El documento describe los fundamentos y tipos de ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISAs). Los ELISAs utilizan antígenos o anticuerpos marcados con una enzima para detectar la presencia de antígenos o anticuerpos mediante la adición de un sustrato que produce un color detectable. Existen varios tipos de ELISAs como sándwich, indirecto y competitivo que difieren en los pasos de adición de antígenos, anticuerpos y conjugados enzimáticos.
El documento describe la prueba de ELISA (Ensayo Inmunoadsorbente Ligado a Enzimas). ELISA utiliza anticuerpos o antígenos marcados con enzimas para detectar la presencia de analitos como proteínas, hormonas o microorganismos. El procedimiento involucra fijar el antígeno o anticuerpo objetivo a una placa, luego agregar la muestra, anticuerpos o antígenos conjugados con enzimas, y finalmente un sustrato que produzca un cambio de color detectable. ELISA se usa ampliamente en medic
El documento describe las pruebas de aglutinación, que permiten detectar la presencia de anticuerpos en la sangre mediante la aglutinación de antígenos y anticuerpos. Estas pruebas se utilizan para diagnosticar infecciones pasadas o presentes, investigar problemas del sistema inmunológico y determinar la compatibilidad sanguínea. Existen pruebas directas e indirectas que involucran la unión de partículas a antígenos o anticuerpos.
El documento explica la prueba ELISA (Ensayo Inmunoadsorbente Ligado a Enzimas). ELISA utiliza anticuerpos o antígenos marcados con enzimas para detectar la presencia de analitos como anticuerpos o antígenos. Existen dos tipos principales de ELISA: directo e indirecto. En ELISA directo, los antígenos se fijan al soporte y se detectan con anticuerpos marcados. En ELISA indirecto, son los anticuerpos los que se fijan y se detectan con antígenos marcados. ELISA permite
El ELISA es una técnica de inmunodetección que utiliza un antígeno o anticuerpo marcado con una enzima. Existen varios tipos de ELISA como el directo, indirecto y sándwich, los cuales difieren en si se marca el antígeno o anticuerpo con la enzima. Los pasos generales incluyen fijar el antígeno o anticuerpo al soporte, agregar la muestra, unir el antígeno o anticuerpo específico, lavar para eliminar lo no unido, agregar el anticuerpo o antígeno marcado con
Este documento proporciona un resumen de la historia y desarrollo del ensayo inmunoenzimático vinculado a la adsorción (ELISA). El ELISA se desarrolló en la década de 1970 como una alternativa más segura al radioinmunoensayo. Desde entonces, el ELISA se ha convertido en una prueba de diagnóstico muy utilizada debido a su alta sensibilidad, especificidad, facilidad de uso y bajo costo. El ELISA se utiliza ampliamente en el diagnóstico médico y la detección de
ELISA es una técnica de inmunoensayo que utiliza anticuerpos o antígenos inmovilizados y enzimas unidas para detectar sustancias como anticuerpos o antígenos. Proporciona resultados cuantitativos rápidos y objetivos sobre el estado inmune o diagnóstico de una enfermedad. Existen varios tipos de ELISA que se utilizan comúnmente para detectar una variedad de patógenos y condiciones médicas.
La inmunofluorescencia consiste en conjugar colorantes fluorescentes con anticuerpos para exponerlos a antígenos en muestras biológicas. Cuando la reacción es positiva y se expone a luz ultravioleta, se produce fluorescencia observable bajo microscopio. Existen dos métodos: inmunofluorescencia directa usa un anticuerpo primario marcado, mientras que la indirecta usa un anticuerpo secundario marcado para aumentar la señal fluorescente.
El documento describe varias técnicas inmunológicas, incluyendo aglutinación, precipitación, reacción de fijación de complemento, y sus fundamentos y usos. Estas técnicas se utilizan para la detección, identificación, tipificación y cuantificación de microorganismos, antígenos y anticuerpos mediante la reacción específica entre antígenos y anticuerpos. Algunas técnicas como la aglutinación y precipitación son cualitativas y/o cuantitativas, mientras que la
El documento describe la prueba de ELISA (Ensayo Inmunoadsorbente Ligado a Enzimas). ELISA utiliza anticuerpos o antígenos marcados con enzimas para detectar la presencia de analitos como proteínas, hormonas o microorganismos. El procedimiento involucra fijar el antígeno o anticuerpo objetivo a una placa, luego agregar la muestra, anticuerpos o antígenos conjugados con enzimas, y finalmente un sustrato que produzca un cambio de color detectable. ELISA se usa ampliamente en medic
El documento describe las pruebas de aglutinación, que permiten detectar la presencia de anticuerpos en la sangre mediante la aglutinación de antígenos y anticuerpos. Estas pruebas se utilizan para diagnosticar infecciones pasadas o presentes, investigar problemas del sistema inmunológico y determinar la compatibilidad sanguínea. Existen pruebas directas e indirectas que involucran la unión de partículas a antígenos o anticuerpos.
El documento explica la prueba ELISA (Ensayo Inmunoadsorbente Ligado a Enzimas). ELISA utiliza anticuerpos o antígenos marcados con enzimas para detectar la presencia de analitos como anticuerpos o antígenos. Existen dos tipos principales de ELISA: directo e indirecto. En ELISA directo, los antígenos se fijan al soporte y se detectan con anticuerpos marcados. En ELISA indirecto, son los anticuerpos los que se fijan y se detectan con antígenos marcados. ELISA permite
El ELISA es una técnica de inmunodetección que utiliza un antígeno o anticuerpo marcado con una enzima. Existen varios tipos de ELISA como el directo, indirecto y sándwich, los cuales difieren en si se marca el antígeno o anticuerpo con la enzima. Los pasos generales incluyen fijar el antígeno o anticuerpo al soporte, agregar la muestra, unir el antígeno o anticuerpo específico, lavar para eliminar lo no unido, agregar el anticuerpo o antígeno marcado con
Este documento proporciona un resumen de la historia y desarrollo del ensayo inmunoenzimático vinculado a la adsorción (ELISA). El ELISA se desarrolló en la década de 1970 como una alternativa más segura al radioinmunoensayo. Desde entonces, el ELISA se ha convertido en una prueba de diagnóstico muy utilizada debido a su alta sensibilidad, especificidad, facilidad de uso y bajo costo. El ELISA se utiliza ampliamente en el diagnóstico médico y la detección de
ELISA es una técnica de inmunoensayo que utiliza anticuerpos o antígenos inmovilizados y enzimas unidas para detectar sustancias como anticuerpos o antígenos. Proporciona resultados cuantitativos rápidos y objetivos sobre el estado inmune o diagnóstico de una enfermedad. Existen varios tipos de ELISA que se utilizan comúnmente para detectar una variedad de patógenos y condiciones médicas.
La inmunofluorescencia consiste en conjugar colorantes fluorescentes con anticuerpos para exponerlos a antígenos en muestras biológicas. Cuando la reacción es positiva y se expone a luz ultravioleta, se produce fluorescencia observable bajo microscopio. Existen dos métodos: inmunofluorescencia directa usa un anticuerpo primario marcado, mientras que la indirecta usa un anticuerpo secundario marcado para aumentar la señal fluorescente.
El documento describe varias técnicas inmunológicas, incluyendo aglutinación, precipitación, reacción de fijación de complemento, y sus fundamentos y usos. Estas técnicas se utilizan para la detección, identificación, tipificación y cuantificación de microorganismos, antígenos y anticuerpos mediante la reacción específica entre antígenos y anticuerpos. Algunas técnicas como la aglutinación y precipitación son cualitativas y/o cuantitativas, mientras que la
Este documento describe las reacciones antígeno-anticuerpo y los componentes del sistema inmune adaptativo. Explica que los antígenos son moléculas que inducen una respuesta inmune específica, mientras que los anticuerpos son proteínas producidas en respuesta a antígenos. También describe los tipos de anticuerpos, como IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, y sus funciones. Además, explica las diferentes pruebas para detectar anticuerpos, como aglutinación, precipitación, neutralización y opsoniz
Este documento describe Streptococcus agalactiae y estreptococos ambientales como causantes de mastitis bovina. S. agalactiae se transmite principalmente durante el ordeño y causa mastitis clínica e subclínica, mientras que los estreptococos ambientales como S. uberis y S. dysgalactiae se transmiten a través del medio ambiente de la vaca y causan principalmente mastitis subclínica. El documento también resume factores de virulencia, signos clínicos, diagnóstico, tratamiento y medidas de prevención y control para
Este documento describe los principales componentes y funciones del sistema inmunológico, incluyendo células, antígenos, anticuerpos e inmunoglobulinas. Explica que el sistema inmunológico protege al cuerpo destruyendo microorganismos invasores mediante la interacción entre antígenos y anticuerpos. También resume varias técnicas inmunológicas comunes como aglutinación, inmunofluorescencia, radioinmunoensayo, ELISA y western blot que detectan y cuantifican antígenos a trav
Diagnostico de laboratorio de neisseria gonorrhoeae y Treponema pallidumIPN
Las enfermedades de transmisión sexual como la gonorrea y la sífilis se diagnostican mediante muestras como pus, secreciones y exudados que se analizan con tinción de Gram, cultivo en medios selectivos, PCR o microscopía de campo oscuro para identificar a Neisseria gonorrhoeae o Treponema pallidum. También se realizan pruebas serológicas no treponémicas y treponémicas para detectar anticuerpos.
