Este documento detalla los pasos para realizar un análisis de medicamentos para determinar la presencia de fenoles. Incluye la preparación de una curva de calibración con ácido gálico, la preparación de la muestra de Diosmina, y el procedimiento experimental usando espectrofotometría. Los cálculos realizados determinaron que la muestra contenía 15,82 mg de hesperidina por gramo, coincidiendo con la cantidad especificada en el medicamento.

1. UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
ANÁLISIS DE MEDICAMENTOS
En este manual, detallaremos los pasos a seguir para realizar un correcto y exitoso
procedimiento para la determinación de fenoles en los medicamentos.
PASO N°1: realizar investigación acerca de la información del
medicamento a trabajar.
FUNDAMENTO
Los Flavonoides tienen su acción farmacológica
sobre los procesos inflamatorios. Entre ellos
están: la Diosmina que es una Flavona; la
Herperidina que es una Flavonona, componentes
específicos en el tratamiento de los trastornos
perivenosos, proinflamatorios. Los flavonoides
son conocidos como inhibidores de la actividad
de las enzimas involucradas en la transformación
de los ácidos grasos poliinsaturados de la
membrana citoplasmática. Útiles en la estasis venosa. La Hesperidina tiene
propiedades venotónicas, vasculoprotectoras, flevolíticas, y antivaricoso. Su acción
es sobre la microcirculación, aumentan la resistencia y la permeabilidad, y protegen
el endotelio vascular. Además de estas propiedades antiinflamatorias, los
flavonoides tienen también efectos analgésicos y antiagregantes plaquetarios. La

2. diosmina y herperidina, reducen el edema inducido por obstrucción venosa
(Granados, 2003).
PASO N°2: identificar los materiales e insumos, equipos, sustancias y
reactivos y medicamento de muestra con las que se van a trabajar, para
que así, no hayan errores.
MATERIALES E INSUMOS
Materiales Equipos Reactivosy
sustancias
Muestra
Vaso de precipitación
Balón volumétrico
Pipetas
Tubos de ensayo
Micropipetas
Puntasazules y amarillas
para micropipetas
Materiales de protección
personal
Guantes
Mascarilla
Cofia
Mandil
Zapatones
Espectrofotóm
etro
Ácido gálico
Reactivo de
Folin Ciocalteu
20%
Carbonatode
sodio 10%
Metanol
Aguadestilada
Medicamento
Diosmina MK
500mg

3. PASO N°3: repasar el procedimiento a seguir para la realización de la
determinación de fenoles en los medicamentos.
PROCEDIMIENTO
PASO N°4: detallar cada uno de los pasos a trabajar, descritos
anteriormente,paraque no existanequivocaciones durante el proceso,
ya que este debe ser realizado con exactitud.
PREPARACIÓN DE CURVA DE CALIBRACIÓN DE ÁCIDO GÁLICO
1. Preparación de Folin 20% (V/V)
Se toma un volumen de 1ml de Reactivo de Folin 2N y enrazamos con agua destilada
en un balón de 5ml y se homogeniza. (1:5)
2. Preparación de Na2CO3 10%
Se pesan 2,5g de Carbonato de Sodio, disolvemos con agua destilada y se lo lleva a
un balón de 25ml. Enrazar con agua destilada y homogenizar.
3. Preparación de Ácido Gálico 0,5%
Preparación de Curva
de Calibración de
Ácido Gálico
Preparación de Folin
20% (V/V)
Preparación de
Na2CO3 10%
Preparación de Ácido
Gálico 0,5%
Preparación de
Muestra Diosmina
Preparación de las
diluciones de las
solución madre

