1. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 1
UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA
Profesor: Bioq. Farm. Carlos García MSc.
Alumno: Fernández Valarezo Gisela Katherine
Curso: Quinto Paralelo: A
Grupo N° 5
Fecha de Elaboración de la Práctica: Lunes 23 de junio del 2014
Fecha de Presentación de la Práctica: Lunes 30 de Junio del 2014
PRÁCTICA N° 5
Título de la Práctica: Intoxicación por cloroformo.
Animal de Experimentación: Cobayo.
Vía de Administración: Intraperitonial
Tiempos:
o Inicio de la práctica: 08:24am
o Hora de administración del toxico al cobayo: 08:34 am
o Deceso del animal: 09:02 am (28 minutos)
o Inicio de la destilación: 10:15 am
o Finalización de la destilación: 10:45 am
o Final de la práctica: 12:45 am
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA
1. Observar la reacción que presenta el cobayo ante la Intoxicación por cloroformo.
2. Observar cuidadosamente las manifestaciones y controlar el tiempo en que actúa el
toxico.
3. Adquirir la destreza para realizar y reconocer la positividad de las reacciones de
identificación.
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MATERIALES
o Jeringa de 5 cc
o Varilla
o Espátula
o Probeta
o Campana
o Panema
o Bureta
o Soporte universal
o Cinta plástica
o Lámpara de alcohol
o Fosforo
o Pinzas
o Cocineta
o Porta tubo
o Tabla de disección
o Cronómetro
o Equipo de disección
o Bisturí
o Vasos de precipitación 200 y
500 ml.
o Erlenmeyer
o Equipo de destilación.
o Tubos de ensayo
o Pipetas
o Guantes de látex
o Mascarilla
o Mandil
o Gorro
o Zapatones en caso de usar
sandalias
SUSTANCIAS
Cloroformo.
Acido tartárico.
Nitrato de plata.
Hidróxido de Sodio 0.1 N
Ferricianuro de potasio.
Hidróxido de potasio 12%.
Ácido cromotrópico.
Agua destilada.
Ácido sulfúrico concentrado.
Leche.
Cloruro férrico
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PROCEDIMIENTO
1. Limpiar y desinfectar la mesa de trabajo.
2. Colocamos el cobayo en el panema.
3. Tener todos los materiales a utilizar listos.
4. Administramos al cobayo, 5 ml de cloroformo por vía intraperitoneal y
anotamos el tiempo.
5. Observamos los efectos que produce en el cobayo.
6. Después de 17 minutos pasado la primera dosis, inyectamos 5 ml más del toxico
y con esto se llegó a la muerte del animal.
7. Procedimos a la apertura del cobayo con la ayuda del bisturí.
8. Observamos el estado de las vísceras.
9. En un vaso de precipitación recolectamos la sangre y colocando las vísceras
(picadas lo más finas posibles).
10. El contenido del vaso anterior lo pasamos al balón para proceder a la destilación.
11. Armamos correctamente el equipo de destilación (método de soxhleth),
asegurando que no existan fugas que conlleven a pérdidas del destilado.
12. Adicionamos a las vísceras acido tartárico (25 ml) y calentamos con la lámpara
de alcohol esto con movimiento circular durante 30 minutos (el destilado fue
recibido en NaOH).
13. Con el destilado procedimos a realizar las reacciones de identificación del
cloroformo en medios biológicos.
14. Una vez terminada la práctica se limpia todo el material y el área utilizada.
REACCIONES DE RECONICIMIENTO
1. En el fondo de un tubo de ensayo se mezclan unas cuantas gotas de cloroformo
con otras tantas de alcohol de 95ª que contiene un poco de nitrato de plata, se
inflama la mezcla y se observa que esta arde con un llama bordeada de verde y
que el ácido clorhídrico formado reacciona con el nitrato de plata disuelto
originando un precipitado de cloruro de plata.
2. REACCIÓN DE DUMAS.- al adicionar unas gotas de destilado que contiene
cloroformo a unos mililitros de potasa alcohólica (proporción 1:10), se originan
formiatos y cloruro de potasio.
CHCl3 + 4 KOH ----- ClK + HCO2K + H 2 O
Se neutralizan la mezcla, y se separan en dos porciones a una porción se le agrega
percloruro de hierro produciendo un color rojo en frío o un precipitado en
caliente.
