1. Se ha identificado un nuevo tipo de célula madre muscular, denominada "célula derivada de pericitos", que podría ser útil para el tratamiento de la distrofia muscular. Estas células residen alrededor de los vasos sanguíneos pequeños en el tejido muscular y pueden diferenciarse en fibras musculares.
2. Cuando se inyectaron en ratones modelo de distrofia muscular, las células derivadas de pericitos cruzaron los vasos sanguíneos y se diferenciaron en fibras musculares con alta efici
1. Resúmenes Papers Muscular (6)
1.- Nuevo Tipo de Célula Madre para Posible Tratamiento de MD
Estudios realizados en animales.
investigadores han llamado a las nuevas células “derivadas de pericitos” y están ubicadas
alrededor de los vasos sanguíneos pequeños en el tejido muscular.
Para tratar con éxito la distrofia muscular canina se utilizan los llamados “mesoangioblastos”.
Afirman que las células en el estudio de hoy podrían estar relacionadas con los
mesoangioblastospero no están seguros aún.
Cuando las células derivadas de pericitos tomados de tejido muscular humano saludable se
suministraron a ratones que no tenían la proteína distrofina (la causa de la distrofia muscular de
Duchenne) y que tampoco tenían un sistema inmunológico, mostraron una tasa muy elevada de
maduración para volverse fibras musculares.
Las células derivadas de pericitos demostraron que podían cruzar las paredes de los vasos
sanguíneos hacia el tejido muscular cuando se inyectaban en una arteria IMPORTANTE si las
células se van a suministrar mediante el flujo sanguíneo en las personas.
El uso de las células musculares propias de un paciente, evitaría una reacción inmunológica no
deseada.
“En conclusión”, dijeron los autores del estudio, “hemos demostrado que los pericitos representan
un segundo precursor miogénico [productor de músculo], residente en los músculos del esqueleto
de personas adultas, con potencia miogénica similar, pero distinta, a la de las células satélite.
Debido a estas características, las células derivadas de pericitos forman una población celular ideal
para la terapia celular futura de la distrofia muscular”.
Distrofia Muscular de Duchenne Distrofia muscular infantil más prevalente 1/3500 niños
varones en el mundo. Primeros síntomas entre los 3 y 5 años. No suelen sobrevivir más allá de los
30 años.
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
2. 2.- Los Tipos de Distrofia Muscular y Las Enfermedades Neuromusculares
La distrofia muscular es un grupo de enfermedades hereditarias que se caracterizan por debilidad
y atrofia del tejido muscular, con o sin degeneración del tejido nervioso.
Existen nueve tipos de distrofia muscular y en todos ellos se producen con el tiempo
pérdida de fuerza y discapacidad progresiva y, en ocasiones, deformidades.
Las más conocidas son la de Duchenne (DMD, en inglés) y la de Becker (BMD, en inglés).
(En la tabla a continuación destacado lo mas importante de cada una, en naranjo la de
Duchenne y Becker que si o si hay que saber)
Tipo Edad de aparición Síntomas, índice de progresión y promedio de vida
Los síntomas son casi idénticos a los de la de Duchenne, pero
Adolescencia a la edad adulta
Becker menos graves; progresa más lentamente que la de Duchenne;
temprana
supervivencia hasta la mediana edad.
Los síntomas incluyen debilidad general de los músculos y
Congénita Al nacer posibles deformidades de las articulaciones; la enfermedad
progresa lentamente; vida corta.
Los síntomas incluyen debilidad y atrofia generales de los
músculos; afecta a la pelvis, la parte superior de los brazos y
Duchenne Entre los 2 y los 6 años
las piernas y finalmente a todos los músculos voluntarios; la
supervivencia más allá de los 20 años es poco frecuente.
Los síntomas incluyen debilidad y atrofia de los músculos de las
Distal Entre los 40 y los 60 años manos, los antebrazos y la parte baja de las piernas; la
progresión es lenta; pocas veces conduce a la incapacidad total.
Los síntomas incluyen debilidad y atrofia de los músculos de los
hombros, la parte superior del brazo y la espinilla; son
Emery-Dreifuss Entre la niñez y la pubertad frecuentes las deformidades de las articulaciones; la
progresión es lenta; puede producirse la muerte súbita por
problemas cardiacos.
Los síntomas incluyen debilidad de los músculos faciales y
Entre la niñez a los adultos deformidad y cierto grado de atrofia de los hombros y la parte
Facioescapulohumeral
tempranos superior del brazo; la progresión es lenta, con periodos de
deterioro rápido; el paciente puede vivir varias décadas
3. después de su aparición.
Los síntomas incluyen debilidad y atrofia, que afectan primero
Cintura
Entre el final de la niñez y la a la cintura escapular (los hombros) y pélvica; la progresión es
escapulohumeral o
mediana edad lenta; la muerte suele deberse a complicaciones
pélvica
cardiopulmonares.