Este documento proporciona instrucciones detalladas sobre cómo preparar y examinar un extendido de sangre periférica. Describe los pasos para obtener la muestra de sangre, preparar el extendido manualmente o de forma automatizada, teñirlo y examinarlo bajo el microscopio para realizar un recuento diferencial de leucocitos y plaquetas. El objetivo es producir un extendido de sangre de buena calidad para permitir un análisis hematológico preciso.
Este documento describe la técnica de Enzima Inmunoanálisis (EIA), también conocida como ELISA. Explica que EIA usa una molécula marcada con enzima para detectar de manera cuantitativa un antígeno o anticuerpo. Se clasifican los EIAs en competitivos o no competitivos (sandwich o indirecto). También cubre cálculo de cut-off, aplicaciones clínicas como diagnóstico de infecciones y monitoreo de hormonas, y posibles causas de resultados falsos positivos o negativos.
Este documento describe la proteína C reactiva, una proteína que se eleva en la sangre durante procesos inflamatorios como infecciones neumónicas, infecciones estreptocópicas y enfermedades autoinmunes. Explica cómo medir los niveles de proteína C reactiva mediante una prueba de aglutinación con látex que puede dar resultados positivos o negativos.
Prueba de ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)Luis Perez
El documento describe el método ELISA (ensayo inmunoenzimático) como una alternativa al ensayo de seroneutralización in vivo para evaluar la potencia de vacunas antitetánicas. Se desarrolló un ELISA indirecto para cuantificar antitoxina tetánica en sueros de curiel utilizando un estándar calibrado de 29 UI/mL. El ensayo demostró ser preciso y exacto, y mostró una buena correlación con los resultados del ensayo biológico. Los niveles de seroprotección alcanzados contra 15 lot
Este documento compara dos pruebas para la detección de sífilis, la VRDL y la RPR. La VRDL solo se puede usar con suero y usa un antígeno no particulado que produce floculación si hay anticuerpos presentes, mientras que la RPR se puede usar con suero o plasma y usa un antígeno con partículas de carbón. Ambas pruebas pueden dar falsos negativos temprano o si no se realizan correctamente, y falsos positivos que persisten menos de seis meses. Las pruebas reagínicas son
Examen Parasitológico de deposiciones (EPSD) - Metodo de Burrows modificado Citrin Longin
Este documento describe el procedimiento del examen parasitológico seriado de deposiciones (EPSD). El EPSD es un método de diagnóstico común en laboratorios clínicos chilenos para detectar parásitos gastrointestinales. El documento detalla los métodos de recolección y procesamiento de muestras, incluido el uso de soluciones fijadoras, y recomienda el método de Burrows Modificado para concentración y observación microscópica de las muestras.
Este documento describe los estafilococos, incluyendo su taxonomía, especies comunes, factores de virulencia y síndromes clínicos. Se mencionan 14 especies de estafilococos, siendo S. aureus el patógeno más importante. S. aureus puede causar infecciones cutáneas, intoxicación alimentaria, síndrome de shock tóxico y neumonía. Los estafilococos coagulasa-negativos a menudo causan infecciones asociadas a dispositivos médicos.
Este documento presenta los procedimientos para determinar los niveles de triglicéridos y lipoproteínas de alta densidad (HDL) en suero a través de métodos colorimétricos enzimáticos. Incluye la introducción, objetivo, procedimiento, interpretación, cálculos y formatos para reportar los resultados para cada prueba. El procedimiento describe los pasos para extraer la muestra de suero, mezclarla con reactivos, medir la absorbancia, e interpretar y calcular los niveles de lípidos basados en las lecturas
1) El documento describe varias pruebas de inmunología clínica, incluyendo la aglutinación en látex para la detección de proteína C reactiva, antiestreptolisina O y factor reumatoide.
2) La aglutinación en látex es un método cualitativo y semicuantitativo rápido que usa partículas de látex recubiertas con antígenos o anticuerpos.
3) La proteína C reactiva se eleva en respuesta a infecciones o inflamaciones y puede usarse para monitorear
El test de CAMP se utiliza para identificar la producción del factor CAMP por estreptococos del grupo B. El factor CAMP interactúa con la ß-hemolisina producida por Staphylococcus aureus causando una hemólisis en forma de flecha que indica la presencia del factor. El procedimiento implica sembrar cepas de S. aureus y estreptococos de forma perpendicular en una placa con sangre ovina e incubar para observar la hemólisis en forma de flecha.
La inmunofluorescencia es una técnica que utiliza anticuerpos unidos a sustancias fluorescentes para detectar moléculas específicas y se aplica en diagnósticos médicos e investigación. Existen dos tipos: inmunofluorescencia directa que detecta antígenos en un paso, e inmunofluorescencia indirecta que detecta anticuerpos circulantes en dos etapas. Presenta ventajas como resultados rápidos y detección de microorganismos específicos, pero también limitaciones como la necesidad de personal especializado y costos elevados.
Las deficiencias en la fagocitosis pueden clasificarse en defectos en la producción de neutrófilos, en la adhesión leucocitaria, en la vía enzimática oxidativa, y deficiencia específica de gránulos. Esto incluye trastornos como la neutropenia cíclica, el síndrome de Kostman, el síndrome de Schwaman-Diamond, la neutropenia autoinmune, los defectos de adhesión leucocitaria tipo 1 y 2, la enfermedad granulomatosa crónica, la deficiencia de la
El ELISA es un ensayo inmunológico que detecta la presencia de antígenos o anticuerpos en una muestra mediante el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima. El ELISA se puede utilizar para detectar una variedad de sustancias como hormonas, proteínas, virus y bacterias, y proporciona información útil para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades.
El documento describe el proceso inmunitario. Explica que el sistema inmunitario está compuesto de órganos, células y moléculas que defienden al organismo de sustancias extrañas. Describe las respuestas inmunitarias específicas y no específicas, y los tipos de inmunidad. También explica los diferentes tipos de glóbulos blancos y sus funciones en la defensa del organismo.
El documento describe tres pruebas de laboratorio: PCR, ASO y FR. La prueba de PCR mide la proteína C reactiva y se usa para detectar enfermedades infecciosas y condiciones inflamatorias. La prueba ASO mide los anticuerpos antiestreptocócicos y se usa para diagnosticar infecciones por estreptococos. La prueba FR mide los factores reumatoides y se usa para diagnosticar artritis reumatoide y otras condiciones autoinmunes. Todas las pruebas usan partícul
El documento presenta una técnica de proteómica llamada Western blotting. Se describe el proceso que involucra la separación de proteínas por electroforesis en geles, su transferencia a una membrana y detección usando anticuerpos específicos. Puede realizarse de forma directa o indirecta dependiendo del anticuerpo marcado utilizado en la detección de la proteína de interés.
Este documento describe diferentes técnicas de ELISA. Detalla los tipos de fases sólidas, enzimas y clases de ELISA. Explica las ventajas y desventajas de la beta-galactosidasa, la fosfatasa alcalina y la peroxidasa como enzimas para ELISA. También resume brevemente las generaciones de ELISA y sus aplicaciones en patología animal, vegetal y otras áreas.
