Este documento presenta el manual para la cuantificación de fenoles en plantas y medicamentos. Describe los materiales, reactivos, procedimientos y cálculos para realizar la cuantificación a través de una curva de calibración de ácido gálico y espectrofotometría. Los resultados muestran que las plantas con mayor contenido de fenoles son la cúrcuma y el código 4, mientras que la planta con menor contenido es el código 48. El medicamento analizado fue la Diosmina.

1. UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
“Calidad Pertinencia y Calidez”
D.L. N° 69-04, DE 14 DE ABRIL DE 1969
PROV. DE EL ORO-REP. DEL ECUADOR
UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
LABORATORIO DE TECNOLOGÍA FARMACÉUTICA
PRÁCTICA BF.9.01-08
1. DATOS INFORMATIVOS
Carrera: Bioquímica y Farmacia
Docente: BQF. Carlos García González, Ms.
Estudiantes: Gabriela Viviana Cunalata Cueva
Ciclo/Nivel: Noveno Semestre “A”.
Fecha de Elaboración de la Práctica: 09 de febrero del 2018.
Fecha de Presentación de la Práctica: 15 de febrero del 2018
Tema de la práctica:
MANUAL SOBRE LA CUANTIFICACIÓN DE FENOLES EN PLANTAS Y EN
MEDICAMENTOS.
1.1.DATOS LA MUESTRA
Fuente natural
 Cúrcuma
 Moringa
 Jenjibre
 Cód. 4
 Cód. 8
 Guayusa
 Ají M
 Cód. 60
 Cód. 24
 Rocoto amarillo
 Cód. 36
 Cód. 19
 Cód. 48
10

2. Medicamento
 Datos del medicamento: Diosmina
 Laboratorio: Mk
 Principio activo: Diosmina y Hesperidina
 Concentración: 500mg
 Forma farmacéutica: Solida
2. OBJETIVOS
 Determinar el contenido de fenoles en medicamentos y en plantas.
 Validar la calidad de un principio activo a base de patrones.
 Minimizar el uso de reactivos en la cuantificación de fenoles.
3. FUNDAMENTACIÓN
Los fenoles son un grupo de compuestos orgánicos que presentan en su estructura un grupo
funcional hidroxilo unido a un radical arilo. Por lo tanto, la fórmula general para un fenol se
escribe como Ar - OH. Los fenoles se nombran, generalmente, como derivados del miembro
más sencillo de la familia que es elfenol o hidroxibenceno. Los fenoles pueden sufrir dos tipos
de reacciones que incluyen el grupo hidroxilo. Una reacción puede producirse rompiendo el
enlace de oxigeno-hidrogeno, o puede producirse para romper el enlace carbono-oxigeno,
resultando una pérdida del grupo hidroxilo. (Chemistry 10, s.f.)
4. MATERIALES, EQUIPOS, REACTIVOS Y SUSTANCIAS:
Materiales Equipos Reactivos y
sustancias
Muestras
 Vaso de
precipitación
 Balón volumétrico
10, 25, 5 y 100ml.
 Pipetas
 Tubos de ensayo
 Micropipetas
 Espectro
fotómetr
o
 Ácido
gálico
 Reactivo
de Folin
Ciocalte
u 20%
 Carbonat
o de
 Cúrcuma
 Moringa
 Jenjibre
 Cód. 4
 Cód. 8
 Guayusa
 Ají M
 Cód. 60
 Cód. 24

3.  Puntas azules y
amarillas para
micropipetas
Materiales de protección
personal
 Guantes
 Mascarilla
 Cofia
 Mandil
 Zapatones
sodio
10%
 Metanol
 Agua
destilada
 Rocoto
amarillo
 Cód. 36
 Cód. 19
 Cód. 48
 Medicamento
Diosmina MK
500mg
5. INSTRUCCIONES:
 Trabajar con orden, limpieza y sin prisa.
 Mantener las mesas de trabajo limpias y sin productos, libros, cajas o accesorios
innecesarios para el trabajo que se esté realizando.
 Llevar ropa adecuada para la realización de la práctica: bata, guantes, mascarilla, cofia,
zapatones, gafas.
 Utilizar la campana de extracción de gases siempre que sea necesario.
6. PROCEDIMIENTOS
PREPARACIÓN DE CURVA DE CALIBRACIÓN DE ÁCIDO GÁLICO
1. Preparación de Folin 20% (V/V)
Se toma un volumen de 1ml de Reactivo de Folin 2N y enrazamos con agua destilada en un
balón de 5ml y se homogeniza. (1:5)
2. Preparación de Na2CO3 10%
Se pesan 2,5g de Carbonato de Sodio, disolvemos con agua destilada y se lo lleva a un balón
de 25ml. Enrazar con agua destilada y homogenizar.
3. Preparación de Ácido Gálico 0,5%
Se pesan 0,125g de Ácido gálico y se disuelven con 2,5ml de Metanol, se lleva a un balón de
25ml y enrazamos con agua destilada. Homogenizar.