Los síntomas incluyen debilidad de todos los grupos
musculares acompañada de retraso en la relajación de los
Miotónica Entre los 20 y los 40 años músculos después de la contracción; afecta primero a la cara,
los pies, las manos y el cuello; la progresión es lenta; a veces se
vive hasta los 50 ó 60 años.
Los síntomas afectan a los músculos de los párpados y de la
garganta causando debilidad de los músculos de la garganta
Oculofaríngea Entre los 40 y los 70 años
que, con el tiempo, produce incapacidad de tragar y
emaciación por falta de alimentos; la progresión es lenta.
¿Qué otras enfermedades neuromusculares existen?
- Atrofias musculares espinales
- Miopatías Inflamatorias
- Enfermedades del nervio periférico
- Enfermedades de la unión Neuromuscular Ej.: Miastenia Gravis.
- Enfermedades musculares metabólicas deficiencias de….
- Otras Miopatías poco comunes.
4. 3. - Finding MyoD with a little help from my friends(Encontrando MyoD con una pequeña ayuda
de mis amigos)
- 2 publicaciones anteriores: el breve tratamiento de células 10T1/2 (una línea de
fibroblastos, en ratones) con un agente desmetilizantede DNA la 5-azacitidinapodía
establemente convertirlas en células adipogénicas, condrogénicas o miogénicas.
La desmetilación de diferentes loci reguladores estaba induciendo
diferentes tipos celulares.
(El autor pensó) que si la conversión miogénica era causada por la desmetilación de un
locus en particular, la transfección de DNA no metilizado en las células 10T1/2 las
convertiría en miocitos incluso en ausencia de un tratamiento con 5-azacitidina.
(La transfección consiste en la introducción de material genético externo en células eucariotas
mediante plásmidos, vectores víricos (en este caso también se habla de transducción) u otras
herramientas para la transferencia.)
Después de 3 años de duro trabajo en el laboratorio, pudo demostrar que la transfección de DNA
no metilizado en las células 10T1/2 podía inducir una transformación miogénica en un rango
consistente con la noción de que un locus había activado el programa de células musculares.
- Dicho locus seguía sin ser identificado, pero llegó a la hipótesis de que un transcrito de
RNA podía ser el factor regulador miogénico.
- La 5-azacitidina podría haber inducido la expresión del factor regulador miogénico en los
mioblastos proliferantes permitiéndoles activar el programa de diferenciación muscular.
- HIPOTESIS: Los mioblastos proliferantes expresan un “gen de determinación” que
mantiene el fenotipo celular.
- Fue estudiado en células musculares y en células ectópicas. En estas ultimas, un cDNA
mostro potencialidad miogénica y se designo con el nombre de “Gen determinante
miogénico número 1” también conocido como MyoD.
Trabajos posteriores establecieron que el MyoD activa la expresión de otros reguladores
musculares como el MEF2 y la miogenina, los que son necesarios para la inducción del
programa de diferenciación celular.
“La posición jerárquica del MyoD como regulador de otros reguladores miogénicos fue clave para
su descubrimiento – afortunadamente para nosotros.” (según el autor del paper).
5. 4. - MakingMusclesGrowby G Protein–Coupled Receptor Signaling (Haciendo crecer músculos
con señalamiento de Receptor ligado a proteína G)
Activación de receptores unidos a proteína G está involucrada en la regulación de muchas
respuestas celulares. Nuevos descubrimientos implican a la subunidad inhibidora
como mediador del crecimiento y la maduración de la miofibra. Operando a través de
múltiples caminos de señalamiento para selectivamente estimular la síntesis proteica o
inhibir el cambio proteico dependiente de citoquina.
Los receptores unidos a proteína G (GPCRs) constituyen la familia más grande de receptores de
membrana y son responsables de transmitir la mayoría de las respuestas celulares de hormonas,
neurotransmisores o iones. Más de la mitad de los componentes farmacológicos apuntan a estos
receptores, acentuando su importancia en condiciones patofisiológicas.
- La proteína G tiene un extremo extracelular N-terminal y un extremo Intracelular C-
terminal.
- La proteína G posee 3 subunidades alfa, beta y gamma.
- En estado inactivo, la alfa se una a la guanina difosfato (GDP) y así a las subunidades beta y
gamma.
- Este estudio identifica a la subunidad G(alfa)i2 como regulador en el crecimiento
y maduración del músculo esquelético.
Factores Catabólicos, Ej.: Glucocorticoides producen atrofia muscular.
Ácidos Lisofosfatídico (LPA) Aumenta tamaño de los miotubos.
