1. EFECTOS DEL PESTICIDA FLUTRIAFOL SOBRE LA LIBERACION IN VIVO DE DOPAMINA EN EL NÚCLEO ESTRIADO DE RATAS. UN ESTUDIO MEDIANTE MICRODIALISIS CEREBRAL. Profa. Dra. Lilian Rosana Ferreira Faro

6. CLASIFICACIÓN DE LOS PESTICIDAS A. SEGUN EL TIPO DE ORGANISMO QUE COMBATEN. B. SEGUN SU FAMILIA QUIMICA. C. SEGUN SU TOXICIDAD AGUDA.

8. En cuanto al grupo químico Grupo Características químicas Organofosforados Compuestos orgánicos devivados del ácido fosfórico, tiofosfórico o ditofosfórico. Ex.: paration, malation... Carbamatos Ésteres derivados de los ácidos n-metil o dimetil carbámico. Ex.: carbaril, furadan. Organoclorados Compuestos a base de carbono, con radicales de cloro. Son derivados del ciclobenzeno, ciclohexano o ciclodieno. Ex.: DDT, lindano, endosulfan Ditiocarbamatos Carbamatos que contienen, cuasi siempre, un metal en su estructura química. Ex.: maneb, zineb, mancozeb. Dipiridilos Herbicidas sólidos, insípidos e inodoros muy solubles en agua. Ex.: paraquat Piretroides Compuestos sintéticos que presentan estructuras parecidas a la piretrina, sustancia existente en las flores del crisantemo. Ex.: aletrina, dismetrina, Neonicotinoides Compuestos que presentan estructura química parecida a la nicotina, con efecto biológico similar a esta. Ex.: Tiametoxam.

10. CLASIFICACION DE LOS PESTICIDAS Insecticidas Fungicidas Organoclorados Organoclorados Organofosforados Organo mercuriais Carbamatos Triazoles Piretroides Ditiocarbamatos Herbicidas Raticidas Bipiridilos Dicumarínicos Organoclorados Triazinas Acaricidas / Sarnicidas Piretroides

11. Toxicidad de los pesticidas

13. Toxicidad de los pesticidas Organofosforados y Carbamatos Muy tóxicos, usados principalmente como insecticidas. Colinesterasas (ChEs) Organofosforados Carbamatos Irreversible Reversible Alteración Colinérgica (Taylor, 1985 )

14. Principales síntomas de la intoxicación por Organofosforados y Carbamatos Cansacio Dolor de cabeza Mareos Sudoresis Visión borrosa Vómito Calambres Dolor de estómago

16. EXPOSICION HUMANA Y EFECTOS TOXICOS Excitabilidad; Vertigo; Dolor de cabeza; Mareo, Vómito y Diarrea; Parestesia; Ataxia; EFECTOS AGUDOS Sudoresis; Constricción de la Pupila; Salivación; Latidos Cardiacos alterados; Convulsión; Broncoespasmo; Coma. Alavanja, 2004 Polineuropatia periférica;

17. EFECTOS CRONICOS Alteraciones de Humor; Desordenes Afectivas; Déficits en actividades neurocomportamentales; Alteraciones en la función sensorial; Alteración en la función motora; Enfermedad de Parkinson. Enfermedad de Alzheimer; Depresión; Esquizofrenia; ? Disminución de la Cognición; Alavanja, 2004 EXPOSICION HUMANA Y EFECTOS TOXICOS

19. Neurotransmisión dopaminérgica Caudado-Putamen Córtex Pré-Frontal Núcleo Acumbens Tubérculo Olfatório

20. Haz prosencefálico medial Amígdala Substância Negra Hipo-campo Núcleo Caudado Putamen Giro Cingulado Núcleo Accumbens Hipotálamo

21. FISIOLOGIA DE LA TERMINAL DOPAMINERGICA DOPA DA MAO 3MT HVA MAO DOPAC DOPAC extracelular HVA COMT COMT Tyr Compartimento Citoplasmático

