Seminario botrytis cinerea

Botrytis
cinerea
Ing. Agr.:
Vázquez Chacón José Yvanosky
Prof.: MsC Ing. Agr. Marlyn Escalante
Materia: Protección de Cultivos I
UNET 2014-A
UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL DEL TÁCHIRA
VICERRECTORADO ACADÉMICO
DECANATO DE POSTGRADO
MAESTRÍA EN AGRONOMÍA PRODUCCIÓN VEGETAL

Nombre Actual: (1)
Botrytis cinerea Pers., Ann. Bot. (Usteri) 1: 32 (1794)
Posición en la clasificación:
Sclerotiniaceae, Helotiales, Leotiomycetidae, Leotiomycetes, Ascomycota, Fungi
Nombre Valido: (2)
Botrytis cinerea Pers. 1794
Fungi
Filo: Ascomycota
Clase: Leotiomycetes
Orden: Helotiales
Familia: Sclerotiniaceae
Género: Botrytis
(1): www.indexfungorum.org / (2): http://www.catalogueoflife.org/
CLASIFICACIÓN

Primer reporte en Venezuela de Botrytis cinerea
causando quema foliar en Lisianto (Eustoma
grandiflorum)
Domínguez, I.; Cedeño, L.; Briceño, A.; Pino, H.; Quintero, K.; Rodríguez, L. Revista Forestal
Venezolana (Venezuela). 2008. v. 52(2) p.173-176.

• El Lisianto (Eustoma grandiflorum)
especies ornamentales de gran
potencial comercial en Venezuela,
especialmente en los Andes.
• Presencia de enfermedad que puede
convertirse en importante limitante
para la explotación exitosa de ésta
planta ornamental.
• Junio 2006, cultivo en invernadero
en el sector El Morro y La Pedregosa
del Estado Mérida, presento
manchas y quema foliar, pudrición
en botones florales, flores, tallos y
cuello en un 90% del cultivo a 2
meses dds.
• Condiciones de alta humedad y baja
temperatura.
• Objetivo: Identificar el agente
causal de la enfermedad y evaluar la
patogenicidad del microorganismo en
plantas sanas de Lisianto.
Dominguez, Ilka et al. Primer reporte en Venezuela de Botrytis cinerea causando quema foliar en Lisianto (Eustoma
grandiflorum). Rev. Forest.Venez [online]. 2008, vol.52, n.2, pp. 173-176. ISSN 0556-6606.
INTRODUCCIÓN

MATERIALES Y
MÉTODOS1.- Aislamiento e identificación del patógeno
•Aislamiento a partir de plantas sintomáticas de Lisianthus.
•Se aislaron cortes de las lesiones y se sembraron asépticamente en placas de agua
agar 2% (Incubación por 15 días a 22ºC)
•Para la identificación se sembraron colonias en placas de PDA y APCA para
promover la formación de estructuras reproductivas y producir el inoculo para las
pruebas de patogenicidad.
•La identidad del patógeno se determinó comparando las características
morfométricas de las estructuras reproductivas con las reportadas en la literatura
especializada.
2.- Pruebas de Patogenicidad
•El inoculo se produjo en placas de APCA y fue aplicado con una asperjadora
manual.
•Selección de 18 plantas de lisianto de 90 días de edad., inoculando 12 plantas y 6
plantas testigo asperjadas sólo con ADE.
•Las plantas fueron cubiertas con bolsas plásticas transparentes e incubadas en
condiciones de laboratorio por 15d a 22ºC.
•Posteriormente las plantas fueron transferidas al invernadero con temperatura
promedio de 30 ºC.
•Las bolsas se retiraron a los 7d después de la inoculación (ddi) y a partir de esa
fecha las plantas se examinaron diariamente para registrar la evolución de la
enfermedad.

