Este documento describe el procedimiento para determinar la cantidad de fenoles, específicamente hesperidina, en un medicamento llamado Diosmina MK 500mg a través de un análisis espectrofotométrico. Se prepara una curva de calibración con ácido gálico y se diluye la muestra de Diosmina en metanol. Luego se cuantifica la absorción espectral y se calcula la concentración de hesperidina, la cual resultó ser 15,824 mg/g, lo que confirma la cantidad declarada en la tableta.

1. UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
ANÁLISIS DE MEDICAMENTOS
DETERMINACIÓN DE FENOLES EN MEDICAMENTOS
FUNDAMENTO
Los Flavonoides tienen su acción farmacológica
sobre los procesos inflamatorios. Entre ellos
están: la Diosmina que es una Flavona; la
Herperidina que es una Flavonona, componentes
específicos en el tratamiento de los trastornos
perivenosos, proinflamatorios. Los flavonoides
son conocidos como inhibidores de la actividad
de las enzimas involucradas en la transformación
de los ácidos grasos poliinsaturados de la
membrana citoplasmática. Útiles en la estasis venosa. La Hesperidina tiene
propiedades venotónicas, vasculoprotectoras, flevolíticas, y antivaricoso. Su acción
es sobre la microcirculación, aumentan la resistencia y la permeabilidad, y protegen
el endotelio vascular. Además de estas propiedades antiinflamatorias, los
flavonoides tienen también efectos analgésicos y antiagregantes plaquetarios. La
diosmina y herperidina, reducen el edema inducido por obstrucción venosa
(Granados, 2003).

2. MATERIALES E INSUMOS
Materiales Equipos Reactivosy
sustancias
Muestra
Vaso de precipitación
Balón volumétrico
Pipetas
Tubos de ensayo
Micropipetas
Puntasazules y amarillas
para micropipetas
Materiales de protección
personal
Guantes
Mascarilla
Cofia
Mandil
Zapatones
Espectrofotóm
etro
Ácido gálico
Reactivo de
Folin Ciocalteu
20%
Carbonatode
sodio 10%
Metanol
Aguadestilada
Medicamento
Diosmina MK
500mg
PROCEDIMIENTO
PREPARACIÓN DE CURVA DE CALIBRACIÓN DE ÁCIDO GÁLICO
1. Preparación de Folin 20% (V/V)
Preparación de Curva
de Calibración de
Ácido Gálico
Preparación de Folin
20% (V/V)
Preparación de
Na2CO3 10%
Preparación de Ácido
Gálico 0,5%
Preparación de
Muestra Diosmina
Preparación de las
diluciones de las
solución madre

3. Se toma un volumen de 1ml de Reactivo de Folin 2N y enrazamos con agua destilada
en un balón de 5ml y se homogeniza. (1:5)
2. Preparación de Na2CO3 10%
Se pesan 2,5g de Carbonato de Sodio, disolvemos con agua destilada y se lo lleva a
un balón de 25ml. Enrazar con agua destilada y homogenizar.
3. Preparación de Ácido Gálico 0,5%
Se pesan 0,125g de Ácido gálico y se disuelven con 2,5ml de Metanol, se lleva a un
balón de 25ml y enrazamos con agua destilada. Homogenizar.
4. Preparación de Muestra Diosmina
Pesar 1,75g de Diosmina y disolver con 5ml de Metanol, llevar a un balón de 50ml y
enrazar con agua destilada.
Peso Promedio = 700mg
700mg Polvo 50mg Hesperidina
X 0,125mg Hesperidina
X= 1750mg Polvo
1g 1000mg
X 1750mg
X= 1,75g
5. Preparación de las diluciones de la solución madre.
De la solución madre de ácido gálico que tiene una concentración de 5mg/ml llevar a
las siguientes concentraciones 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 mg/ml
Cálculos para las diluciones:
C1= Concentración inicial
C2= Concentración final
V1= Volumen inicial
V2= Volumen final

4. 1. Para una concentración 0,05
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,05 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,05 ml = 50uL
2. Para una concentración 0,1
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,1 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,1 ml = 100uL
3. Para una concentración 0,2
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,2 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0.2 ml = 200uL
4. Para una concentración 0,3
C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,3 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,3 ml = 300uL
5. Para una concentración 0,4

5. C1 x V1= C2 x V2
V1= C2 x V2
C1
V1= 0,4 mg/ml x 5ml
5 mg/ml
V1= 0,4 ml = 400uL
Concentración Volumen Sol. Madre
0.05 50uL
0,1 100uL
0,2 200uL
0,3 300uL
0,4 400uL
Nota: Se toma el volumen requerido de la solución madre y se deposita en un tubo
de ensayo protegido de la luz, luego completar volumen con agua destilada hasta
5ml
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

6. Nota: Se realiza el ensayo por triplicado.
CÁLCULOS
Absorbancia Diosmina= 1,469
y = 3,7223x -0,0037
𝐶𝑜𝑛𝑐. Á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝐺á𝑙𝑖𝑐𝑜 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 + 0,0037
3,7223
Conc.= 1,469 + 0,0037
En Eppendorfs protegidos de la luz adicionamos 50 uL de solución del
medicamento o de las soluciones diluidas de Ácido Gálico.
Luego añadir a cada tubo 200 uL de la dilución de Folin-Ciocalteau
(1:4)
Adicionar 50 uL de agua destilada
Agitar y esperar 4-5 minutos
Luego añadir a cada tubo 1000 uL de la dilución de Carbonato
de Sodio 10%
Preparar un blanco en las mismas proporciones 100ul de Agua
destilada, 200uL de Folin diluido (1:4), agitar y esperar 4-5min y
luego añadir 1000uL de la dilución de Carbonato de Sodio 10%.
Agitar y esperar 2h para realizar la lectura en el espectrofotómetro a
760nm. Realizando la primera lectura con el blanco y encerar para
realizar las siguientes lecturas.

7. 3,7223
Conc. = 0,3956mg/ml
0,3956 𝑚𝑔
𝑚𝑙
x
5𝑚𝑙
0.125𝑔
= 15,824mg/g Hesperina
CONCLUSIÓN
De los 700mg que pesa cada tableta de Diosmina se específica como derivados
fenolicos la Hesperina en cantidades de 50mg, de acuerdo con esto en el analisis por
espectrofotometria resulto una concentracion de 15,82mg de Hesperina.