Este documento describe las reacciones antígeno-anticuerpo y los componentes del sistema inmune adaptativo. Explica que los antígenos son moléculas que inducen una respuesta inmune específica, mientras que los anticuerpos son proteínas producidas en respuesta a antígenos. También describe los tipos de anticuerpos, como IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, y sus funciones. Además, explica las diferentes pruebas para detectar anticuerpos, como aglutinación, precipitación, neutralización y opsoniz
Este documento describe Streptococcus agalactiae y estreptococos ambientales como causantes de mastitis bovina. S. agalactiae se transmite principalmente durante el ordeño y causa mastitis clínica e subclínica, mientras que los estreptococos ambientales como S. uberis y S. dysgalactiae se transmiten a través del medio ambiente de la vaca y causan principalmente mastitis subclínica. El documento también resume factores de virulencia, signos clínicos, diagnóstico, tratamiento y medidas de prevención y control para
Este documento describe los principales componentes y funciones del sistema inmunológico, incluyendo células, antígenos, anticuerpos e inmunoglobulinas. Explica que el sistema inmunológico protege al cuerpo destruyendo microorganismos invasores mediante la interacción entre antígenos y anticuerpos. También resume varias técnicas inmunológicas comunes como aglutinación, inmunofluorescencia, radioinmunoensayo, ELISA y western blot que detectan y cuantifican antígenos a trav
Diagnostico de laboratorio de neisseria gonorrhoeae y Treponema pallidumIPN
Las enfermedades de transmisión sexual como la gonorrea y la sífilis se diagnostican mediante muestras como pus, secreciones y exudados que se analizan con tinción de Gram, cultivo en medios selectivos, PCR o microscopía de campo oscuro para identificar a Neisseria gonorrhoeae o Treponema pallidum. También se realizan pruebas serológicas no treponémicas y treponémicas para detectar anticuerpos.
Este documento proporciona instrucciones detalladas sobre cómo preparar y examinar un extendido de sangre periférica. Describe los pasos para obtener la muestra de sangre, preparar el extendido manualmente o de forma automatizada, teñirlo y examinarlo bajo el microscopio para realizar un recuento diferencial de leucocitos y plaquetas. El objetivo es producir un extendido de sangre de buena calidad para permitir un análisis hematológico preciso.
Este documento describe la técnica de Enzima Inmunoanálisis (EIA), también conocida como ELISA. Explica que EIA usa una molécula marcada con enzima para detectar de manera cuantitativa un antígeno o anticuerpo. Se clasifican los EIAs en competitivos o no competitivos (sandwich o indirecto). También cubre cálculo de cut-off, aplicaciones clínicas como diagnóstico de infecciones y monitoreo de hormonas, y posibles causas de resultados falsos positivos o negativos.
Este documento describe la proteína C reactiva, una proteína que se eleva en la sangre durante procesos inflamatorios como infecciones neumónicas, infecciones estreptocópicas y enfermedades autoinmunes. Explica cómo medir los niveles de proteína C reactiva mediante una prueba de aglutinación con látex que puede dar resultados positivos o negativos.
Prueba de ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)Luis Perez
El documento describe el método ELISA (ensayo inmunoenzimático) como una alternativa al ensayo de seroneutralización in vivo para evaluar la potencia de vacunas antitetánicas. Se desarrolló un ELISA indirecto para cuantificar antitoxina tetánica en sueros de curiel utilizando un estándar calibrado de 29 UI/mL. El ensayo demostró ser preciso y exacto, y mostró una buena correlación con los resultados del ensayo biológico. Los niveles de seroprotección alcanzados contra 15 lot
Este documento compara dos pruebas para la detección de sífilis, la VRDL y la RPR. La VRDL solo se puede usar con suero y usa un antígeno no particulado que produce floculación si hay anticuerpos presentes, mientras que la RPR se puede usar con suero o plasma y usa un antígeno con partículas de carbón. Ambas pruebas pueden dar falsos negativos temprano o si no se realizan correctamente, y falsos positivos que persisten menos de seis meses. Las pruebas reagínicas son
Examen Parasitológico de deposiciones (EPSD) - Metodo de Burrows modificado Citrin Longin
Este documento describe el procedimiento del examen parasitológico seriado de deposiciones (EPSD). El EPSD es un método de diagnóstico común en laboratorios clínicos chilenos para detectar parásitos gastrointestinales. El documento detalla los métodos de recolección y procesamiento de muestras, incluido el uso de soluciones fijadoras, y recomienda el método de Burrows Modificado para concentración y observación microscópica de las muestras.
Este documento describe los estafilococos, incluyendo su taxonomía, especies comunes, factores de virulencia y síndromes clínicos. Se mencionan 14 especies de estafilococos, siendo S. aureus el patógeno más importante. S. aureus puede causar infecciones cutáneas, intoxicación alimentaria, síndrome de shock tóxico y neumonía. Los estafilococos coagulasa-negativos a menudo causan infecciones asociadas a dispositivos médicos.
Este documento presenta los procedimientos para determinar los niveles de triglicéridos y lipoproteínas de alta densidad (HDL) en suero a través de métodos colorimétricos enzimáticos. Incluye la introducción, objetivo, procedimiento, interpretación, cálculos y formatos para reportar los resultados para cada prueba. El procedimiento describe los pasos para extraer la muestra de suero, mezclarla con reactivos, medir la absorbancia, e interpretar y calcular los niveles de lípidos basados en las lecturas
1) El documento describe varias pruebas de inmunología clínica, incluyendo la aglutinación en látex para la detección de proteína C reactiva, antiestreptolisina O y factor reumatoide.
2) La aglutinación en látex es un método cualitativo y semicuantitativo rápido que usa partículas de látex recubiertas con antígenos o anticuerpos.
3) La proteína C reactiva se eleva en respuesta a infecciones o inflamaciones y puede usarse para monitorear
El test de CAMP se utiliza para identificar la producción del factor CAMP por estreptococos del grupo B. El factor CAMP interactúa con la ß-hemolisina producida por Staphylococcus aureus causando una hemólisis en forma de flecha que indica la presencia del factor. El procedimiento implica sembrar cepas de S. aureus y estreptococos de forma perpendicular en una placa con sangre ovina e incubar para observar la hemólisis en forma de flecha.
La inmunofluorescencia es una técnica que utiliza anticuerpos unidos a sustancias fluorescentes para detectar moléculas específicas y se aplica en diagnósticos médicos e investigación. Existen dos tipos: inmunofluorescencia directa que detecta antígenos en un paso, e inmunofluorescencia indirecta que detecta anticuerpos circulantes en dos etapas. Presenta ventajas como resultados rápidos y detección de microorganismos específicos, pero también limitaciones como la necesidad de personal especializado y costos elevados.
Las deficiencias en la fagocitosis pueden clasificarse en defectos en la producción de neutrófilos, en la adhesión leucocitaria, en la vía enzimática oxidativa, y deficiencia específica de gránulos. Esto incluye trastornos como la neutropenia cíclica, el síndrome de Kostman, el síndrome de Schwaman-Diamond, la neutropenia autoinmune, los defectos de adhesión leucocitaria tipo 1 y 2, la enfermedad granulomatosa crónica, la deficiencia de la
El ELISA es un ensayo inmunológico que detecta la presencia de antígenos o anticuerpos en una muestra mediante el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima. El ELISA se puede utilizar para detectar una variedad de sustancias como hormonas, proteínas, virus y bacterias, y proporciona información útil para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades.
El documento describe el proceso inmunitario. Explica que el sistema inmunitario está compuesto de órganos, células y moléculas que defienden al organismo de sustancias extrañas. Describe las respuestas inmunitarias específicas y no específicas, y los tipos de inmunidad. También explica los diferentes tipos de glóbulos blancos y sus funciones en la defensa del organismo.
El documento describe tres pruebas de laboratorio: PCR, ASO y FR. La prueba de PCR mide la proteína C reactiva y se usa para detectar enfermedades infecciosas y condiciones inflamatorias. La prueba ASO mide los anticuerpos antiestreptocócicos y se usa para diagnosticar infecciones por estreptococos. La prueba FR mide los factores reumatoides y se usa para diagnosticar artritis reumatoide y otras condiciones autoinmunes. Todas las pruebas usan partícul
El documento presenta una técnica de proteómica llamada Western blotting. Se describe el proceso que involucra la separación de proteínas por electroforesis en geles, su transferencia a una membrana y detección usando anticuerpos específicos. Puede realizarse de forma directa o indirecta dependiendo del anticuerpo marcado utilizado en la detección de la proteína de interés.
Este documento describe diferentes técnicas de ELISA. Detalla los tipos de fases sólidas, enzimas y clases de ELISA. Explica las ventajas y desventajas de la beta-galactosidasa, la fosfatasa alcalina y la peroxidasa como enzimas para ELISA. También resume brevemente las generaciones de ELISA y sus aplicaciones en patología animal, vegetal y otras áreas.
La técnica ELISA directa implica fijar antígenos específicos a un soporte sólido, luego añadir anticuerpos marcados con una enzima, y finalmente un sustrato que producirá un producto coloreado si hay una reacción entre el antígeno y el anticuerpo. Esta técnica se usa comúnmente en laboratorios médicos para detectar infecciones, enfermedades autoinmunes y anticuerpos, y tiene aplicaciones importantes en el diagnóstico de varias afecciones como VIH, cáncer y transplantes.