La información sostenía que la hipertrofia de los miotubos inducida por la era
mediada por la proteína quinasa C (PKC)
NFAT necesario para la diferenciación de mioblastos a miotubos.
TNF-alfa factor catabólico Atrofia
Los autores especularon que la función de la podría extenderse a regular el proceso de
maduración de los miocitos.
La respuesta hipertrófica de las células musculares puede ser mediada reduciendo la expresión
de genes que codifiquen factores inductores de atrofia.
Antes, se conocía sólo a la Akt con la capacidad de producir hipertrofia en los miotubos por 2
mecanismos: estimulando la síntesis proteica a través de actividad de mTor e inhibiendo la
FoxO para reducir la abundancia de la ubiquitina ligasa E3 previniendo el cambio proteico
miofibrillar. Nueva información sugiere que la también tendría una acción dual al
estimular la síntesis de proteína en un mecanismo independiente de Akt e inhibiendo la
atrofia en respuesta al TNF-alfa.
Es tentador proyectar a la como blanco terapéutico capaz de aumentar la masa muscular o
incluso estimular el crecimiento bajo numerosas condiciones crónicas de desgaste muscular.
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
6. 5. - Pericytes of human skeletalmuscle are myogenic precursorsdistinctfromsatellite cells
(Pericitos del músculo esquelético humano son precursores miogénicos distintos de las células
satélite).
A diferencia de los precursores miogénicos canónicos (células satélite), las células derivadas de
pericitos expresan marcadores miogénicos sólo en miotubos diferenciados, los que se forman
espontáneamente con alta eficiencia. La información recopilada muestra que estos precursores
miogénicos, distintos de células satélite, están asociados a las paredes microvasculares en el
musculo esquelético humano, y pueden representar una correlación de los “mesoangioblastos”
embrionarios presentes luego del nacimiento y pueden ser un prometedor candidato para futuros
protocolos de terapias celulares en pacientes.
Desde un punto de vista estrictamente aplicativo, la población celular ideal debe: Estar presente
en tejidos postnatales accesibles; ser expansibles in vitro; ser fácilmente transductibles con un
factor viral; ser capaz de alcance el musculo esquelético a través de una ruta sistémica y debe ser
capaz de diferenciarse in vivo en células musculares esqueléticas con alta eficacia.
En este estudio se aislaron células que pueden proliferar in vitro, desde tejido intersticial de
musculo esquelético humano normal y distrófico. Las células pueden ser expandidas in vitro por
cerca de 20 poblaciones (hasta números que pueden ser suficientes para el tratamiento de un
paciente pediátrico), transducidos con factores virales e inducidos a diferenciarse en músculo
esquelético.
- Al ser trasplantadas en ratones distróficos inmunodeficientes, ellos dieron lugar a una gran
numero de fibras expresando la distrofina humana, llenando todos los criterios requeridos
para una terapia celular exitosa de la distrofia muscular.
o Inesperadamente las células que crecieron fuera del tejido mostraron ALP y un
número de marcadores de pericitos, y pudieron ser aisladas de los pericitos (las
únicas células ALP+ en el musculo esquelético). A diferencia de los
mesoangioblastos que no presentan marcadores. Esto puede deberse al origen
angioblástico de los mesoangioblastos.
La diferenciación miogénica de las células derivadas de pericitos es muy alta de un 20-40%
en células de diferentes pacientes. Esto es aproximadamente un orden más de magnitud
que lo observado en otros tipos de stemcells incluyendo los mesoangioblastos.
Estas células son muy distintas de las células satélite, por que presentan un numero considerable
de características inequívocas: 1.- tienen diferente nicho anatómico (pericitos bajo la lamina basal
de vaso pequeños y células satélite dentro de la lamina basal de las fibras musculares. 2.- sus
requerimientos de crecimiento difieren. 3. Las células satélite expresan MyoD, Pax7, Myf5, MEF
2C, CD56 y M-cadherina, que no se expresan en las células derivadas de pericitos, en cambio estas
presentan NG2 y ALP que no se expresan en las células satélites (pueden presentar MyoD y Myf5
en diferenciación terminal).
Más allá, las células derivadas de pericitos pueden atravesar las paredes de los vasos –
característica presuntamente ausente en las células satélites.
La extensa, pero no indefinida capacidad de proliferación y la mantención de su cariotipo y
potencialidad miogénica indica que los pericitos adultos de una biopsia pueden generar
7. suficientes células para tratar a un paciente pediátrico con el mínimo riesgo de
transformación maligna.
EN CONCLUSION!!!! : Los pericitos representan un segundo tipo de precursor miogénico,
residente en el musculo esquelético humano, con potencialidad miogénica similar pero
distinto fenotipo que las células satélite. Debido a sus características las células derivadas de
pericitos son una población ideal para el futuro tratamiento de la distrofia muscular.
