KKKK

1. DIAGNOSTICO
INMUNOSEROLOGICO
CONSIDERACIONES
PRUEBA DE ELISA

2. METODOLOGIAS DE DIAGNOSTICO
• Pruebas de Tamizaje / Screening
– Empleadas para Screening de Donantes
– Dx. del Status de infección en individuos en una
Población o grupo de riesgo (Pacientes)
• Aglutinaciones / Hemoaglutinaciones
• Enzimo Inmuno Análisis (EIA)
– Características: Procedimientos Simples y
Stantarizados

3. • Pruebas Suplementarias / Confirmatorias
– Distinguen falsos positivos de verdaderos
positivos
– Confirman diagnósticos preliminares, ayudan
en el tratamiento y programas de consejería
• Neutralización de Antígenos
• Inmunofluorescencia, Western Blot
• RIBA, PCR, TMA, Cultivos
– Características: Procedimientos complejos y
caros

4. • Conocimiento del Agente etiológico:
– Características Biológicas y Moleculares
– Interacción inmune Estándar en el
huesped
• Identificación de Proteinas inmunogénicas
de importancia diagnóstica ( Epítopes
antigénicos)
• Respuesta inmune Estándar del infectado
– Perfil serológico
CONSIDERACIONES PARA EL
SCREENING

5. PERFIL SEROLOGICO DE LA INFECCION

6. PERFIL SEROLOGICO TIPICO VHB

8. .
Concentración
relativa
Infección
Meses Años
Semanas
IgM
Respuesta Inmunológica
IgG
Seroconversión
Ag
Días

9. • PRUEBAS DE TAMIZAJE
1. PRUEBAS DE AGLUTINACION
2. PRUEBAS DOT BLOT
3. PRUEBAS INMUNOCROMATOGRAFICAS
4. PRUEBAS ELISA
• PRUEBAS CONFIRMATORIAS
1.INMUNOFLUORESCENCIA
2. INMUNOENSAYO EN LINEA
3. WESTERN BLOT

10. ANTIGENOS
PRIMERA GENERACION : LISADO VIRAL
SEGUNDA GENERACION: ANTIG. RECOMBINANTES
TERCERA GENERACION: PEPTIDOS SINTETICOS
CUARTA GENERACION: AG.REC.
P.SINTET. (Ag, Ab)

11. PRUEBA DE AGLUTINACION
• Son pruebas que en general tienen buena sensibilidad,
aunque su especificidad en algunos casos fue
cuestionada. Estos ensayos incorporan agentes
portadores que son partículas utilizadas para transportar
el antígeno, los más comúnmente utilizados son:
hematíes (hemoaglutinación), partículas de latex
(poliestirene), de gelatina o microesferas. Estas
partículas están en suspensión y recubiertas
(sensibilizadas) con el o los antígenos (recombinantes
y/o sintéticos).

12. PRUEBA DE AGLUTINACION
PRINCIPIO: FORMACION DE COMPLEJOS INMUNES EN LA
SUPERFICIE DE PARTICULAS(SOPORTE SÒLIDO)

13. PRUEBAS DOT BLOT
• Las pruebas para la detección del Agentes. que usan soporte
sólido de papel (nitrocelulosa) se conocen como pruebas de
DOT-BLOT.
• Esto es porque el Ag es absorbido pasivamente al soporte. A
menudo el Ag que se absorbe como una pequeña gota (dot) es
usualmente un Ag recombinante o un péptido sintético. Un
dispositivo plástico sostiene el soporte sólido y contiene
material absorbente debajo del papel, para juntar el suero y los
reactivos después de la adición.
• Las pruebas de Dot-Blot son rápidas y fáciles de realizar, pero
al mismo tiempo son costosas. Muchas producen resultados
en 5 o 10 minutos, algunas en apenas 3 minutos. En general se
utilizan conjugados de anti-inmunoglobulina ligados a una
enzima que se fijan al Ac del paciente. La adición de un
sustrato adecuado produce un color en el papel.

14. VENTAJAS DE PRUEBAS RAPIDAS
• Fácil uso, con entrenamiento mínimo
• Fácil conservación
• No necesidad de equipo
• Toma de muestra utilizando sangre total
• A ser utilizado en sistemas periféricos de salud
• Resultados de 10 a 30 minutos
• Para el diagnostico y estrategia de prevención de
la transmisión vertical de VIH

15. ELISA
(INMUNOENSAYO ENZIMATICO)
PRUEBAS DE MICROELISA
Fase sólida:
Micropozos de poliestireno donde se fijan las moléculas de captura
(antígeno o anticuerpo)

16. • TIPOS DE ELISA
• ELISA INDIRECTO O ANTIGLOBULINA

17. • TIPOS DE ELISA
• ELISA COMPETITIVA
Ag
Ag

18. • TIPOS DE ELISA
• ELISA TIPO SANDWICH

19. • TIPOS DE ELISA
• ELISA DE INMUNOCAPTURA

20. Conjugado
Anticuerpo IgG
Antígeno
recubriendo
el pocillo
Antígeno
Anticuerpo
de captura
Anticuerpo IgM
Bioelisa :
Leyendas

21. Antígeno
Anticuerpo
Ag - Ac
ELISA
Reacción antígeno-anticuerpo

22. Elisa : Reacción muestra - conjugado

23. H2O2
H2O
O2
Tampón sustrato
TMB
Cromógeno
Elisa: Reacción del sustrato

24. Detección de IgG
Fase
Solida
Muestra
Conjugado
TMB

25. Detección de Antígeno
TMB
Fase
Solida
Muestra
Conjugado

26. Detecciónde IgM: Inmunocaptura
TMB
Fase
Solida
Muestra
Conjugado

28. Sensibilidad: Proporción de muestras positivas
correctamente identificadas por una prueba.
* Niveles de detección (ng, UI, etc.)
Parámetros a Valorar en Pruebas ELISA
Especificidad: Proporción de muestras negativas
correctamente identificadas por una prueba
NV
E = * 100
NV+FP
VP
S = * 100
VP+FN

29. Infectados Normales Total
Positiva a b a+b
Negativa c d c+d
Total a+c b+d n
PRUEBA
INDIVIDUOS
NV d
E = * 100 = * 100
NV+FP b+d
Parámetros a Valorar en Pruebas ELISA
VP a
S = * 100 = * 100
VP+FN a+c

30. Infectados Normales Total
Positiva a b a+b
Negativa c d c+d
Total a+c b+d n
PRUEBA
INDIVIDUOS
VP a
VPP = * 100 = * 100
T.P. a+b
Valor Predictivo Positivo: Probabilidad de estar
infectado que tiene el individuo, cuando el
resultado de la prueba es Positivo
Parámetros a Valorar en Pruebas ELISA
La Prevalencia de una Región influye en el VPP.

31. Infectados Normales Total
Positiva a b a+b
Negativa c d c+d
PRUEBA
INDIVIDUOS
VP d
VPN = * 100 = * 100
T.N. c+d
Valor Predictivo Negativo: Probabilidad de no
tener la infección que tiene el individuo,
cuando el resultado de la prueba es Negativo
Parámetros a Valorar en Pruebas ELISA