4. 4. Preparación de las diluciones de la solución madre.
De la solución madre de ácido gálico que tiene una concentración de 5mg/ml llevar a las
siguientes concentraciones 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 mg/ml
Cálculos para las diluciones:
C1= Concentración inicial
C2= Concentración final
V1= Volumen inicial
V2= Volumen final
1. Para una concentración 0,05
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,05 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,05 ml = 50uL
2. Para una concentración 0,1
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,1 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,1 ml = 100uL
3. Para una concentración 0,2
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,2 mg/ml x 5ml
5 mg/ml

5. V1= 0.2 ml = 200uL
4. Para una concentración 0,3
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,3 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,3 ml = 300uL
5. Para una concentración 0,4
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,4 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,4 ml = 400uL
Nota: Se toma el volumen requerido de la solución madre y se deposita en un tubo de ensayo
protegido de la luz, luego completar volumen con agua destilada hasta 5ml.
ELABORACIÓN DE LOS EXTRACTOS DE PLANTAS Y DEL MEDICAMENTOS.
1. Preparación de las muestras vegetales.
Pesar 0,025g de polvo de las plantas y disolver con 5ml de Metanol.
Concentración Volumen Sol. Madre
0.05 50uL
0,1 100uL
0,2 200uL
0,3 300uL
0,4 400uL

6. 2. Preparación del medicamento de Diosmina.
Pesar 1,75g de Diosmina y disolver con 5ml de Metanol, llevar a un balón de 50ml y enrazar
con agua destilada.
CUANTIFICACÓN DE FENOLES
1. Desinfectar el área de trabajo.
2. Prepara los materiales y reactivos de trabajo.
3. Pesar 0,025 g de polvo del material vegetal y traspasar al tubo de vidrio tapa rosca
4. Añadir 5 ml de metanol puro y homogenizar.
5. Con la ayuda de una jeringa de 1 ml y con el filtro de aguja, debemos obtener el
sobrenadante (muestra).
6. En un tubo Eppendorfs protegidos de la luz le adicionamos 50 uL de solución del
medicamento o del extracto vegetal.
7. Luego añadir a cada tubo 200 uL de la dilución de Folin – Ciocalteu (1:4).
8. Adicionamos 50 uL de agua destilada y esperamos de 4 – 5 minutos para que se dé la
reacción.
9. Luego añadir 100 uL de la dilución de carbonato de sodio al 10%.
10. Finalmente preparar un blanco en las mismas proporciones, es decir: 100uL de Agua
destilada, 200uL de Folin diluido (1:4), agitar y esperar 4-5min y luego añadir 1000uL
de la dilución de Carbonato de Sodio 10%.
11. Agitar y esperar 2h para realizar la lectura en el espectrofotómetro a 760nm.
12. Después realizar la primera lectura con el blanco y encerar para realizar las siguientes
lecturas.
Nota: Se realiza el ensayo por triplicado.

7. 7. GRAFICOS
8. CALCULOS
Datos
 Absorbancia Diosmina= 1,469
 y = 3,7223x -0,0037
𝐶𝑜𝑛𝑐. Á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝐺á𝑙𝑖𝑐𝑜 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 + 0,0037
3,7223
Conc.= 1,469 + 0,0037
3,7223
Conc. = 0,3956mg/ml
0,3956 𝑚𝑔
𝑚𝑙
x
5𝑚𝑙
0.125𝑔
= 15,824mg/g Hesperina