8. 6.-BMP signallingpermitspopulationexpansionbypreventingpremature myogenicdifferentiation
inmusclesatellite cells(El señalamiento de BMP permite la expansión de la población,previniendo
la diferenciación miogénica prematura en las células satélite).
Las células satélite son las stem cells residentes del musculo esquelético adulto. Estas células se
ubican en la superficie de las miofibras. En respuesta a la homeostasis rutinaria de la miofibra o
hipertrofia, o en demandas esporádicas de reparación muscular, la células satélite son activadas
para generar mioblastos que proliferan y eventualmente siguen una diferenciación miogénica para
proveer nuevos mio núcleos. Las células satélite también se auto renuevan, manteniendo una
población inactiva e indiferenciada de precursores disponible para responder a repetidas
demandas.
La función es controlada por varios caminos reguladores, entre otros el señalamiento Notch/Delta
y Wnt. Otro camino importante involucra a la BMP (proteína morfogénica del hueso). Aunque es
crucial para la formación y reparación de hueso y cartílago, la BMP también inhibe la
diferenciación miogénica para prevenir la mio génesis ectópica en la placa del mesodermo
lateral.
La BMP no solo impide la diferenciación miogénica, sino que también induce la expresión génica
osteoblástica y diferenciación en el linaje osteoblástico.
Inyección intramuscular de ciertas BMP (BMP2 y BMP4) pueden llevar al a formación ectópica de
hueso in vivo.
*Fibrodisplasia osificante progresiva (FOP) Raro desorden de malformaciones esqueléticas y
progresiva osificación extra-esquelética en músculos.
Resultados:
Las proteínas del camino de la BMP están presentes en células satélites activadas y
proliferantes.
BMP regula el balance entre proliferación y diferenciación en células satélite.
BMP4 inhibe diferenciación y estimula la proliferación de células satélite.
Inhibición de BMP Promueve diferenciación miogénica en cél. Satélite.
BMP opera a través de BMPR-1ª para prevenir diferenciación precoz.
Bloqueo de señalamiento intracelular de BMP promueve la diferenciación miogénica.
Señalamiento BMP regula la habilidad de MyoD de activar sus blancos de transcripción.
Id1 Inhibidor de diferenciación que regula los factores reguladores
miogénicos. Es un blanco de las BMP y un controlador negativo de MyoD y
miogenina.
El señalamiento de BMP en células satélite actúa para limitar la activación
transcripcional de genes controlados por MyoD y aumentados durante la
diferenciación.
Noggin antagoniza las BMP para facilitar la diferenciación miogénica.
El señalamiento de BMP está operativo durante la regeneración in vivo.
9. Discusión:
BMP4 exógeno inhibe diferenciación y estimula proliferación.
Bloqueo interacción BMP con sus receptores. Inducen rápida
Disminución en la regulación de BMPR-1A (receptor de BMP – 1A) diferenciación.
Perturbar la mediación de señales intracelulares de BMP.
Inicialmente, el señalamiento de BMP sirve para permitir la expansión del pool de células satélite.
La fuente de BMP que actúa en células satélites in vivo sigue falta de ser se determinada, pero
células miogénicas pueden expresar y secretar BMP4, con más altos niveles producidos por
mioblastos de musculo distrófico.
SNC microglia/macrófagos producen BMP después de daños en SNC.
Aunque exposición de células miogénicas a BMP puede inducir expresión de varios genes
osteogénicos; la exposición leve de células satélite a BMP4, como en el caso de
regeneración/reparación de musculo in vivo, no compromete su identidad miogénica.
En células satélite, inhibiendo el señalamiento de BMP, niveles reducidos de Id1 promueven la
diferenciación y aumentan la actividad promotora de la CKM (musculo creatino quinasa).
Antagonismo de señalamiento por Noggin es empleado durante el desarrollo para proteger células
pre-miogénicas, y expansión del dominio de expresión de Noggin promueve miogénesis ectópica.
Esta interferencia mediada por Noggin también se ha encontrado en la miogénesis adulta.
Como Noggin es una molécula de señalamiento secretada, también puede actuar de forma
paracrina para reducir el señalamiento de BMP en células proliferantes para potenciar y aumentar
una diferenciación duradera.
Inhibición de señalamiento BMP durante la regeneración muscular resulta en miofibras
regeneradas más pequeñas.
EN CONCLUSION:
El señalamiento de BMP es parte de un programa que regula la rutinaria función de las células
satélite. BMP estimula proliferación y previene diferenciación precoz para permitir la amplificación
de mioblastos derivados de células satélite. Noggin es entonces regulado así como la progenie de
la célula satélite es diferenciada, para antagonizar el señalamiento BMP y facilitar una
diferenciación coordinada.