A la otra porción se le agrega solución de nitrato de plata produciéndose un
precipitado de cloruro de plata que se disuelve en amoníaco diluido.
3. REACCIÓN DE LUSTGARTEN.- al calentar la muestra con unos miligramos
de beta naftol y solución alcohólica concentrada de potasa (preferentemente un
trozo de potasa y algunas gotas de alcohol), se obtiene un franco color azul.
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Si se sustituye el B-naftol por timol el color es Amarillo más o menos oscuro;
con resorcinol la coloración e roja – violáceo y con la piridina rojo.
4. REACCIÓN DE ROSEBOOM.- se disuelve un pequeño cristal de yodo en la
solución muestra y se agregan unos pocos miligramos de clorhidrato de
piperacina; si el cloroformo está presente en la muestra, la coloración violeta
inicial cambia a amarilla rojiza al disolverse el alcaloide.
GRÁFICOS:
Animal de experimentación
cobayo
Extraer las vísceras del
cobayoInyectar 10 ml el toxico
(cloroformo)
Preparar el equipo de
destilación
Triturar las vísceras
Observar los síntomas del
cobayo luego de la
administración del toxico
Obtener el destilado para
realizar el análisis
Colocar al cobayo en la tabla
de disección
1
4
852
7
3
6
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REACCIONES DE RECONOCIMIENTO EN MEDIOS BIOLÓGICOS
REACCIÓN:
Reacción positivo característico precipitado de AgNO3
REACCIÓN DE DUMAS.
Reacción positivo característico color rojo
Reacción positivo característico precipitado de cloruro
de plata
Antes
Antes
Después
Después
En frìo En caliente
Antes Después
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REACCIÓN DE LUSTGARTEN
Reacción positivo característico se observó el color azul.
Reacción positivo característico se observó el
color amarillo.
Reacción positivo característico se observó el color
rojo - violaceo.
Después
Antes
Antes Después
Antes Después
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REACCIÓN DE ROSEBOOM
Reacción positivo no se observó la coloración
amarillo-rojiza.
OBSERVACIONES
Hemos observado que al administrar el toxico (cloroformo) por vía intraperitoneal el
cobayo presentó respiración agitada, a los 5 minutos depresión del SNC, perdida de la
actividad motora, lagrimeo, convulsiones y a los 7 minutos presento hipoxia y
finalmente a los 28 minutos murió.
CONCLUSION
Al término de esta práctica podemos darnos cuenta que el cloroformo es muy tóxico, al
observar la rápida acción de depresión del SNC, perdida de movilidad, además de las
convulsiones y la hipoxia que llevaron a la muerte del animal en un periodo de 28
minutos con una dosis de 10 ml de toxico administrada en 2 volúmenes de 5 ml y
finalmente mediante las reacciones de identificación constatamos la presencia de
cloroformo en el destilado de las vísceras.
RECOMENDACIONES
Realizar la asepsia del área a trabajar.
Utilizar el equipo de protección adecuado: bata de laboratorio, guantes,
mascarilla.
Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio.
Utilizar la cámara de gases para realizar las pruebas y evitamos así
intoxicaciones.
Al someter calor en el tubo de ensayo para las reacciones, realizarlo de lado y
que no esté alguna persona en esa dirección, ya que puede haber salpicadura del
toxico.
DespuésAntes
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CUESTIONARIO
¿QUE ES EL CLOROFORMO?
El cloroformo, triclorometano o tricloruro de metilo, es un compuesto químico de
fórmula química CHCl3. Puede obtenerse por cloración como derivado del metano o
del alcohol etílico o, más habitualmente en la industria farmacéutica, utilizando hierro y
ácido sobre tetracloruro de carbono. A temperatura ambiente, es un líquido volátil, no
inflamable, incoloro, de olor penetrante, dulzón y cítrico.
¿CUAL ES EL EFECTO DEL CLOROFORMO EN LA SALUD?
Inhalación: Actúa como anestésico relativamente potente. Irrita el tracto respiratorio y
produce efectos en el sistema nervioso central, incluyendo dolor de cabeza,
somnolencia, mareos. La exposición a altas concentraciones puede resultar en
inconsciencia e inclusive muerte. Puede causar daño hepático y desórdenes sanguíneos.
