Este documento presenta un manual sobre la cuantificación de fenoles en plantas y medicamentos. El objetivo es determinar el contenido de fenoles mediante la preparación de una curva de calibración con ácido gálico y la cuantificación de muestras de plantas y un medicamento a base de espectrofotometría. Se describe el procedimiento que incluye la preparación de extractos, reacciones colorimétricas y cálculos para determinar la concentración de fenoles. Los resultados muestran que la guayusa, cúrcuma y

1. UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
Calidad, Pertinencia y Calidez”
UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
ANÁLISIS DE MEDICAMENTOS
Docente: Bioq. Carlos García MSc
Curso: 9no Semestre Paralelo: “B”
Fecha: 9 Febrero del 2018.
TEMA:
MANUAL SOBRE LA CUANTIFICACIÓN DE FENOLES EN PLANTAS Y EN
MEDICAMENTOS.
OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
 Determinar el contenido de fenoles en medicamentos y en plantas.
 Validar la calidad de un principio activo a base de patrones.
 Minimizar el uso de reactivos en la cuantificación de fenoles.
FUNDAMENTACIÓN
El Fenol es moderadamente volátil a temperatura ambiente (se evapora con
mayor lentitud que el agua). Es soluble en Alcohol, Glicerol, petróleo y una
cantidad moderada del mismo puede solubilizarse con agua; a temperaturas por
encima de 68ºC, el Fenol es completamente soluble en agua (Biblioteca Virtual,
210).
Los componentes fenólicos se encuentran en los alimentos y juegan un papel
fundamental en la dieta humana; estos metabolitos secundarios los encontramos
en las plantas, de acuerdo a la clasificación general se encuentran fenoles,
ácidos fenólicos y flavonoides.
Existe gran interés de estudiarlos debido a sus propiedades antioxidantes, su
participación en procesos sensoriales de los alimentos naturales y procesados,
además de sus posibles para las salud humana; tales como en el tratamiento y

2. prevención del cáncer, enfermedades cardiovasculares y otras patologías de
carácter antiinflamatorio (López, 2009).
MATERIALES
Materiales Equipos Reactivosy
sustancias
Muestras
Vaso de precipitación
Balón volumétrico 10, 25,
5 y 100ml.
Pipetas
Tubos de ensayo
Micropipetas
Puntasazules y amarillas
para micropipetas
Materiales de protección
personal
Guantes
Mascarilla
Cofia
Mandil
Zapatones
Espectrofotóm
etro
Ácido gálico
Reactivo de
Folin Ciocalteu
20%
Carbonatode
sodio 10%
Metanol
Aguadestilada
Cúrcuma
Moringa
Jenjibre
Cód. 4
Cód. 8
Guayusa
Ají M
Cód. 60
Cód. 24
Rocoto amarillo
Cód. 36
Cód. 19
Cód. 48
Medicamento
Diosmina MK 500mg
PROCEDIMIENTO
PREPARACIÓN DE CURVA DE CALIBRACIÓN DE ÁCIDO GÁLICO
1. Preparación de Folin 20% (V/V)
Se toma un volumen de 1ml de Reactivo de Folin 2N y enrazamos con agua
destilada en un balón de 5ml y se homogeniza. (1:5)
2. Preparación de Na2CO3 10%
Se pesan 2,5g de Carbonato de Sodio, disolvemos con agua destilada y se lo
lleva a un balón de 25ml. Enrazar con agua destilada y homogenizar.
3. Preparación de Ácido Gálico 0,5%
Se pesan 0,125g de Ácido gálico y se disuelven con 2,5ml de Metanol, se lleva
a un balón de 25ml y enrazamos con agua destilada. Homogenizar.
4. Preparación de las diluciones de la solución madre.

3. De la solución madre de ácido gálico que tiene una concentración de 5mg/ml
llevar a las siguientes concentraciones 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 mg/ml
Cálculos para las diluciones:
C1= Concentración inicial
C2= Concentración final
V1= Volumen inicial
V2= Volumen final
1. Para una concentración 0,05
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,05 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,05 ml = 50uL
2. Para una concentración 0,1
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,1 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,1 ml = 100uL
3. Para una concentración 0,2
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,2 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0.2 ml = 200uL
4. Para una concentración 0,3
C1 x V1= C2 x V2

4. V1= C2 x V2
C1
V1= 0,3 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,3 ml = 300uL
5. Para una concentración 0,4
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,4 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,4 ml = 400uL
Nota: Se toma el volumen requerido de la solución madre y se deposita en un
tubo de ensayo protegido de la luz, luego completar volumen con agua destilada
hasta 5ml.
ELABORACIÓN DE LOS EXTRACTOS DE PLANTAS Y DEL
MEDICAMENTOS.
1. Preparación de las muestras vegetales.
Pesar 0,025g de polvo de las plantas y disolver con 5ml de Metanol.
2. Preparación del medicamentos de Diosmina.
Pesar 1,75g de Diosmina y disolver con 5ml de Metanol, llevar a un balón de
50ml y enrazar con agua destilada.
CUANTIFICACÓN DE FENOLES
1. Desinfectar el área de trabajo.
2. Prepara los materiales y reactivos de trabajo.
Concentración Volumen Sol. Madre
0.05 50uL
0,1 100uL
0,2 200uL
0,3 300uL
0,4 400uL