RESULTADOS Y
DISCUSIÓN1.- Aislamiento del Patógeno
•Los aislamientos sub-cultivados en PDA y APCA desarrollaron
colonias fúngicas idénticas, que a los 16d tenían abundante micelio
de aspecto uniforme, denso y de color blanco grisáceo, producción
de conidios ovoides, elipsoidales y hialinos en conidióforos erectos,
septados, dispuestos en grupos, con escasa o ninguna
ramificación.
•Sobre la base de la morfometría de conidios y conidioforos, el
hongo se identificó como B. cinerea anamorfo de Botryotinia
fuckeliana, causante de la enfermedad “Moho Gris” en una amplia
diversidad de plantas ornamentales y hortalizas.
2.- Prueba de Patogenicidad
•A los 7ddi, el 30% de las plantas infectadas artificialmente,
mostraban síntomas de la enfermedad, presentando una necrosis
foliar de aspecto húmedo en hojas y flores y momificación en
botones florales y a los 35ddi, el 100% de las plantas infectadas
tenían síntomas similares a los apreciados en hojas, tallos, cuello,
flores y botones florales de las plantas infectadas naturalmente.
•Al principio los tejidos infectados presentaban apariencia acuosa y
consistencia blanda, pero conforme la infección avanzaba, las
áreas afectadas adquirieron una coloración entre bronce y café
oscuro y consistencia esponjosa. Se desarrollaron masas de
micelio de color gris sobre los tejidos atacados.
•Las plantas testigos se mantuvieron sanas hasta el final de la
prueba.

CONCLUSIONES
• B. cinerea se reporta como el causante de la quema foliar que en el
año 2006 destruyó lisiantos cultivados bajo invernadero en las
localidades de Plan del Morro y La Pedregosa del estado Mérida.
• El hongo B. cinerea es un fitopatógeno ampliamente reconocido y
estudiado que infecta una amplia variedad de plantas y que tiene la
habilidad de hacer uso de diferentes mecanismos de infección. Puede
atacar durante todos los estados de desarrollo del cultivo hospedante
e infectar cualquiera de sus partes.
• A causa de la considerable incidencia del patógeno y las
repercusiones económicas que tiene en cultivos de destacada
importancia económica, resulta imprescindible la ejecución de
estudios sobre la biología de B. cinerea, interacciones en las que
participa y los posibles métodos de control.

Evaluación rápida de extractos vegetales y aceites
esenciales de actividad antifúngica contra Botrytis cinerea
Wilson, C. L., Solar, J. M., El Ghaouth, A., and Wisniewski, M. E. Plant Disease (Impact Factor: 2.74).
02/1997; 81(2):204-210.

INTRODUCCIÓN
• Ensayos han determinado la presencia de
residuos de pesticidas en alimentos. Así mismo,
los fungicidas reportan mayor riesgo carcinógeno
que los insecticidas y herbicidas juntos.
• Resistencia de los patógenos a los fungicidas ha
demostrado su ineficiencia, creando la necesidad
de nuevos modos alternativos de acción.
• Se requieren fungicidas naturales y sintéticos
seguros para los seres humanos y el medio
ambiente
• Los extractos de plantas y aceites esenciales
muestran actividad antifúngica contra una amplia
gama de hongos.
• Método de placas de microtitulación han
demostrado ser útiles para detección rápida de
compuestos bioactivos.
• Objetivo: Evaluar un ensayo de placa de
microtitulación con 345 extractos de plantas y 49
aceites esenciales como alternativas a los
fungicidas sintéticos para el control de Botrytis
cinerea.
Wilson, C. L., Solar, J. M., El Ghaouth, A., and Wisniewski, M. E. 1997. Rapid evaluation of plant extracts and essential oils for
antifungal activity against Botrytis cinerea. Plant Dis. 81:204-210.

MATERIALES Y
MÉTODOS
1.- Método de Extracción de la Planta:
•Recolección de material vegetal fresco y refrigeración (mínimo de 12
horas a -20 ° C). Posterior descongelación 20 min.
•La congelación y descongelación fractura las células vegetales y los
fluidos celulares de las plantas se recogen en la bolsa fuera del tejido.
•Extracción y filtración (filtro 0,22 µm) de líquido.
•Preparación de la muestra (10%) 50 ml del extracto estéril + 450 ml de
una suspensión de esporas B. cinerea (1x105
conidios por ml) en caldo de
extracto de malta estéril.
2.- Preparación de las placas de multi-well
•50 ml de la mezcla de extracto de la planta y la suspensión de esporas se
pipetearon en cada recipiente multi-well en las filas de microtitulación de
placas múltiples de 96 orificios.
•Se deja una fila en blanco (control)
•Cada bandeja se sella con cera dental para prevenir contaminación
cruzada.
•Lecturas de densidad óptica por absorbancia de las placas con el lector
SLT Labinstrument. Los datos se almacenan en el software desarrollado.
•Incubación por 24h (24 ºC) se mide la densidad del crecimiento fúngico.
•Instrumento conectado a sistema informático para determinar la
densidad óptica por absorbancia (filtro de 492-mm), permite analizar las
diferencias de lecturas.