La exposición prolongada puede llevar a la muerte debido a una frecuencia cardíaca
irregular y desórdenes renales y hepáticos.
Ingestión: Causa quemaduras severas de boca y garganta, dolor pectoral y vómitos.
Grandes cantidades pueden causar síntomas similares a los de la inhalación.
Contacto con la Piel: Causa irritación cutánea causando enrojecimiento y dolor.
Elimina los aceites naturales. Puede ser absorbido a través de la piel.
Contacto con los Ojos: Los vapores causan dolor e irritación ocular. Las salpicaduras
pueden causar severa irritación y posible daño ocular.
Exposición Crónica: La exposición prolongada o repetida a los vapores puede causar
daño al sistema nervioso central, corazón, hígado y riñones. El contacto con el líquido
elimina las grasas y puede causar irritación crónica de la piel con grietas y resequedad y
la correspondiente dermatitis. Se sospecha que el cloroformo es un carcinógeno en
humanos.
¿CUALES SON LAS MEDIDAS DE PREACUSION ANTE EL CLOROFORMO?
Tener un límite de Exposición Aérea
Un Sistema de Ventilación adecuado: Se recomienda un sistema de escape local
y/o general para las exposiciones de empleados debajo de los Límites de
Exposición Aérea. En general, se prefiere la ventilación de extractor local
debido a que puede controlar las emisiones del contaminante en su fuente
impidiendo dispersión del mismo al lugar general de trabajo.
Protegerse la piel lo más que se pueda para evitar contacto con el toxico. Usen
vestimenta protectora impermeables, incluyendo botas, guantes, ropa de
laboratorio, delantal o monos para evitar contacto con la piel.
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Protección para los Ojos: Utilice gafas protectoras contra productos químicos
y/o un protector de cara completo donde el contacto sea posible. Mantener en el
de trabajo un área instalación destinada al lavado, remojo y enjuague rápido de
los ojos.
¿CUÁL ES LA TOXICOLOGIA DEL CLOROFORMO?
Datos Toxicológicos: Cloroformo: LD50 oral en ratas: 908 mg/kg; LD50 piel de
conejos: > 20 gm/kg; LC50 inhalación en ratas: 47702 mg/m3/4H; irritation data: piel
de conejos 10 mg/24H abierta leve; Ojo de conejos: 20 mg/24H moderada; Ha sido
investigado como tumorígeno, mutagénico y causante de efectos reproductivos.
Toxicidad Reproductiva: Se han observado defectos al nacimiento en ratas y ratones
expuestos a la inhalación de cloroformo a concentraciones en el aire mayores de 100
ppm. La ingestión de cloroformo por animales de laboratorio gestantes, ha causado
fetotoxicidad pero no defectos al nacimiento y sólo a niveles que causan severos efectos
en la madre.
¿HAY ALGÚN EXAMEN MÉDICO QUE DETERMINE SI HE ESTADO
EXPUESTO AL CLOROFORMO?
Pese a que se puede medir la cantidad de cloroformo en el aire que usted exhala, en la
sangre, en la orina y en los tejidos del cuerpo, no contamos con pruebas fiables que
determinen cuánta exposición de cloroformo ha habido, o si usted experimentará efectos
nocivos en la salud. La medición del cloroformo en los líquidos y los tejidos del
organismo puede ayudar a determinar si usted ha estado en contacto con grandes
cantidades de cloroformo. Sin embargo, estas pruebas solo son de utilidad si se realizan
poco después de que ha habido exposición, debido a que el cloroformo sale rápidamente
del cuerpo.
Las pruebas de sangre para medir la cantidad de enzimas del hígado pueden ayudar a
saber si el hígado presenta daños, pero no se puede determinar si éstos fueron causados
por el cloroformo.
¿EN DONDE SE PUEDE ENCONTRAR EL CLOROFORMO?
Agua: En el medio acuático, el cloroformo se descompone con extrema lentitud.
Debido a su gran volatilidad escapa en forma de gas de los cuerpos de agua
superficiales.