22. CLASSIFICACION DE LOS PESTICIDAS Insecticidas Fungicidas Organoclorados Organoclorados Organofosforados Organo mercuriais Carbamatos Triazoles Piretróides Ditiocarbamatos Herbicidas Raticidas Bipiridilos Dicumarínicos Organoclorados Triazinas Acaricidas / Sarnicidas Piretroides

23. TRIAZOLES FLUTRIAFOL TRIADIMEFON VORICONAZOL FLUCONAZOL CLOTRIMAZOL TEBUCONAZOL

24. EFECTOS NEUROTOXICOS DE LA EXPOSICION A LOS TRIAZOLES TRIADIMEFON TEBUCONAZOL FLUTRIAFOL RATAS HIPERACTIVIDAD; COMPORTAMIENTOS ESTERIOTIPADOS; AUTO-MUTILACION. DÉFICIT DE APRENDIZAJE (PERDIDA DE CÉLULAS HIPOCAMPALES) FASE EMBRIONARIA ? Crofton, 1996; Moser, 2001

25. OBJETIVOS DE ESTE TRABAJO Estudiar los efectos de la administración del pesticida flutriafol sobre la liberación in vivo de dopamina en el núcleo estriado de ratas utilizando la técnica de Microdialisis Cerebral acoplada a la Cromatografia Líquida de Alta Eficacia (HPLC) con detección electroquímica.

26. Materiales y Métodos Microdialisis cerebral Cromatografia Líquida de Alta Eficacia (HPLC)

27. Microdialisis Local de implantación de la sonda Proceso de microdialisis

28. Sonda de microdialisis

29. HPLC

30. Sistema de microdialisis y HPLC

31. A - DOPAC B - Dopamina C - 5-HIA D - HVA Valores basales DA = 0.41  0.19 ng/ 20 min

32. Protocolo de administración in situ de flutriafol 20 min Medio Ringer Flutriafol Medio Ringer Medio Ringer 60 min 60 min 60 min 60 min Flutriafol 1 mM 6,6 mM 12 mM

34. POSIBLE MECANISMO DE ACCION DEL FLUTRIAFOL PARA INDUCIR LA LIBERACION DE DOPAMINA HIPÓTESIS: DOPA DA Tyr 1 - Aumento exocitótico de la liberación de DA Flutriafol

35. MECANISMO DE ACCION DEL FLUTRIAFOL PARA INDUCIR LA LIBERACION DE DOPAMINA HIPÓTESIS: 2 – Alteración de la actividad del DAT DOPA DA Tyr Flutriafol x

37. DOPA DA Tyr P.A. Na+ Ca ++ Ca ++ Administración de medio libre de calcio o de sodio

38. Medio Ringer sin Calcio o sin sodio CARACTERIZACION DE LA LIBERACION ESTRIATAL DE DOPAMINA 20 min Medio Ringer Sin calcio Sin sodio Medio Ringer 60 min 60 min 60 min 60 min 6,6 mM Flutriafol + Ringer sin Calcio

39. S/ Ca++ 92%

40. S/ Na+ 70%

41. DOPA DA Tyr P.A. Na+ TTX X Administración de TTX

42. Animales tratados con 10 µM TTX 20 min Medio Ringer Medio Ringer com TTX 6,6 mM Flutriafol + TTX Medio Ringer 60 min 60 min 60 min 60 min

43. TTX 73%

44. DOPA DA Tyr RESERPINA DA x Administración de Reserpina

45. Animales tratados con 10 mg/Kg i.p. de Reserpina 20 min 6,6 mM Flutriafol Medio Ringer 80 min 60 min 60 min 60 min Reserpina i.p. Medio Ringer

46. RESP. 86%

47. DOPA DA Tyr NOMIFENSINA x Administración de Nomifensina

48. Tratamiento con 20 µM Nomifensina y 6,6 mM de Flutriafol 20 min 20 µM Nomifensina + 6,6 mM Flutriafol Meio Ringer 60 min 60 min Medio Ringer 60 min

49. NOM

50. DOPA DA Tyr FLUTRIAFOL Na + Ca ++ TTX

51. DOPA DA Tyr FLUTRIAFOL Pré-tratamento RESERPINA 10mg/Kg

52. DOPA DA Tyr NOMIFENSINA FLUTRIAFOL