La técnica ELISA se basa en la detección de un antígeno inmovilizado sobre una fase sólida mediante anticuerpos que producen una reacción cuyo producto, como un colorante, puede medirse espectrofotométricamente. Los ensayos ELISA pueden ser directos, indirectos o de sándwich. Las generaciones posteriores de ensayos ELISA han mejorado la sensibilidad y especificidad para detectar VIH mediante el uso de proteínas y peptidos recombinantes y la detección de antígenos y anticuerpos.
El Western blot es una técnica analítica que permite detectar proteínas específicas en una muestra. Involucra la separación de proteínas mediante electroforesis en gel, su transferencia a una membrana, y la detección de la proteína de interés usando anticuerpos específicos. Es una técnica fundamental en biología molecular, bioquímica e inmunología para estudiar la presencia y cantidad de proteínas.
Este documento describe la inmunohistoquímica, una técnica que utiliza anticuerpos marcados para detectar antígenos en cortes histológicos. Explica que la inmunohistoquímica sigue varios pasos como la obtención de la muestra, fijación, detección del antígeno y análisis para diagnosticar enfermedades. Finalmente, indica que la inmunohistoquímica es útil para determinar el origen de tumores desconocidos, clasificar neoplasias linfoides y encontrar marcadores pron
Este documento describe los fundamentos y procedimientos de las pruebas de Western blot. Explica que el Western blot es una técnica analítica usada para detectar proteínas específicas mediante electroforesis y transferencia a membranas. Detalla los pasos del procedimiento, incluyendo la electroforesis, transferencia a membranas, incubación con anticuerpos y revelado. También explica conceptos como electroforesis, membranas de transferencia, anticuerpos primarios y secundarios. Finalmente, resume algunas de sus aplicaciones principales como diagnóstico e investigación.
Este documento trata sobre inmunohistoquímica. La inmunohistoquímica consiste en métodos para localizar antígenos específicos en tejidos o células basados en la reacción antígeno-anticuerpo. El documento describe el desarrollo histórico de la técnica, los pasos para la preparación de muestras incluyendo fijación, inclusión y corte, así como técnicas como inmunoperoxidasa e informes de resultados. La inmunohistoquímica es útil para el diagnó
El ELISA es un ensayo inmunológico que permite detectar la presencia de antígenos o anticuerpos mediante el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima. Se basa en la unión específica antígeno-anticuerpo y la actividad enzimática, lo que permite revelar la reacción mediante la adición de un sustrato. El ELISA se utiliza ampliamente en medicina, microbiología y otras áreas.
El documento proporciona información sobre la técnica ELISA (Ensayo de Inmunoabsorción Enzimática). Describe los diferentes tipos de ELISA como directo, indirecto y sándwich. Explica las ventajas y limitaciones de ELISA, así como sus aplicaciones clínicas como la detección de enfermedades infecciosas y autoinmunes. Además, detalla el principio funcional de ELISA a través de los 10 pasos del procedimiento y presenta un caso clínico de detección del VIH mediante esta técnica.
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica que permite amplificar selectivamente un segmento específico de ADN a través de ciclos repetidos de desnaturalización, hibridación de cebadores y extensión por una ADN polimerasa, generando grandes cantidades de ADN molde para su posterior análisis o manipulación.
La prueba ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica utilizada para detectar la presencia de anticuerpos o antígenos en una muestra biológica. Se basa en la unión de un anticuerpo específico a un antígeno, seguido de la unión de una enzima a dicho anticuerpo. La reacción enzimática produce un cambio de color que indica la presencia del anticuerpo o antígeno de interés.
El documento describe los diferentes tipos de inmunoensayo ELISA y sus pasos. Existen varios tipos de ELISA como directo, indirecto y sándwich que usan anticuerpos o antígenos marcados para medir la presencia de analitos específicos. Los pasos generales incluyen la fijación de antígenos o anticuerpos al soporte, adición de la muestra, anticuerpos marcados y un substrato para generar una señal cuantificable. Los resultados se pueden leer visual o colorimétricamente y tienen aplicaciones clínicas
El documento describe los diferentes tipos de inmunoensayo ELISA y sus pasos generales. ELISA se usa para medir la presencia de analitos específicos en muestras mediante complejos antígeno-anticuerpo. Existen varios tipos de ELISA como directo, indirecto y sándwich. Todos los tipos de ELISA involucran la fijación de antígenos o anticuerpos a un soporte, la adición de muestras y reactivos marcados con enzimas, la detección de la unión mediante la adición de un sustrato y
El documento describe los diferentes tipos de inmunoensayo ELISA y sus pasos. Existen varios tipos de ELISA como directo, indirecto y sándwich que usan anticuerpos o antígenos marcados para medir la presencia de analitos específicos. Los pasos generales incluyen la fijación de antígenos o anticuerpos al soporte, adición de la muestra, anticuerpos marcados y un substrato para generar una señal cuantificable. Los resultados se leen visual o colorimétricamente y tienen aplicaciones clínicas para detect
El documento describe los diferentes tipos de inmunoensayo ELISA y sus pasos. Existen varios tipos de ELISA como directo, indirecto y sándwich que usan anticuerpos o antígenos marcados para medir la presencia de analitos específicos. Los pasos generales incluyen la fijación de antígenos o anticuerpos al soporte, adición de la muestra, anticuerpos marcados y un substrato para generar una señal cuantificable. Los resultados se pueden leer visual o colorimétricamente y tienen aplicaciones clínicas
La técnica ELISA se basa en la detección de un antígeno inmovilizado mediante anticuerpos que producen una reacción enzimática medible. Se han desarrollado diferentes tipos de inmunoensayos como ELISA y RIA para detectar micotoxinas de forma sensible y específica. Los anticuerpos monoclonales son una herramienta clave para estos análisis.
El documento describe la relación entre antígenos y anticuerpos. Los antígenos son sustancias que pueden provocar una respuesta inmune, mientras que los anticuerpos son proteínas producidas en respuesta a antígenos. La técnica ELISA se utiliza para detectar la unión de antígenos y anticuerpos mediante el uso de enzimas acoplados que producen una señal cuantificable.
El documento describe los principales tipos de ensayo inmunoenzimático ELISA y la técnica de Western blot. ELISA incluye ELISA directo, indirecto, sandwich y competitivo. Western blot implica electroforesis de proteínas, transferencia a membrana, inmunotinción con anticuerpos primarios y secundarios, y detección de las bandas mediante quimioluminiscencia, fluorescencia o colorimetría.
Este documento describe diferentes técnicas de inmunodiagnóstico como la detección y cuantificación de antígenos o anticuerpos. Explica que los inmunoanálisis se basan en la reacción antígeno-anticuerpo y pueden utilizar marcadores como isótopos radioactivos o enzimas. También clasifica los inmunoensayos según el uso de marcadores, los métodos de detección y el diseño de la reacción.
El documento describe la prueba de ELISA (Ensayo Inmunoadsorbente Ligado a Enzimas), la cual utiliza complejos antígeno-anticuerpo para detectar la presencia de un analito específico en una muestra. Explica que ELISA involucra el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima, permitiendo una detección cuantificable. Luego, describe los pasos generales de ELISA, incluyendo el tapizado del pocillo con antígeno o anticuerpo, la adición de la muestra, la unión del antí
Este documento describe la técnica de inmunoensayos enzimáticos conocida como ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), la cual permite detectar de manera cualitativa, semicuantitativa y cuantitativa la presencia de antígenos o anticuerpos en una muestra biológica a través del uso de anticuerpos o antígenos conjugados con una enzima. El documento explica los elementos, procedimiento y modalidades de ELISA, así como sus aplicaciones como método presuntivo para VIH y la detección de Toxoplasma gon
2003 97 pps_extracción y purifiación de proteínasjuanmsosap
El documento describe varias técnicas para el análisis y purificación de proteínas, incluyendo la extracción, fraccionamiento, cromatografía, electroforesis, cristalografía de proteínas, y pruebas ELISA e inmunoprecipitación. También cubre el uso de la proteína verde fluorescente (GFP) como marcador para estudiar la ruta de infección de bacterias en modelos de peces.