MATERIALES Y
MÉTODOS

MATERIALES Y
MÉTODOS
3.- Funcionamiento del lector de las placas de
microtitulación multi-well:
•Software desarrollado en Basic para analizar las lecturas.
•Al ejecutar el programa se comprueba material instalado
en el lector y muestra la información en la terminal de
computadora.
•El programa solicita al usuario para nombres de archivo e
indica cuándo las placas deben ser cambiadas.
•El software resta la diferencia de densidad óptica entre
las placas.
•Ambos métodos analizan 10 tratamientos con ocho
réplicas y el promedio de los datos para cada tratamiento.
•Una vez escaneada, los datos se colocan en una archivo
de datos
•Lecturas de densidad fueron hechas después de 24 h, y
observaciones directas de germinación de las esporas se
hicieron con un microscopio (40x) de luz invertida
después de 12 y 48 h.
•Se realizaron comparaciones de densidad óptica y
crecimiento de esporas en la muestra a las 12 y 48 h.

MATERIALES Y
MÉTODOS
4.- Evaluación de los aceites esenciales de
plantas:
•Sobre discos de papel de filtro (8 mm) se
pipetearon los aceites esenciales, los cuales fueron
colocados dentro de los multi-well, sellados con
cera dental.
•Inoculación de los multi-well con esporas de B.
cinerea.
•Las esporas fueron germinadas a 24°C y se
observaron después de 24 y 40 h.
•Los resultados fueron registran como la
germinación de esporas (+) o no germinación de
las esporas (-).
5.- Análisis de Componentes de Aceites
Esenciales:
•Los componentes químicos de los aceites
esenciales se determinaron con un Cromatógrafo
de Gas HP Series II.

RESULTADOS
Extractos de plantas.
•Los extractos de plantas que muestran la mayor
actividad antifúngica son los de especies de Allium y
Capsicum.
Aceites esenciales.
•Palmarosa (Cymbopogon martini), tomillo rojo
(Thymus zygis), clavos de olor (Eugenia
Caryophyllata) y canela (Cinnamomum zeylanicum)
reportaron aceites esenciales con mayor poder de
inhibición de la germinación de esporas de B.
cinérea, notable actividad antifúngica.
Componentes del aceite esencial.
•Los componentes más frecuentes en los aceites
esenciales que muestran alta actividad antifúngica
fueron: D-limoneno, cineol; β-mirceno; α-pineno, β-
pineno; y alcanfor.

DISCUSIÓN
• La mayoría de las plantas que muestran actividad antifúngica entre los 345
extractos de plantas probados eran especies de Allium o Capsicum.
• Diversos aceites esenciales han sido evaluados reportando excelente
actividad fungitóxica, sin embargo, no se han desarrollado productos para
tratamientos postcosecha, ya que la industria encuentra más fácil patentar
y proteger compuestos sintéticos, que comercializar productos naturales.
• Diversos fungicidas derivados de plantas naturales proporcionan una amplia
variedad de compuestos como alternativa a los fungicidas sintéticos, tanto
como fumigantes y pesticidas como de contacto.

Supresión del Tizón de Botrytis en Begonia por
Trichoderma hamatum 382 en una mezcla de turba y
compost modificado para macetas
Horst, L. E., Locke, J., Krause, C. R., McMahon, R. W., Madden, L. V., and Hoitink, H. A. J.
2005. Suppression of Botrytis blight of begonia by Trichoderma hamatum 382 in peat and
compost-amended potting mixes. Plant Dis. 89:1195-1200.

INTRODUCCIÓN
• El tizón causado por Botrytis cinerea L. enfermedad de
importancia económica en cultivos de invernadero como las
begonias, tanto de flor como de hoja.
• Enfermedad distribuida ampliamente en viveros en condiciones
de alta humedad y poca luz.
• Botrytis cinerea ha desarrollado resistencia a varios fungicidas,
dependiendo de practicas culturales y control de humedad.
• Se trabaja en Biocontrol con hongos de la rizosfera como
Trichoderma spp., propiciando un efecto sistémico de control
de patógenos, a través de la Inducción de Resistencia
Sistémica (IRS).
• Aislamientos de Trichoderma hamatum T382, son habitantes
naturales de corteza, humus, compost e ingredientes usados
en macetas para ornamentales.
• Objetivo: (1) Inoculación de T382 en mezcla de turba y
mezcla de compost para reducir severidad del tizón en
begonia. (2) Determinar la eficacia del T832 en el control del
tizón en las mezcla de turba y compost. (3) Determinar el
efecto sistémico inducido por T382 en la naturaleza.
Horst, L. E., Locke, J., Krause, C. R., McMahon, R. W., Madden, L. V., and Hoitink, H. A. J. 2005. Suppression of Botrytis blight
of begonia by Trichoderma hamatum 382 in peat and compost-amended potting mixes. Plant Dis. 89:1195-1200.