5. 3. Pesar 0,025 g de polvo del material vegetal y traspasar al tubo de vidrio
tapa rosca
4. Añadir 5 ml de metanol puro y homogenizar.
5. Con la ayuda de una jeringa de 1 ml y con el filtro de aguja, debemos
obtener el sobrenadante (muestra).
6. En un tubo Eppendorfs protegidos de la luz le adicionamos 50 uL de
solución del medicamento o del extracto vegetal.
7. Luego añadir a cada tubo 200 uL de la dilución de Folin – Ciocalteu (1:4).
8. Adicionamos 50 uL de agua destilada y esperamos de 4 – 5 minutos para
que se dé la reacción.
9. Luego añadir 100 uL de la dilución de carbonato de sodio al 10%.
10.Finalmente preparar un blanco en las mismas proporciones, es decir:
100uL de Agua destilada, 200uL de Folin diluido (1:4), agitar y esperar 4-
5min y luego añadir 1000uL de la dilución de Carbonato de Sodio 10%.
11.Agitar y esperar 2h para realizar la lectura en el espectrofotómetro a
760nm.
12.Después realizar la primera lectura con el blanco y encerar para realizar
las siguientes lecturas.
Nota: Se realiza el ensayo por triplicado.
GRÁFICOS
Pesar 0,025 g de
muestra
Añadir5 ml de metanol. Filtrar con ayuda de los
filtrosde aguja.

6. CÁLCULOS
Absorbancia Diosmina= 1,469
CÁLCULOS
Absorbancia Diosmina= 1,469
y = 3,7223x -0,0037
𝐶𝑜𝑛𝑐. Á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝐺á𝑙𝑖𝑐𝑜 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 + 0,0037
3,7223
Conc.= 1,469 + 0,0037
3,7223
Conc. = 0,3956mg/ml
0,3956 𝑚𝑔
𝑚𝑙
x
5𝑚𝑙
0.125𝑔
= 15,824mg/g Hesperina
CONCLUSIÓN
De los 700mg que pesa cada tableta de Diosmina se específica como derivados
fenolicos la Hesperina en cantidades de 50mg, de acuerdo con esto en el analisis
por espectrofotometria resulto una concentracion de 15,82mg de Hesperina.
RESULTADOS
CURVA DE CALIBRACIÓN DEL ÁCIDO GÁLICO
Concentración
(mg/ml)
Absorbancia
0 0

7. ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS RESPECTO A LA CURVA DEL ÁCIDO
GÁLICO.
Absorbancias
Ẍ
Absorbancia
Concentración
mg/ml Fenoles mg EAG/g PS
0,472 0,576 0,565 0,538 0,135 26,92
0,081 0,085 0,084 0,083 0,025 4,93
0,253 0,272 0,275 0,267 0,069 13,80
0,351 0,442 0,499 0,431 0,109 21,74
0,180 0,249 0,256 0,228 0,060 11,94
0,243 0,280 0,283 0,269 0,069 13,90
0,341 0,421 0,450 0,404 0,102 20,45
0,630 0,665 0,669 0,655 0,163 32,58
0,260 0,348 0,348 0,319 0,082 16,32
0,212 0,242 0,242 0,232 0,061 12,12
0,181 0,224 0,227 0,211 0,055 11,09
0,266 0,299 0,287 0,284 0,073 14,64
0,211 0,179 0,171 0,187 0,050 9,94
0 0
0 0
0,025 0,078
0,025 0,085
0,025 0,072
0,050 0,224
0,050 0,220
0,050 0,214
0,100 0,366
0,100 0,371
0,100 0,371
0,150 0,594
0,150 0,597
0,150 0,599
0,200 0,790
0,200 0,804
0,200 0,801
0,250 1,042
0,250 1,057
0,250 0,990
y = 4.093x - 0.0115
R² = 0.9964
-0.2
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3
Absorbancia
Concentración (mg/ml)
Curva de Calibración del Acido Gálico
760nm

8. OBSERVACIONES
Se debe de verificar el extracto o algún otro factor que haya influido en el
contenido de fenoles de la Moringa ya que según los diferentes artículos esta es
una planta que contiene gran contenido de fenoles.
CONCLUSIONES
De todas las muestras analizadas de guayusa, pimiento, ají, moringa, entre otros;
las que más contenido de fenoles tienen son la Guayusa, Cúrcuma, Cód. 4 y
Cód. 8.
RECOMENDACIONES
Preparar todos los extractos de acuerdo a lo establecido ya que cualquier
error puedan influenciar en el resultado.
De acuerdo a lo establecido siempre realizar la lectura de las muestras a
760nm.
Es de vital importancia preparar el blanco ya que caso contrario vamos a
obtener resultados erróneos.
BIBLIOGRAFÍA Y WEB – GRAFÍA
o Biblioteca Virtual. (210). Obtenido de
http://documentacion.ideam.gov.co/openbiblio/bvirtual/018903/Links/Gui
a14.pdf
o López, P. L. (2009). Importancia de los grupos fenólicos en alimentos.
Temas Seletos de Ingeniería en Alimentos., 14.
0.00
5.00
10.00
15.00
20.00
25.00
30.00
35.00
Fenoles mg EAG/g PS