ELISA es una técnica de inmunoensayo que utiliza un antígeno o anticuerpo inmovilizado para detectar la presencia de un anticuerpo o antígeno conjugado a una enzima que genera un producto detectable como un cambio de color. Existen varios tipos de ELISA como competitivo, no competitivo (directo, indirecto, sándwich). ELISA se puede usar para detectar una variedad de enfermedades, hormonas, inmunoglobulinas e inmunocomplejos en muestras como suero, orina y heces utilizando diferentes enzimas y su
La prueba ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica de análisis inmunoenzimático heterogéneo que permite detectar sustancias de elevado peso molecular como antígenos y anticuerpos con alta sensibilidad a nivel de nanogramos. Existen varios tipos de ELISA como competitivo, no competitivo directo e indirecto, que se basan en la unión de antígenos, anticuerpos o complejos inmunológicos a una fase sólida seguida de la detección enzimática. La ELISA tiene m
El documento resume la situación de conflictos en Siria, incluyendo la milicia progubernamental Shabbiha, el apoyo de Al Qaeda a la oposición, violaciones de derechos humanos denunciadas por organizaciones, el inicio de las protestas en 2011 y la respuesta violenta del gobierno que ha causado miles de muertes. También menciona posibles soluciones como la militarización de la oposición ante el fracaso de iniciativas diplomáticas.
Este documento describe las soluciones, incluyendo su definición como sistemas homogéneos formados por dos o más componentes. Explica la importancia de las soluciones para los seres vivos y los diferentes estados de agregación que pueden tener. Además, cubre varias unidades para medir la concentración de soluciones como la molaridad y normalidad. Por último, detalla los procesos de dilución de soluciones.
Este documento describe las propiedades de las disoluciones. Explica que una disolución consiste en un disolvente y uno o más solutos. Detalla tres formas comunes de expresar la concentración de una disolución: porcentaje en masa, molaridad y molalidad. Además, explica conceptos como la dilución, mediante la cual se puede preparar una disolución a partir de otra de mayor concentración, así como las propiedades coligativas de las disoluciones, que dependen solo de la concentración de partículas
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Este documento describe la técnica de espectrofotometría UV-visible y su aplicación para cuantificar biomoléculas. La espectrofotometría se basa en que las moléculas absorben luz de manera dependiente de su concentración. Se utiliza un espectrofotómetro para medir la luz absorbida por una muestra a diferentes longitudes de onda. La ley de Beer-Lambert establece la relación entre la absorbancia, concentración y distancia recorrida por la luz. Mediante espectros de absorción y cur
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Este documento reglamenta la profesión de bacteriología en Colombia. Define la bacteriología como una profesión universitaria que se enfoca en la promoción de la salud, prevención y diagnóstico de enfermedades. Establece los requisitos para ejercer la profesión, incluyendo tener un título universitario en bacteriología y una tarjeta profesional emitida por el consejo profesional de bacteriología. También describe los deberes, derechos y prohibiciones de los bacteriólogos en el ejercicio de su
Este documento presenta una guía sobre los materiales de laboratorio más comunes. Explica que estos materiales incluyen vidrio, equipos de calor y frío, equipos de medición y otros. Describe en detalle varios materiales de vidrio como matraces, vasos de precipitado y pipetas. También cubre equipos como baños termostatizados, mecheros y centrífugas. El objetivo es que los estudiantes aprendan a identificar y manipular correctamente los materiales de un laboratorio.
Este documento describe los aspectos fundamentales de un laboratorio clínico, incluyendo su definición, áreas requeridas, funcionarios, equipos esenciales y procesos. Explica que un laboratorio clínico es un lugar donde se toman y analizan muestras biológicas y se entregan resultados de manera oportuna bajo estrictos controles de calidad. Detalla los equipos principales como centrífugas, microscopios, incubadoras y neveras necesarios para realizar diferentes pruebas, así como las leyes y normas que
El documento habla sobre la toma de muestras sanguíneas. Explica que es importante tomar la muestra correctamente para evitar errores que puedan dar resultados erróneos. Detalla los tipos de tubos que se pueden usar, el procedimiento para la toma incluyendo la preparación, identificación del paciente, selección de la vena y cuidados posteriores. También describe posibles errores comunes y cómo prevenirlos.
ACERTIJO DESCIFRANDO CÓDIGO DEL CANDADO DE LA TORRE EIFFEL EN PARÍS. Por JAVI...JAVIER SOLIS NOYOLA
El Mtro. JAVIER SOLIS NOYOLA crea y desarrolla el “DESCIFRANDO CÓDIGO DEL CANDADO DE LA TORRE EIFFEL EN PARIS”. Esta actividad de aprendizaje propone el reto de descubrir el la secuencia números para abrir un candado, el cual destaca la percepción geométrica y conceptual. La intención de esta actividad de aprendizaje lúdico es, promover los pensamientos lógico (convergente) y creativo (divergente o lateral), mediante modelos mentales de: atención, memoria, imaginación, percepción (Geométrica y conceptual), perspicacia, inferencia y viso-espacialidad. Didácticamente, ésta actividad de aprendizaje es transversal, y que integra áreas del conocimiento: matemático, Lenguaje, artístico y las neurociencias. Acertijo dedicado a los Juegos Olímpicos de París 2024.
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El curso de Texto Integrado de 8vo grado es un programa académico interdisciplinario que combina los contenidos y habilidades de varias asignaturas clave. A través de este enfoque integrado, los estudiantes tendrán la oportunidad de desarrollar una comprensión más holística y conexa de los temas abordados.
En el área de Estudios Sociales, los estudiantes profundizarán en el estudio de la historia, geografía, organización política y social, y economía de América Latina. Analizarán los procesos de descubrimiento, colonización e independencia, las características regionales, los sistemas de gobierno, los movimientos sociales y los modelos de desarrollo económico.
En Lengua y Literatura, se enfatizará el desarrollo de habilidades comunicativas, tanto en la expresión oral como escrita. Los estudiantes trabajarán en la comprensión y producción de diversos tipos de textos, incluyendo narrativos, expositivos y argumentativos. Además, se estudiarán obras literarias representativas de la región latinoamericana.
El componente de Ciencias Naturales abordará temas relacionados con la biología, la física y la química, con un enfoque en la comprensión de los fenómenos naturales y los desafíos ambientales de América Latina. Se explorarán conceptos como la biodiversidad, los recursos naturales, la contaminación y el desarrollo sostenible.
En el área de Matemática, los estudiantes desarrollarán habilidades en áreas como la aritmética, el álgebra, la geometría y la estadística. Estos conocimientos matemáticos se aplicarán a la resolución de problemas y al análisis de datos, en el contexto de las temáticas abordadas en las otras asignaturas.
A lo largo del curso, se fomentará la integración de los contenidos, de manera que los estudiantes puedan establecer conexiones significativas entre los diferentes campos del conocimiento. Además, se promoverá el desarrollo de habilidades transversales, como el pensamiento crítico, la resolución de problemas, la investigación y la colaboración.
Mediante este enfoque de Texto Integrado, los estudiantes de 8vo grado tendrán una experiencia de aprendizaje enriquecedora y relevante, que les permitirá adquirir una visión más amplia y comprensiva de los temas estudiados.
1. Fundamentos y Tipos de ELISAs.
El ELISA se basa e el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad
tanto inmunológica como enzimática. Al estar uno de los componentes (antígeno o anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre
un soporte (inmunoadsorbente) la reacción antígeno-anticuerpo quedará inmovilizada y, por tanto, será fácilmente revelada mediante la adición
de un substrato especifico que al actuar la enzima producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un
espectrofotómetro o un colorímetro.
Los diferentes tipos de ELISA son los que se enumeran a continuación:
• Anticuerpos marcados:
ELISA Directo
ELISA Indirecto
ELISA sándwich
Doble (DAS)
Heterólogo (HADAS)
• Antígeno marcado
ELISA competitivo
ELISA Directo.
Consta de las siguientes etapas:
• Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de antígenos específicos. Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados.
• Adición de anticuerpos marcados (“conjugados”) con una enzima; si los anticuerpos reaccionan con los antígenos, el complejo quedará
solubilizado. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
ELISA Indirecto.
Consta de las siguientes etapas:
• Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos para los anticuerpos objeto de estudio. Lavado para eliminar los antígenos fijados
deficientemente o no fijados.
• Adición del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos reaccionarán específicamente con los antígenos fijados al soporte. Lavado para
eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
• Adición de anti-anticuerpos conjugados con una enzima, los cuales reaccionan con los anticuerpos específicos añadidos en el paso anterior y
que se encuentran fijados a los antígenos. Lavado para eliminar los anti-anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
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2. Pasos generales de un ELISA.
1. Tapizado del pocillo con el antígeno o anticuerpo.
2. Adición de la muestra problema con la mezcla de antígenos o anticuerpos.
3. Unión del antígeno o anticuerpo específico al anticuerpo o antígeno tapizado en el pocillo
4. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de antígeno o anticuerpo no unido
5. Adición del anticuerpo secundario marcado con la enzima
6. Unión del anticuerpo secundario al antígeno o anticuerpo
7. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida
8. Adición del substrato
9. Unión del substrato a la enzima
10. Desarrollo del color
ELISA Sándwich “DAS” (Double Antibody Sandwich).