MATERIALES Y
MÉTODOS
1.- Preparación de la mezcla para macetas:
•Mezcla de Turba: turba de fibra H2-3 con perlita
hortícola gruesa relación 6:4, fertilización inicial con
SFT y corrección de pH con dolomita y cal.
•Mezcla de compost: mezcla de turba más estiércol
compostado de vacuno, relación 6:3:1, más
fertilizante y enmienda.
2.- Inoculación de Trichoderma hamatum T382:
•Adición de polvo granular seco con preparación
conidial de T382 a una tasa de 120 gr/m3
.
•Mezcla control sin inoculación.
•Incubación a 25ºC por 7 días antes de la siembra.
•Identificación de los tratamientos, muestreo a los 10
días de la incubación a 24ºC para identificar las
colonias de T382, verificando a través de microscopia
de luz.

MATERIALES Y
MÉTODOS
3.- Bioensayo con tizón causado por Botrytis:
•Estudio aleatorio con diseño en bloques al azar con dos
factores: mezclas de sustrato y tratamientos.
•Estacas enraizadas de Begonia hiemalis cv Bárbara,
plantadas en macetas de 1500 cc, incubadas en invernadero
a 17-25 ºC y 40-60% HR.
•Ferti-irrigación semanal.
•Tratamiento incluye una fumigación semanal con
Clorotalonil.
•A las 3 semanas del trasplante las plántulas se inocularon
con conidias de Botrytis cinérea, a partir de inoculo aislado
en laboratorio.
•Determinación de severidad del patógeno a los 7 días, y
evaluaciones cada 3 días por 56 dds.
•Se evaluó presencia de síntomas en la planta en porcentaje.
•Verificación del daño causado por Botrytis por medio de
ensayos de siembra en DPA identificando el patógeno por
microscopia.

MATERIALES Y
MÉTODOS
4.- Valoración comercial de las plantas
e incremento de peso:
•Se evaluaron las plantas en base a
numero de floración, tallos, numero de
flores abiertas y porcentaje de la superficie
de la planta con síntomas de tizón.
•Determinación de peso seco de la parte
aérea de la planta, incluyendo tallo, hojas y
flores. 10 días a 70 ºC.
5.- Análisis de los datos:
•Determinación del área bajo la curva de
progreso de la enfermedad (AUDPC) para
cada tratamiento.
•Análisis de varianza (ANOVA)
•Un valor de p=0,05 se utilizó para todas
las comparaciones.

RESULTADOS
• En los tres experimentos, durante la primera semana después de la inoculación
con B. cinerea, se desarrollan los síntomas del tizón en el follaje begonias.
• El análisis de ANOVA indica un efecto significativo de la interacción de la mezcla
y tratamientos por macetas (Control, fungicida, o T382).
• En los tres experimentos, la gravedad del tizón por Botrytis en la mezcla de
turba fue mucho mayor que la observada en la mezcla de compost-modificada.
• La enmienda de la mezcla de turba con compost disminuyó significativamente
(P=0,05) la severidad general del tizón, comparado con el tratamiento de control
de mezcla de turba.
• La enmienda de compost también aumentó significativamente (P=0,05) el
incremento de peso seco y la posibilidad de venta.

DISCUSIÓN
• La inoculación del T382 en la mezcla de turba proporciona un
control del tizón, comparable con la aplicación en aerosol del
fungicida a base del Clorotalonil.
• El control de Botrytis con T382 confirma informes anterior sobre
control sistémico de esta enfermedad por Trichoderma.
• El efecto supresor de la mezcla de compost contra el tizón de
Botrytis en comparación con la mezcla de turba es inusual porque el
compost normalmente no inducen resistencia sistémica en plantas
sin inoculación con un agente de control biológico capaz de inducir
este efecto.
• Los factores que contribuyen a potenciar la colonización natural de
compost después de la inoculación incluyen temperaturas de
proceso durante el compostaje y curado, los factores ambientales, y
los materiales de reciclaje usados en el compost.
• En conclusión, las oportunidades para la colonización natural de
compost por parte de agentes de control biológico-ISR activa y en
condiciones comerciales son limitadas. Por lo tanto, con el fin
disponer de compost a escala comercial hoy en día para inducir
resistencia sistémica en plantas en macetas, se tendría que inocular
con agentes de biocontrol tal como T382.

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