Aire: Debido a su alto grado de volatilidad, el cloroformo llega a la atmósfera, donde se
acumula en pequeñas cantidades. Se descompone por fotólisis.
Degradación, productos de la descomposición: En presencia de agentes oxidantes, el
cloroformo se descompone formando fosgeno y ácido hidroclórico.
Cadena alimentaria: El cloroformo se encuentra en todas partes y, por lo tanto,
también ha sido hallado en los alimentos. El agua potable contiene, en ciertas ocasiones,
grandes concentraciones de cloroformo resultante de la cloración del agua.
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USOS
Hoy en día el cloroformo tiene un importante número de usos tales como:
En química se utiliza en la separación orgánica.
En la fabricación de plásticos que se utiliza en el proceso de unión.
Se utiliza en síntesis orgánica.
Se utiliza como un precursor en la fabricación de teflón (antiadherente).
En la Primera Guerra Mundial el cloroformo fue usado como arma química.
Como anestésico.
BIBLIOGRAFÍA
Toxicología Médica Dr. Phil, Dr. Med. H. Funher. Editorial Científico-Médico.
Madrid. España
WEBGRAFÍA
http://www.dorwil.com.ar/msds/Cloroformo.pdf
http://cloroformo.org/usos/
http://www.atsdr.cdc.gov/es/phs/es_phs6.html
AUTORIA
Bioq. Farm. Carlos García MSc.
FIRMAS DE LOS INTEGRANTES
__________________ __________________
Elizabeth Guzmán Geovanny Ramón
_________________________
Gisela Fernández
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GLOSARIO
CARCINÓGENO: Cualquier sustancia o agente capaz de desencadenar un cáncer en
las células sanas; no necesariamente tiene que ser un agente que provoque mutación en
el material genético de las células.
FETOTOXICIDAD: Alteración del proceso de desarrollo fetal causado por la
exposición materna a agentes como radiación, virus, gases, drogas o fármacos. Sus
efectos incluyen malformaciones, defectos de crecimiento o muerte fetal.
GESTANTE: Estado de embarazo o gestación. Estado fisiológico de la mujer que se
inicia con la fecundación y termina con el parto.
SOMNOLENCIA: Se refiere a sentirse anormalmente soñoliento durante el día. Las
personas que son soñolientas pueden quedarse dormidas en situaciones o momentos
inapropiados.
TUMORÍGENO: Este adjetivo se aplica a cualquier sustancia que cause formación de
tumores.
ANEXOS:
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INTOXICACIÓN POR CLOROFORMO
Generalidades
El cloroformo es el triclorometano (CHCl3). Inicialmente se empleó como
agente anestésico, pero poco después se abandonó este uso por s gran
toxicidad hepática y renal.es un líquido incoloro y no inflamable, de olor y
sabor dulzón, extremadamente volátil y muy liposoluble.
Fuentes de exposición
Está disponible como disolvente en laboratorios y en la industria
química.se ha prohibido su uso como sustancia aromática en pastas de
dientes y otros productos como resultado de su efecto carcinogénico en
animales después de exposiciones crónicas. La intoxicación aguda y
crónica puede ocurrir por exposición a sus vapores.
Toxicocinetica y mecanismo de acción
El cloroformo es un anestésico potente y origina una profunda depresión
del SNC. Entra en el organismo por vía respiratoria, digestivo dérmico. En
humanos puede producir la muerte con la ingestión oral de tan solo 10 ml
.exposiciones prolongadas o repetidas a los vapores pueden producir
hepatotoxicidad, severa que se característica por necrosis centrolobular.
Asimismo se ha descrito degeneración grasa del hígado, el riñón el
corazón. El mecanismo de lesión parece ser la oxidación a nivel hepático
del cloroformo a fosgeno a través del sistema microsomal. También se
forma fosgeno cuando los vapores de cloroformo se exponen al calor de
una llama. El fosgeno inhalado se convierte en ácido hidroclorhídrico y
dióxido de carbono cuando reacciona con el agua en el alvéolo; y el ácido
produce edema pulmonar.