Consta de las siguientes etapas:
• Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del agente patógeno a detectar. Lavado para eliminar los anticuerpos fijados
deficientemente o no fijados.
• Adición de la muestra problema (extracto vegetal, sangre, suero, plasma, etc.), de tal forma que si está presente el agente patógeno de
diagnóstico (antígeno), reaccionará específicamente con los anticuerpos fijados al soporte. Lavado para eliminar los antígenos que no hayan
reaccionado y los restos de la muestra no fijados.
• Adición de anticuerpos específicos del antígeno a detectar (deben tener un epítopo diferente de los anticuerpos con los que se han tapizado el
soporte) conjugados con una enzima, los cuales reaccionan con los antígenos añadidos con la muestra problema y que se encuentran fijados
a los anticuerpos. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
ELISA Sándwich “HADAS”.
Consta de las siguientes etapas:
• Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del agente patógeno a detectar. Lavado para eliminar los anticuerpos fijados
deficientemente o no fijados.
• Adición de la muestra problema (extracto vegetal, sangre, suero, plasma, etc.), de tal forma que si está presente el agente patógeno de
diagnóstico (antígeno), reaccionará específicamente con los anticuerpos fijados al soporte. Lavado para eliminar los antígenos que no hayan
reaccionado y los restos de la muestra no fijados.
• Adición de anticuerpos específicos del antígeno a detectar (deben tener un epítopo diferente de los anticuerpos con los que se han tapizado el
soporte), los cuales reaccionan con los antígenos añadidos con la muestra problema y que se encuentran fijados a los anticuerpos. Lavado
para eliminar los anticuerpos que no hayan reaccionado.
• Adición de anticuerpos conjugados con una enzima anti-anticuerpos empleados en el paso anterior. Lavado para eliminar los anti-anticuerpos
marcados que no hayan reaccionado.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
ELISA Competitivo.
Consta de las siguientes etapas:
• Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del agente patógeno a detectar. Lavado para eliminar los anticuerpos fijados
deficientemente o no fijados.
• Adición en concentración conocida de una mezcla de antígenos del anticuerpo utilizado en el paso anterior, marcados con una enzima y
antígenos desconocidos objeto de estudio. Paralelamente, añadir únicamente antígenos del anticuerpo usado en el paso anterior, marcados
con una enzima. Lavar para eliminar los antígenos que no hayan reaccionado.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado de ambas pruebas y comparar los resultados. Si las lecturas de ambas pruebas son
análogas, el antígeno a estudio no tienen nada que ver con los anticuerpos empleados para tapizar el soporte. Si hay diferencia en las
lecturas de ambos pocillos, el antígeno objeto de estudio, está relacionado serológicamente con el anticuerpo empleado para tapizar el
soporte y la diferencia de densidad óptica, es proporcional a la concentración del antígeno problema en la muestra.
Todos los tipos de ELISAs descritos se pueden resumir en dos grandes grupos:
• ELISAs para detectar antígenos: ELISAs sándwich.
• ELISAs para detectar anticuerpos: ELISAs indirectos.
La fase sólida debe ser de un tipo que permita un fácil manejo (especialmente en los procesos de lavado) y la reproducibilidad de la unión de
antígenos o anticuerpos sobre su superficie. Las microplacas de 96 pocillos y un volumen de 350µL son especialmente ventajosas para procesar
un elevado número de muestras y un vez tapizadas, el material inmovilizado permanece reactivo mucho tiempo siempre que se mantenga seco
y a baja temperatura. Normalmente se utilizan microplacas de poliestireno de fondo plano que pueden adquirirse estériles y con o sin tapa.
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3. Microplacas de poliestireno de 96 pocillos
Las técnicas de ELISA se realizan mediante la adición secuencial de todos los reactivos necesarios separados por etapas de lavado. Cada una de
las operaciones puede realizarse manualmente con micropipetas o con equipamiento para la automatización de todas y cada una de las etapas.
Esta completa automatización se justifica por la necesidad de procesar y analizar un gran número de muestras y necesitar una elevada
repetibilidad de resultados.
Lavador de placas de 96 pocillos Lector de placas de 96 pocillos
Adsorción de antígenos y anticuerpos (“tapizado”).
Los métodos empleados son dos fundamentalmente:
• Dilución del antígeno o anticuerpo en tampón carbonato (pH 9,6) e incubación posterior durante 3h a 37°C o 16h a 4°C.
• Tratamiento a 40-50°C en tampón fosfato (PBS) o en agua fisiológica tamponada pH 7,2-7,4 hasta desecación.
Solución de lavado.
Solución salina con Tween 20 como agente tensioactivo:
ClNa ................................................... 8,5gr
Tween 20 ........................................... 0,5mL
Agua destilada .................................... 1000mL
Conjugados.
La enzima escogida como marcador debe unirse fácilmente a antígenos y anticuerpos, encontrarse en estado puro a un precio razonable y tener
un substrato cromogénico o fluorogénico conveniente y de fácil preparación. Las enzimas más utilizadas son fosfatas alcalina, peroxidasa de
rábano y ß-galactosidasa; a continuación se muestra una tabla con las ventajas y desventajas de cada una así como los substratos que se
emplean con cada una de ellas.
Las operaciones de marcado o conjugación, llevan implícitas dos etapas:
• Purificación de los anticuerpos a partir de un antisuero bruto mediante una precipitación generalmente salina de las proteínas del antisuero,
seguida de una diálisis y purificación de la fracción de anticuerpos mediante filtración molecular, cromatografía o separación en gradiente de
densidad mediante ultracentrifugación. Finalmente, se suele concentrar los anticuerpos purificados y ajustarlos a una dosis de 1mg/mL.
• Marcado de los anticuerpos con la enzima mediante el uso de un agente puente que normalmente suele ser el glutaraldehído o el del m-
periodato sódico (apenas existen diferencias entre ellos en cuanto a los resultados finales).
VENTAJAS DESVENTAJAS
Incrementa su tasa de reacción en
presencia de alcoholes. Sufre inhibición inducida por anticuerpos.
Tetrámero de 300kDa.
Frecuentemente causa impedimento
estérico.
SUBSTRATOS
Producto insoluble Producto soluble
ß-galactosidasa
MUG (fluorescente)
λem=440nm
AMPGD (luminiscente)
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4. VENTAJAS DESVENTAJAS
Se inactiva por agentes quelantealmacena y manipula
narse a +4°C durante más
omo
ubstratos comerciales
disponibles.
s, la
n de conjugación que la
térico.
Más cara que la peroxidasa.
Estable cuando se
adecuadamente.
Puede almace
de 6 meses.
Disponible como enzima libre o c
conjugado.
Más estable que la peroxidasa.
Pequeño tamaño (≈ 86kDa).
Amplia variedad de s
acidez y los fosfatos orgánicos.
Menor relació
peroxidasa.
Necesita tampones específicos.
Puede causar impedimento es
Fosfatasaalcalina
SUBSTRATOS
Producto insoluble Producto soluble
BCIP/NBT
λex=360nm; λem=440nm
AMPPD (lumi
p-NPP:
Amarillo: λ=405-410nm
4-MUP (fluorescente)
niscente)
VENTAJAS DESVENTAJAS
Estable cuando se almacena y manipula
adecuadamente.
s
nzima libre o como
o estérico.
Amplia variedad de substratos come
disponibles
La peroxidasa endóPuede almacenarse a +4°C durante má
de 6 meses.
Disponible como e
conjugado.
Bastante barata.
Pequeño tamaño (≈ 40kDa).
Relación de conjugación 4:1.
No causa impediment
rciales
.
Incompatible con bastantes estabilizantes
(azida sódica, etc.).
gena y algunos metales
interfieren en su actividad.
SUBSTRATOS
Producto insoluble Producto soluble
Peroxidasa
l: λ=650nm
Amarillo: λ=450nm
DAB
4CN
zul:
rillo: λ=450nm
S:
5-410nm
)
sh)
Esteres de acridina (quimioluminiscente
flash)
TMB:
Azu
TMB:
A λ=650nm
Ama
ABT
Azul verdoso: λ=40
OPD
Amarillo: λ=490nm
HPPA (fluorescente)
λex=320nm; λem=404nm
HPA (fluorescente)
Luminol (quimioluminiscente glow
Polifenoles (quimioluminiscente fla
Luciferina (bioluminiscente glow)
Actualmente existe otra posibilidad para sustituir el conjugado anti-especie para la detección de IgGs y es la utilización de proteína A o G
a. Aquella dilución del conjugado que produzca menor reacción inespecífica
rro del conjugado aún a costa de aumentar el tapizado.
e la parada de la
H o tanto, el método de detección de los complejos antígeno-anticuerpo
y así tenemos sistemas de detección colorimétricos, fluorescentes y luminiscentes que a continuación pasamos a desarrollar:
marcadas con peroxidasa.