4. Se pesan 0,125g de Ácido gálico y se disuelven con 2,5ml de Metanol, se lleva a un
balón de 25ml y enrazamos con agua destilada. Homogenizar.
4. Preparación de Muestra Diosmina
Pesar 1,75g de Diosmina y disolver con 5ml de Metanol, llevar a un balón de 50ml y
enrazar con agua destilada.
Peso Promedio = 700mg
700mg Polvo 50mg Hesperidina
X 0,125mg Hesperidina
X= 1750mg Polvo
1g 1000mg
X 1750mg
X= 1,75g
5. Preparación de las diluciones de la solución madre.
De la solución madre de ácido gálico que tiene una concentración de 5mg/ml llevar a
las siguientes concentraciones 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 mg/ml
Cálculos para las diluciones:
C1= Concentración inicial
C2= Concentración final
V1= Volumen inicial
V2= Volumen final
1. Para una concentración 0,05
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,05 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,05 ml = 50uL
Realizar una regla
de 3 multiplicando
el peso promedio
con la
concentración del
p.a. y dividir para
la cantidad de p.a.
del medicamentoRealizar una regla
de 3 para
determinar la
cantidadde muestra
a pesar.
De la solución madre
de ácido gálico,realizar
los cálculos, utilizando
la formula C1V1=C2V2
con los volúmenes y
concentraciones
correspondientes

5. 2. Para una concentración 0,1
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,1 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,1 ml = 100uL
3. Para una concentración 0,2
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,2 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0.2 ml = 200uL
4. Para una concentración 0,3
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,3 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,3 ml = 300uL
5. Para una concentración 0,4
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,4 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,4 ml = 400uL

6. Concentración Volumen Sol. Madre
0.05 50uL
0,1 100uL
0,2 200uL
0,3 300uL
0,4 400uL
Nota: Se toma el volumen requerido de la solución madre y se deposita en un tubo
de ensayo protegido de la luz, luego completar volumen con agua destilada hasta
5ml
Volúmenes que se
deben medir de la
solución madre para
trabajar con las
distintas diluciones.

7. PASO N°5: para la realización de la lectura en el espectrofotómetro es
necesario realizar el siguiente procedimiento:
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Nota: Se realiza el ensayo por triplicado.
En Eppendorfs protegidos de la luz adicionamos 50 uL de solución del
medicamento o de las soluciones diluidas de Ácido Gálico.
Luego añadir a cada tubo 200 uL de la dilución de Folin-Ciocalteau
(1:4)
Adicionar 50 uL de agua destilada
Agitar y esperar 4-5 minutos
Luego añadir a cada tubo 1000 uL de la dilución de Carbonato
de Sodio 10%
Preparar un blanco en las mismas proporciones 100ul de Agua
destilada, 200uL de Folin diluido (1:4), agitar y esperar 4-5min y
luego añadir 1000uL de la dilución de Carbonato de Sodio 10%.
Agitar y esperar 2h para realizar la lectura en el espectrofotómetro a
760nm. Realizando la primera lectura con el blanco y encerar para
realizar las siguientes lecturas.

8. PASON°6: luego de obtener las absorbancias en el espectrofotómetro,
procedemos a realizar los cálculos correspondientes de acuerdo a los
resultados obtenidos.
CÁLCULOS
Absorbancia Diosmina= 1,469
y = 3,7223x -0,0037
𝐶𝑜𝑛𝑐. Á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝐺á𝑙𝑖𝑐𝑜 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 + 0,0037
3,7223
Conc.= 1,469 + 0,0037
3,7223
Conc. = 0,3956mg/ml
0,3956 𝑚𝑔
𝑚𝑙
x
5𝑚𝑙
0.125𝑔
= 15,824mg/g Hesperina
De la Ecuación
de la recta
obtenemos la
siguiente
formula.
Para determinar la
concentración del ácido
gálico, realizamos: la
suma de la absorbancia
con el valor de la
ecuación de la recta
divididoparael valorde x.
El Resultado lo
obtenemos en
mg/ml y luego
convertimos hasta
obtener mg/g

9. De los 700mg que pesa cada tableta de Diosmina se específica como derivados fenolicos la
Hesperina en cantidades de 50mg, de acuerdo con esto en el analisis por
espectrofotometria resulto una concentracion de 15,82mg de Hesperina.
PASO N°7: analizar los resultados calculados con anterioridad y llegar a
una conclusiónsobre los análisis de la determinación de fenoles en este
medicamento.
CONCLUSIÓN