Cuadro clínico
La severidad de los síntomas por exposición aguda, vía respiratoria,
digestivo, dérmica, está en relación directa con la dosis absorbida. El
cloroformo, cuando se inhala, produce todos los niveles de anestesia,
teniendo un margen de seguridad muy estrecho, debido a que causa fallo
cardiaco y respiratorio de forma casi simultánea. No puede detectarse por
el olfato hasta que su concentración excede de 400 ppm. Una exposición
durante 10 minutos a concentraciones de 1000 ppm produce síntomas
generales como náuseas, vómitos, vértigo cefaleas .exposiciones a una
concentración de 1000 a 4000 ppm origina desorientación y
concentraciones de 10000 a 20000 ppm dan lugar a pérdida de
conciencia, pudiendo originar la muerte.
Dependiendo de la dosis absorbida va a producir alteraciones más o
menos importantes de la función hepática, renal y cardiaca.
El cloroformo, por su acusado poder como disolvente de grasas, en
contacto con la piel da lugar a dermatitis local, y en los ojos produce
irritación corneal.
Reacciones en medio biológico
El material de la investigación se somete a destilación con arrastre de
vapor en medio acido tartárico, y en el destilado se realiza las reacciones
de identificación.
1. En el fondo de un tubo de ensayo se mezclan unas cuantas gotas
de cloroformo con otras tantas de alcohol de 95ª que contiene un poco de
nitrato de plata, se inflama la mezcla y se observa que esta arde con un
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llama bordeada de verde y que el ácido clorhídrico formado reacciona con
el nitrato de plata disuelto originando un precipitado de cloruro de plata.
2. Reacción de Dumas.- al adicionar unas gotas de destilado que
contiene cloroformo a unos mililitros de potasa alcohólica (proporción
1:10), se originan formiatos y cloruro de potasio.
CHCl3 + 4 KOH ----- ClK + HCO2K + H 2 O
Se neutralizan la mezcla, y se separan en dos porciones a una porción
se le agrega percloruro de hierro produciendo un color rojo en frío o un
precipitado en caliente.
A la otra porción se le agrega solución de nitrato de plata produciéndose
un precipitado de cloruro de plata que se disuelve en amoníaco diluido.
3 Reacción de Lustgarten.- al calentar la muestra con unos miligramos
de beta naftol y solución alcohólica concentrada de potasa
(preferentemente un trozo de potasa y algunas gotas de alcohol), se
obtiene un franco color azul.
Si se sustituye el B-naftol por timol el color es Amarillo mas o menos
oscuro; con resorcinol la coloración e roja – violáceo y con la piridina rojo.
4.- Reacción de fujiwara.-En un tubo de ensayo, se vierte 2 ml de lejía de
sosa 1:2 con una capa de 2mm de piridina y luego la muestra que
contiene el cloroformo; se agitan, podemos por unos instantes en baño de
María y se deja en reposo; se convierte en una materia coloreada que
varía del rosa al rojo vivo, soluble en piridina .Esta reacción sensible para
unos pocos microgramos de cloroformo y es aplicable en la orina de algún
sujeto que haya absorbido de 15-20 g de agua clorofórmica.
5.-Reacción de roseboom.- se disuelve un pequeño cristal de yodo en la
solución muestra y se agregan unos pocos miligramos de clorhidrato de
piperacina ; si el cloroformo está presente en la muestra, la coloración
violeta inicial cambia a amarilla rojiza al disolverse el alcaloide.
6.-Reacción de Benedict.- si la solución muestra contiene cloroformo,
reduce el reactivo de Benedict, y de acuerdo a la concentración del tóxico
puede producirse una gama de colores que van desde el verde, amarillo,
naranja o rojo ladrillo.
Efectos Potenciales de Salud
Inhalación: Actúa como anestésico relativamente potente. Irrita el tracto
respiratorio produce efectos en el sistema nervioso central, incluyendo
dolor de cabeza, somnolencia, mareos. La exposición a altas
concentraciones puede resultar en inconsciencia e inclusive muerte.
Puede causar daño hepático y desórdenes sanguíneos. La exposición
prolongada puede llevar a la muerte debida una frecuencia cardíaca
irregular y desórdenes renales y hepáticos.
Ingestión: Causa quemaduras severas de boca y garganta, dolor
pectoral y vómitos. Grandes cantidades pueden causar síntomas similares
a los de la inhalación.