Una vez se disponga del conjugado debe ser conservado hasta el momento de su utilización; esta conservación se suele realizar mediante
liofilización, congelación a –70°C o filtrado estéril y conservación a -20°C mezclado con igual volumen de glicerol bidestilado estéril.
La búsqueda de la concentración óptima de uso depende ligeramente del tipo de ELISA empleado; para cualquier ELISA que utilice anti-
anticuerpos conjugados, se suele probar diferentes diluciones del conjugado (desde 1:100 hasta 1:2000) frente a sucesivas diluciones de
antisuero en placas tapizadas con antígeno a concentración idóne
(menor color de fondo o “background”) con muestras negativas e implique una clara distinción de las muestras positivas, será la óptima. La
elección de una concentración de conjugado óptima va completamente ligada a planteamientos económicos en los que se ha de procurar el
mayor aho
La elección del substrato es de gran importancia para la estandarización del método ELISA y hay que tener varios factores en cuenta, como son
sensibilidad, especificidad, repetibilidad, facilidad de lectura y complejidad de preparación, así como estabilidad después d
reacción.
oy en día existen muchas variaciones en cuanto a los substratos y, por l
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5. •
cual da lugar a productos de reacción solubles o
cesario la utilización de un substrato que tenga
una tasa de reacción “lenta” (15- alizar ensayos cinéticos de la reacción,
debería usarse un substrato que te
Colorimetría. Los ensayos colorimétricos dan un producto de reacción coloreado que absorbe luz en el espectro visible, siendo la densidad
óptica (DO) del mismo proporcional a la cantidad de producto medido.
Para todos los ensayos enzimáticos, la etapa final es la adición del substrato enzimático, el
insolubles y es elegido por su rendimiento cuantitativo de producto de reacción. Para ensayos colorimétricos, la tasa de desarrollo de color es
proporcional, dentro de un cierto rango, a la cantidad de conjugado enzimático presente.
Tanto la peroxidasa como la fosfatasa alcalina, tienen substratos que dan productos de reacción coloreados solubles. La decisión de qué
substrato es el mejor para cada tipo de ensayo, depende de la sensibilidad deseada, los requerimientos de tiempo y el sistema de detección
que se vaya a utilizar. Para ensayos que necesitan ser muy sensibles, el substrato ideal debe producir color intenso con una tasa de reacción
muy rápida; sin embargo, para ensayos que requieren un rango dinámico amplio, son deseables substratos que den producto de reacción en
un período de tiempo largo(15-30 minutos) y den un rango de intensidad de color amplio, dependiendo de la cantidad de muestra presente.
Para ensayos que se vayan a parar (se vaya a añadir a la reacción, tras una cantidad de tiempo definido, un inhibidor químico que pare el
desarrollo de color y permita la detección dentro de un período razonable de tiempo), es ne
30 minutos hasta su finalización); sin embargo, cuando se vayan a re
nga una tasa de reacción “rápida” (5 minutos o menos).
Aunque muchos son los factores que afectan la medida de la actividad enzimática (temperatura, pH, fuerza iónica, composición del tampón,
reducción del substrato, formación de productos inhibidores, feed-back por formación del producto final, desnaturalización de la enzima y, en
ie del pocillo (donde la enzima está localizada) y el lector no estará midiendo la verdadera DO del pocillo. Cuando sí se mezcla, el
e los lectores de microplaca llevan incorporados
• s colorimétricos; la enzima convierte el substrato
ente. El substrato debería ser estable a temperatura ambiente y en presencia de luz. Asimismo, el producto de la
y utilizar
algunos casos, exposición a la luz), los que más afectan al ensayo, hoy en día, son el tiempo de reacción, la temperatura y la exposición a la
luz.
Antes de leer la DO y/o tras la adición de la solución de parada, es importante mezclar completamente el contenido de los pocillos para
asegurar el cese por completo de la reacción (ensayos de punto final solamente) y la total dispersión del producto de color. La precisión del
ensayo puede ser drásticamente mejorada añadiendo este simple paso al protocolo. El efecto físico que la agitación de la placa antes de la
lectura tiene en la DO resultante es muy importante. Los colorímetros de microplaca solamente leen el centro exacto del pocillo, lo cual
implica que una placa no agitada tendrá pocillos que se asemejarán más al formato “A” de la figura, ya que, debido a que la disolución del
producto de la reacción es lenta, si no es mecánicamente agitada o mezclada, el producto coloreado de la reacción estará concentrado en la
superfic
producto coloreado es completamente homogeneizado en el pocillo (formato “B” de la figura), y el lector detectará la verdadera DO del
pocillo.
Hay varias formas de realizar esta mezcla: hay agitadores de microplaca para 2-4 placas a la vez, de tal manera que esas placas puedan ser
agitadas en grupo antes de ser introducidas en el lector; hoy día, muchos, si no la mayoría, d
agitadores que permitan que las placas sean homogeneizadas justo antes de ser leídas. Ambos métodos (agitadores internos o externos),
cuando son usados correctamente, pueden tener efectos positivos en la precisión del ensayo.
Fluorescencia. Los inmunoensayos de fluorescencia (ELFIA) son una simple variación de lo
en un producto de reacción que emite fluorescencia cuando es excitado a una determinada longitud de onda, siendo las unidades relativas de
fluorescencia (fotones de luz emitidos) proporcionales a la cantidad de producto analizado.
En comparación con los métodos colorimétricos, los ensayos de fluorescencia son ligeramente más sensibles y, lo que es más importante,
amplían el rango de medida, en oposición al límite de 2,0-4,0 DO impuesto en los ensayos colorimétricos.
Un substrato fluorogénico es elegido por la cantidad de luz emitida tras su excitación, la cual debería ser proporcional a la cantidad de
conjugado enzimático pres
reacción enzima-substrato debería tener distintas longitudes de onda de emisión y de excitación, ya que el substrato, por si mismo, no
debería ser fluorescente.
Los ensayos fluorimétricos están sujetos a distintos problemas que reducen o aumentan la señal inespecíficamente. La detección por
fluorescencia es susceptible a cambios en el pH, temperatura, concentración iónica, concentración de detergente, secado, y a la matriz sólida,
lo cual puede conducir a distorsión de luz, un elevado background, y fenómenos de “apagamiento” y/o “blanqueamiento”. El fenómeno de
“light scattering” (dispersión de luz) está ocasionado porque la luz emitida rebota cuando entra en contacto con moléculas, partículas en
suspensión o la superficie de la microplaca. Por esta razón, es importante eliminar las burbujas que se puedan formar en los pocillos
reactivos químicos de elevado grado de pureza. Las placas negras opacas y las tiras de la más alta calidad están diseñadas para reducir esta
dispersión de luz, ya que absorben la luz que rebota en la superficie del pocillo y solamente se mide la luz dirigida hacia el detector.
El “background” (fluorescencia de fondo) y/o la autofluorescencia son el principal problema para la realización de ensayos en placas de 96
pocillos. Las fuentes de este background son los propios componentes de la muestra (hemoglobina, bilirrubina, partículas de celulosa,
drogas), los componentes de los diluyentes (iones metálicos), el material de la placa (tipo de plástico utilizado) y la contaminación variable
(partículas de polvo, huellas digitales). El background puede ser eliminado de tres formas: mediante el diseño del ensayo (dilución de la
muestra para ensayos homogéneos y filtrado de los reactivos a través de una membrana de 0,45µm para ensayos heterogéneos), mediante
la instrumentación y mediante una estricta limpieza. El fenómeno de “apagamiento” (“quenching”) se caracteriza por una reducción
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6. inespecífica de la señal y es causado por la absorción de la emisión por el oxígeno disuelto, por lo que los reactivos pueden ser desgasificados
pueden distorsionar las lecturas de fluorescencia incluyen las variaciones de temperatura, la estabilidad de la fuente
rmitido aumentar la versatilidad asociada con el diseño del experimento, p.e., usando
• na variación del método estándar de ELISA. Una enzima transforma un
bst e
,
excitación se alcanza mediante luz de una determinada longitud de onda, es decir, igual que en la fluorescencia.
uesto que emite luz al ser degradado, por ejemplo,
ura ambiente durante todo el período que dure el ensayo, y debe ser elegido por su
ound”), por su capacidad para producir luz intensa en estado activado, por su capacidad
Exi
spensación interna y mezcla dentro del propio lector, la simplicidad del procedimiento, la elevada sensibilidad, la posibilidad
e utilizan
ndose lecturas seriadas hasta encontrar el óptimo, que será aquel en el que se
encuentre mayor diferencia de color entre positivos y negativos de referencia. Las reacciones enzimáticas colorimétricas siguen curvas del tipo
del que se muestra en la gráfica para muestras positivas y negativas, por lo que existe un tiempo de lectura para el cual la diferencia
colorimétrica entre muestras positivas y negativas es máximo.
antes de su utilización para eliminar este efecto. El fenómeno de “blanqueamiento” (“bleaching”) o “decoloración” (“fading”) está también
caracterizado por una reducción en la señal, pero está causado por un exceso en el tiempo de excitación. Actualmente, no suele ser un
problema debido a la baja energía y corto tiempo de excitación de los fluorímetros actuales.