8. 9. RESULTADOS
Absorbancias
Ẍ
Absorbancia
Concentració
n mg/ml Fenoles mg EAG/g PS
0,472 0,576 0,565 0,538 0,135 26,92
0,081 0,085 0,084 0,083 0,025 4,93
0,253 0,272 0,275 0,267 0,069 13,80
0,351 0,442 0,499 0,431 0,109 21,74
0,180 0,249 0,256 0,228 0,060 11,94
0,243 0,280 0,283 0,269 0,069 13,90
0,341 0,421 0,450 0,404 0,102 20,45
0,630 0,665 0,669 0,655 0,163 32,58
0,260 0,348 0,348 0,319 0,082 16,32
0,212 0,242 0,242 0,232 0,061 12,12
0,181 0,224 0,227 0,211 0,055 11,09
0,266 0,299 0,287 0,284 0,073 14,64
0,211 0,179 0,171 0,187 0,050 9,94
Concentración
(mg/ml)
Absorbancia
0 0
0 0
0 0
0,025 0,078
0,025 0,085
0,025 0,072
0,050 0,224
0,050 0,220
0,050 0,214
0,100 0,366
0,100 0,371
0,100 0,371
0,150 0,594
0,150 0,597
0,150 0,599
0,200 0,790
0,200 0,804
0,200 0,801
0,250 1,042
0,250 1,057
0,250 0,990
y = 4.093x - 0.0115
R² = 0.9964
-0.2
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3
Absorbancia
Concentración (mg/ml)
Curva de Calibración del Acido Gálico
760nm

9. 10. OBSERVACIONES
Se debe de verificar el extracto o algún otro factor que haya influido en el contenido de
fenoles de la Moringa ya que según los diferentes artículos esta es una planta que contiene
gran contenido de fenoles
11. CONCLUSIONES
Segúnlapractica de fenoleslogramosidentificarque losproductosnaturalessonaquellosque
poseenmasfenolesenel cual se destacapormás cantidadde fenoleseslacúrcumay el que
presentamenoscantidadde fenolesesel código48.
12. RECOMENDACIONES
 Realizar la asepsia de la mesa de trabajo.
 Utilizar el equipo de protección adecuado: bata de laboratorio, guantes, mascarilla,
gorro y zapatones
 Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio.
 Lavar siempre el material con agua destilada antes de utilizar ya que puede contener
sustancias que pueden interferir en su control.
 Tratar de ser precisos en el momento de medir los volúmenes requeridos ya que de
lo contrario tendremos inconvenientes tanto en la práctica como en los resultados.
0.00
5.00
10.00
15.00
20.00
25.00
30.00
35.00
Fenoles mg EAG/g PS

10. 13. CUESTIONARIO
1. ¿Que son los fenoles?
Los fenoles son compuestos orgánicos aromáticos que contienen el grupo hidroxilo como su
grupo funcional. Están presentes en las aguas naturales, como resultado de la contaminación
ambiental y de procesos naturales de descomposición de la materia orgánica. La débil acidez
del grupo fenólico ha determinado que se los agrupe químicamente junto a los ácidos
carboxílicos y a los taninos, conformando así el grupo de los ácidos orgánicos. (Depetris, s.f.)
2. Clasificación de los fenoles naturales
1. Los derivados del ácido gálico (taninos: condensados e hidrolizables)
2. Los flavonoides (catequinas, leucoantocianinas, flavanonas, flavanonoles, flavonas,
antocianinas, flavonoles, chalconas, dihidrochalconas, auronas, isoflavonas). (Toapanta, s.f.)
3. en que productos se encunetra en bajas cantidades los fenoles
 salchichas ahumadas
 vientre de cerdo ahumado
 queso de montaña
 tocino ahumado
 té negro fermentado. (Resúmenes de Salud Pública - Fenol (Phenol), s.f.)
13. BIBLIOGRAFÍA
Chemistry 10. (s.f.). IP acido pirico. Recuperado el 13 de 02 de 2018, de
https://www.coursehero.com/file/p28t2qs/3-Fenoles-Generalidades-y-reacciones-
espec%C3%ADficas-Los-fenoles-son-un-grupo-de/
Depetris, P. (s.f.). Recuperado el 12 de 02 de 2018, de https://www.mendoza-
conicet.gob.ar/portal/enciclopedia/terminos/Fenoles.htm
Resúmenes de Salud Pública - Fenol (Phenol). (s.f.). Recuperado el 13 de 02 de 2018, de
https://www.atsdr.cdc.gov/es/phs/es_phs115.html
Toapanta, P. T. (s.f.). Universidad central del Ecuador. Recuperado el 13 de 02 de 2018, de
https://q-
organicauce.wikispaces.com/file/view/Fenoles+Naturales_Trabajo1_Toapanta+Paola
.pdf
Wikipedia. (31 de Diciembre de 2017). Ácido acetilsalicílico. Obtenido de Ácido
acetilsalicílico: https://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_acetilsalic%C3%ADlico

11. 14. FIRMA DE RESPONSABILIDAD
_________________________
Gabriela Cunalata
0707070272