Contacto con la Piel: Causa irritación cutánea causando enrojecimiento y
dolor. Elimina los aceites naturales. Puede ser absorbido a través de la
piel.
Contacto con los Ojos: Los vapores causan dolor e irritación ocular. Las
salpicaduras pueden causar severa irritación y posible daño ocular.
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Exposición Crónica: La exposición prolongada o repetida a los vapores
puede causar daño al sistema nervioso central, corazón, hígado y riñones.
El contacto con el líquido elimina las grasas y puede causar irritación
crónica de la piel con grietas y resequedad y la correspondiente
dermatitis. Se sospecha que el cloroformo es un carcinógeno en
humanos.
Estabilidad y reactividad
Estabilidad: Establo bajo condiciones ordinarias del uso y del almacenaje.
el pH disminuye
en la exposición prolongada a la luz y al aire debido a la formación de
HCl.
Productos peligrosos de la descomposición: Monóxido de carbono del
producto de mayo, bióxido de carbono, cloruro de hidrógeno y fosgeno
cuando está calentado a la descomposición.
Polimerización peligrosa: No ocurrirá.
Manejo
Guarde en un envase resistente a la luz, cerrado herméticamente y
almacene en un área fresca, seca y bien ventilada. Proteja contra los
daños físicos. Aísle de las substancias incompatibles. Use equipo de
protección especial para realizar el mantenimiento o donde las
exposiciones pueden exceder los niveles de exposición establecidos.
Lávese las manos, la cara, los antebrazos y el cuello al salir de las áreas
restringidas. Dese un baño de regadera, deseche la ropa exterior,
cámbiese la ropa vistiendo ropa limpia al terminar el día.
Evite la contaminación cruzada de las ropas de calle. Lávese las manos
antes de comer y no coma, ni beba, ni fume en el trabajo. Los envases de
este material pueden ser peligrosos cuando están vacíos ya que retienen
residuos del producto (vapores, líquido); observe todas las advertencias y
precauciones que se alistan para el producto. Umbral de olor del
cloroformo: 250 mg/m3. El umbral de olor sólo sirve como advertencia de
la exposición; si no siente el olor, no significa que usted no está siendo
expuesto.
Desechos:
En pequeñas cantidades puede dejarse evaporar en una campana
extractora. En caso de grandes cantidades, debe mezclarse con
combustible, como queroseno, e incinerarse en equipo especializado para
evitar la generación de fosgeno.
ALMACENAMIENTO:
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Los recipientes que contienen este producto deben ser almacenados en
lugares alejados de la luz directa del sol, ya que se descompone
lentamente a productos como el fosgeno.
INFORMACIÓN TOXICOLÓGICA
DATO TOXICOLÓGICOS:
Chloroform: LD50 oral en ratas: 908 mg/kg; LD50 piel de conejos: > 20
gm/kg; LC50 inhalación en ratas: 47702 mg/m3/4H; irritación data: piel de
conejos 10 mg/24H abierta leve; Ojo de conejos: 20 mg/24H moderada;
Ha sido investigado como tumorígeno, mutagénico y causante de efectos
reproductivos.
Se han observado defectos al nacimiento en ratas y ratones expuestos
a la inhalación de cloroformo a concentraciones en el aire mayores de 100
ppm. La ingestión de cloroformo por animales de laboratorio gestantes, ha
causado feto toxicidad pero no defectos al nacimiento y sólo a niveles que
causan severos efectos en la madre.
INFORMACIÓN ECOLÓGICA
Esta sustancia puede ser peligrosa para el ambiente; debería prestarse
atención especial al agua.
· Ecotoxicidad
Algas (Chlamydomonas reinhardii) EC50 = 13,3 mg/l (72 horas)
Crustáceos (Artemia salina) EC50 = 68 mg/l (10 horas)
Peces (Brachydanio rerio) LC50 = 100 mg/l (48 horas)
· Movilidad
Coeficiente de reparto octanol/agua como log Pow: 1,97
BIBLIOGRAFÍA:
· http://www.quimica.unam.mx/IMG/pdf/7cloroformo.pdf
· http://www.dorwil.com.ar/msds/Cloroformo.pdf
· https://www.murciasalud.es/recursos/ficheros/137913-
CLOROFORMO.pdf
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