tipos de muestra. Con los ELISA se pueden analizar sustancias específicas de interés en lisados celulares, muestras de sangre, alimentos y más. Existen cuatro tipos principales
  • 7.
    Título: Prueba deELISA Autor/es: Asignatura: Dermatologia Carrera: Medicina Página 7 de 13 de ELISA: directo, indirecto, competitivo y tipo sándwich. Cada tipo se describe a continuación con un diagrama que ilustra cómo se unen y se utilizan los analitos y los anticuerpos.
  • 8.
    Título: Prueba deELISA Autor/es: Asignatura: Dermatologia Carrera: Medicina Página 8 de 13 Capítulo 2. Marco Teórico 2.1 Desarrollo del marco teórico DEFINICION
  • 9.
    Título: Prueba deELISA Autor/es: Asignatura: Dermatologia Carrera: Medicina Página 9 de 13 Capítulo 3. Método 3.1 Tipo de Investigación El presente trabajo es una investigación prueba de ELISA, con un diseño de investigación de tipo documental. 3.2 Operacionalización de variables Se realizó una investigación documental, en base a los libros de inmunología e infectologia referidos por el docente . 3.3 Técnicas de Investigación Se realizó la reunión de información de acuerdo al temario, Inclusión laboral de Personas con Discapacidad en el Órgano Ejecutivo, desde la bibliografías médicas y de páginas virtuales existentes. 3.4 Cronograma de actividades por realizar La presente bibliografía fue desarrollada a lo largo de un mes, siendo así, abajo se encuentra en detalle el esquemático del desarrollo:
  • 10.
    Título: Prueba deELISA Autor/es: Asignatura: Dermatologia Carrera: Medicina Página 10 de 13 Capítulo 4. Resultados y Discusión
  • 11.
    Título: Prueba deELISA Autor/es: Asignatura: Dermatologia Carrera: Medicina Página 11 de 13 Capítulo 5. Conclusiones
  • 12.
    Título: Prueba deELISA Autor/es: Asignatura: Dermatologia Carrera: Medicina Página 12 de 13 Referencias
  • 13.
    Título: Prueba deELISA Autor/es: Asignatura: Dermatologia Carrera: Medicina Página 13 de 13 ANEXOS: