El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) utiliza anticuerpos y antígenos unidos a enzimas para detectar la presencia de antígenos o anticuerpos. Puede usarse para detectar varios patógenos como VIH, hepatitis, virus del papiloma humano y SARS-CoV-2 midiendo las respuestas inmunes a través de las inmunoglobulinas M y G. Existen variaciones de ELISA como directo, indirecto y competitivo con diferentes niveles de sensibilidad y especificidad.

1. ESTRUCTURAS QUE USA LA PRUEBA DE ELISA
ANTICUERP
OS O
ANTÍGENOS
ENZIMAS
unid
os
El ensayo
inmunoabsorbente
ligado a enzimas
(ELISA) utiliza como
sus siglas lo indican
una enzima como
marcador para mediar
la formación de
complejos antígeno-
anticuerpo.

2. ESTRUCTURAS QUE USA LA PRUEBA DE ELISA
ANTICUER
POS
- De origen monoclonal o
policlonal
- Solubles o inmóviles en un
soporte sólido
- Empleados como conjugado
marcados o enzimáticos
- Reaccionan con determinante
antigénico específico de un
antígeno o de un anticuerpo
ligando específico

3. ANTÍGEN
OS
- Solubles o inmóviles en un soporte
sólido
- Se utilizan como conjugado
marcados o enzimáticos
ESTRUCTURAS QUE USA LA PRUEBA DE ELISA

4. ENZIMAS
Y
SUSTRAT
O
- Peroxidasa de rábano y su
sustrato, peróxido de hidrógeno
que en presencia de cromógeno
o-fenilendiamina produce un
color amarillento naranja
medible
- Galactosidasa beta y su sutrato
o-nitrofenil-beta-D-
galactopiranósido que se
transforma en un producto
nitrofenolado amarillento
medible.
- Fosfatasa alcalina y su sustrato p-
nitrofenilfosfato que también se
transforma en nitrofenolato
ESTRUCTURAS QUE USA LA PRUEBA DE ELISA

5. ELISA
DIRECTO
- Es el ensayo Elisa más simple y
rápido de todos, donde un
anticuerpo primario marcado con
una enzima se unirá directamente
al antígeno de interés permitiendo
la detección y/o cuantificación del
mismo
VARIACIONES DE LA PRUEBA DE ELISA

6. ELISA
INDIRECT
O
- Es un ensayo parecido
al ELISA directo pero en dos
pasos, lo que permite amplificar la
señal obtenida. En este caso se
utilizan dos anticuerpos, uno
primario y otro secundario, y es
este último el que irá conjugado a
una enzima.
VARIACIONES DE LA PRUEBA DE ELISA
Imagen obtenida del libro “Kuby Inmunología”

7. ELISA
SÁNDWIC
H
- Se trata de un ensayo muy
empleado en el que se recubre el
pocillo con un primer anticuerpo
anti-antígeno.
- Este ensayo tiene una gran
especificidad y sensibilidad debido
a la amplificación de señal que
permite el segundo anticuerpo.
VARIACIONES DE LA PRUEBA DE ELISA
Imagen obtenida del libro “Kuby Inmunología”

8. ELISA
COMPETI
TIVO
- . En esta técnica, primero se incuba anticuerpo en
solución con una muestra que contiene antígeno. La
mezcla de antígeno-anticuerpo a continuación se añade
a un pozo de micro titulación cubierto con antígeno
- Después de eliminar por lavado el anticuerpo no unido,
puede añadirse un Ab2 conjugado con enzima específico
para el isotopo del Ab1 para determinar la cantidad de
Ab1 unido al pozo
VARIACIONES DE LA PRUEBA DE ELISA
Imagen obtenida del libro “Kuby Inmunología”

9. PRUEBA DE ELISA PARA VIH
Posee una alta sensibilidad,
cercana al 100% y una buena
especificidad (99,5%).
La especificidad depende de
la calidad del antígeno que
contiene la prueba
Este es el componente que
define su genración
Interpretación de las pruebas usadas para
diagnosticar la infección por virus de
inmunodeficiencia humana: Acta Médica
Peruana

10. PRUEBA DE ELISA PARA VIH
Mecanismo con el que
los ELISA capturan los
anticuerpos
Indirecto
Competiti
vo
Sandwich
De
captura
Alta sensibilidad
pero baja
especificidad
Altamente
específicos
Menor
sensibilidad,
pero alta
especificidad
Buena
sensibilidad y
alta
especificidad

11. PRUEBA DE ELISA PARA VIH
Realización detección
de VIH
Primero
Segundo
Tercero
Cuarto
Prueba rápida
Se realiza una
prueba de ELISA
Se realiza una
segunda ELISA
Paciente con
diagnóstico
presuntivo de VIH

12. PRUEBA DE ELISA PARA VIH
Falsos
negativos
Un paciente con VIH tiene
una prueba diagnóstica
negativa
Causas
Periodo de ventana
Terapia inmunosupresora
Disfunción de los linfocitos
B
Estadío de SIDA terminal
Enfermedades crónicas
que produzcan el colapso
inmunológico
Errores de laboratorio

13. PRUEBA DE ELISA PARA VIH
Falsos
positivos
Un individuo no infectado
con VIH tiene pruebas
diagnósticas positivas
Causas
Reacciones cruzadas
Factores dependientes de
laboratorio

14. PRUEBA DE ELISA PARA HEPATITIS

15. PRUEBA DE ELISA PARA HEPATITIS
HbsAG
ELISA
Método
inmunoenzimático directo
tipo sandwich
Fases
Los pozos están cubiertos
con anticuerpos de cobayo
anti-HBsAG
La muestra se incuba en
uno de los pozos
EL material no unido se
elimina por lavado
Se agrega el anticuerpo de
cabra anti-HBs conjugado
con peroxidasa
Se agrega
tetrametilbencidina y
peróxido de hidrógeno
El conjugado no unido se
remueve por lavado

16. Molecular diagnosis of human
papillomavirus in the
development of cervical cancer

17. PRUEBA DE ELISA PARA VIRUS DE PAPILOMA
- Existen reportes que muestran la presencia de
anticuerpos contra las proteínas víricas de la
cápside L1 condiloma acuminado y en LSIL (Lesión
intraepitelial escamoso de bajo grado).
- Los anicuerpos anti-L1 son escasos en HSIL (lesión
intraepitelial de alto grado) y están casi ausentes
en CC (cáncer cervical)
- El desarrollo de virus como partículas (VLP)
demostró una mayor sensibilidad a anticuerpos
anti-VPH.
- Estas VPL se produjeron incialmente a partir de
baculovirus y virus de la vacuna, recientemente un
sistema de expresión de levadura recombinante
impulsado por un fuerte inductor de galactosa se
desarrolló para expresar estos antígenos con éxito.
- Este material ha sido utilizado para el desarrollo
de la nueva vacuna contra el VPH. Es muy
específico, ya que tiene poca reacción cruzada con
los VPH de la misma familia.

18. PRUEBA DE ELISA PARA VIRUS DE PAPILOMA
- Algunos informes utilizaron la proteína E2 para
mostrar que las respuestas de IgG y IgA estaban
elevadas en pacientes con CC.
- Se han encontrado elevadas concentraciones de E4
ORF en lesiones pre cancerosas asociadas con VPH,
debido a esto, se ha sugerido que la E4 puede estar
implicado en la replicación viral activa
- Hay una mayor proporción de anticuerpo anti-E6 y
anti- E7 en pacientes con CC que en pacientes con
lesiones tempranas o sanos

19. PRUEBA DE ELISA PARA EL SARSCOV-2
Es una prueba de laboratorio que puede
identificar el virus que provoca el COVID-19
en muestras de sangre, mediante la
detección de anticuerpos, específicamente
IgG e IgM, a través de la metodología Elisa.
Resultados
IgM positivo: Es probable
que se haya desarrollado
el anticuerpo de la
inmunoglobulina M, lo
que sugiere una infección
primaria. Se recomienda
un PCR para confirmar
IgG positivo: Es probable
que se haya desarrollado
el anticuerpo de la
Inmunoglobulina G, lo
que sugiere una etapa
tardía de infección
primaria, secundaria
temprana o infección
La prueba de Elisa requiere sangre venosa,
es decir de la vena del brazo (así como la
de la mayoría de exámenes de laboratorio).
No es posible realizar la prueba con sangre
del dedo.
https://www.youtube.com/watch?v=VvJnaurmYZI