Otras interferencias que
de luz y el ancho de la banda de excitación. La fluorescencia aumenta cuando disminuye la temperatura, por lo que es importante mantenerla
constante en cada ensayo y entre diferentes ensayos, ya que, pequeñas variaciones de un ensayo a otro, pueden ocasionar cambios en la
sensibilidad del mismo.
Muchos de los plásticos usados para fabricar placas y tiras son autofluorescentes; por ello, es importante elegir una placa que esté fabricada
específicamente para fluorescencia. Estas placas normalmente son negras (aunque las blancas pueden ser usadas para compuestos
fluorescentes que emitan luz a longitudes de onda más altas), ya que se reduce significativamente el background (no son autofluorescentes y
absorben la luz dispersada) y se eliminan, prácticamente, las contaminaciones cruzadas. Estas placas negras pueden tener fondo opaco o
transparente. Las de fondo transparente se utilizan normalmente para ensayos fluorescentes basados en células, lo cual permite su
visualización durante el crecimiento de las mismas, al mismo tiempo que reducen la transmisión de luz lateral o la contaminación cruzada
durante la detección. Con la llegada de los fluorímetros para placas de 96 pocillos, que son capaces de efectuar lecturas desde el fondo o
desde la parte superior del pocillo, estas placas han pe
una placa de fondo transparente, se puede realizar un ensayo doble en el que se utilice un anticuerpo marcado con peroxidasa (detectado
colorimétricamente con TMB) para la primera parte del ensayo, y otro anticuerpo marcado con fosfatasa alcalina (detectado
fluorimétricamente con 4-MUP) para la segunda parte.
Luminiscencia. Al igual que la fluorescencia, la luminiscencia es u
su rato en un producto que emite fotones en lugar de dar color visible. La luminiscencia se describe como la emisión de luz por parte d
una sustancia, que regresa desde un estado electrónicamente excitado a su estado original. Las diferentes formas de luminiscencia difieren
precisamente, en la forma en que se alcanza dicho estado excitado:
Fotoluminiscencia: la
Bioluminiscencia: la excitación se alcanza mediante la utilización de un comp
luciferina o luciferasa.
Quimioluminiscencia: la excitación se alcanza mediante una reacción química.
Actualmente, es el método disponible más sensible debido a la posibilidad de multiplicación y amplificación de la señal. Las reacciones de
luminiscencia se miden en RLU (Unidades Relativas de Luz), que son típicamente proporcionales a la cantidad de muestra presente.
El substrato luminiscente debe ser estable a temperat
baja luminiscencia de fondo en estado basal (“backgr
de emitir luz estable durante un período prolongado de tiempo (minutos) y por su disponibilidad comercial (calidad y consistencia).
sten dos métodos de detección de luminiscencia:
FLASH: es inestable en la Naturaleza y alcanza una intensidad máxima de luz en segundos o milisegundos, por lo que es necesario
comenzar la reacción mientras los reactantes están frente al sistema de detección (fotomultiplicador). Es de capital importancia que el
intervalo de tiempo transcurrido entre la adición de los reactivos y el proceso de detección sea siempre constante.
GLOW: consiste en una serie de estados transitorios secuenciales que originan una señal constante. La luz emitida, a diferencia del color o
la fluorescencia, no se acumula, por lo que la ésta debe ser intensa y la reacción enzimática prolongada para obtener suficiente señal.
Los aspectos positivos de este tipo de luminiscencia son: la reacción puede ser iniciada fuera del aparato de detección, por lo que se elimina
la necesidad de di
de incrementar la señal y que el procedimiento es muy adecuado para sistemas de placas de 96 pocillos. Además, este tipo de reacción
luminiscente puede ser medido usando un luminómetro, capturando la imagen en una película fotográfica o mediante sistemas de análisis de
imagen.
Aunque en teoría estas reacciones son estables durante al menos 20 minutos, los resultados entre pocillos y entre diferentes placas son más
homogéneos cuando el tiempo de incubación enzima-substrato es corto (se recomienda efectuar un período de estabilización de 2 minutos
tras la adición del substrato y entonces leer inmediatamente las placas).
Elegir la mejor placa para luminiscencia es crucial para desarrollar un ensayo fiable, y ésta ha de estar diseñada específicamente para
luminiscencia. Habitualmente son blancas y opacas, con el fondo transparente u opaco; ambas versiones están diseñadas para reducir
contaminación cruzada y el background ocasionado por la composición de la resina blanca. Las placas con fondo transparente s
habitualmente para ensayos luminiscentes basados en células, tales como ensayos de proliferación celular, ya que permiten la visualización
de las células durante su crecimiento y también previenen de la transferencia lateral de luz entre pocillos durante el paso de detección.
También son útiles para ensayos dobles con un producto colorimétrico para un primer análisis y otro luminiscente para un segundo.
Finalmente, se debe optimizar el tiempo de incubación, realizá
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7. Variación de la absorbancia en función del tiempo para muestras positivas y negativas y
tiempo óptimo de lectura o parada de la reacción.
Lectura e interpretación de los resultados.
La lectura de los resultados puede ser valorada tanto visual como colorimétricamente. A simple vista, pueden ser leídos ciertos ensayos
rutinarios en los que no haga falta una cuantificación y no se presenten abundantes casos dudosos (el ojo humano no es capaz de discernir una
variación de 0,1 de densidad óptica) ya que dicha lectura visual tendrá el inconveniente de la subjetividad y el de diagnosticar equivocadamente
los casos límite. No obstante, evita la adquisición de aparatos relativamente costosos como son los lectores de microplacas.
Una de las grandes ventajas de la técnica ELISA es la posible automatización de la lectura y, por lo tanto, su objetividad. Dicha automatización
se puede conseguir con un simple colorímetro o espectrofotómetro de cubeta o con sofisticados equipos de lectura automática de microplacas.
Los resultados finales de la lectura colorimétrica se reflejan numéricamente mediante valores de absorbancia o densidad óptica que se
obtendrán a la longitud de onda más adecuada para la coloración final alcanzada.
Aplicaciones del ELISA.
Patología Animal
Enfermedades producidas por parásitos
Babesias y tripanosomas
Toxocara canis
Toxoplasmosis
Triquinosis
Enfermedades producidas por Micoplasmas
Enfermedades producidas por bacterias
Mycobacterium tuberculosis
Brucelas
Enterotoxinas Vibrio cholerae
Estreptococos
Salmonelas
Enfermedades producidas por virus
Enfermedad de Aujeszky
Enfermedad de Newcstle
Fiebre aftosa
Leucemia felina
Peste porcina africana
Peste porcina clásica
Rinotraqueitis infecciosa
Rotavirus
Artritis vírica
Otras aplicaciones
Hormonas
Gonadotropina coriónica
Progesterona
Testosterona
Hormonas tiroideas
Cuantificación de inmunoglobulinas
IgG
IgE
IgA
Inmunopatología
Anticuerpos anti-DNA
Factor reumatoide
Inmunocomplejos circulantes
Patología Vegetal
Enfermedades producidas por virus
En frutales
PPV
CLSV
TRSV
En cítricos
CTV
En patata
PLRV
PVY
PVX
PVA
TRV
En cereales
En guisante
En lúpulo
En soja
En ornamentales
En plantas hortícolas
Enfermedades producidas por bacterias
Enfermedades producidas por Micoplasmas
Enfermedades producidas por hongos
Para descargar el archivo pdf sobre la optimización de todos los parámetros de un ELISA pinche sobre el link correspondiente:
• Optimización de la elección de la superficie de la placa.
• Optimización del tapizado de la placa con la proteína/anticuerpo de interés.
• Optimización del paso de bloqueo de los sitios de unión inespecíficos.
• Optimización de los pasos de lavado para la eliminación de las uniones inespecíficas.
• Optimización del método de detección: colorimetría, luminiscencia y/o fluorescencia.
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