La práctica busca diferenciar cepas patógenas y no patógenas de estafilococos mediante pruebas como tinción de Gram, catalasa, coagulasa, fermentación de manitol e hidrólisis de gelatina. Se utilizan medios de cultivo como caldos y agar para aislar colonias y observar sus características a través de microscopio. El objetivo es identificar especies como S. aureus y S. epidermidis.

1. UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA
CARRERA DE MEDICO CIRUJANO
MICROBIOLOGIA LABORATORIO
PRACTICA #2: DIFERENCIACION DE CEPAS DE ESTAFILOCOCOS PATOGENOS
DE NO PATOGENOS
JNJNJNJNJNKJKKNKJNJKNJKNJKNK

2. (+)S.aureus
(+) *Staphylococos
*Micrococous *Bacilos
*Listeria
monocytogenes
(+) *Streptococos
*Staphylococos
*Neumococos
*Planococos
Tinción de
Gram
(-) *Shigella
*Salmonella
*E. coli
*Klebsiella
*Yersenia
*******
Catalasa
(-)*Streptococos
*Clostridium
*Terysipelothrix
*Corynebacterium
pyogenes
Coagulasa
S. epidermidis
S.saprophiticus
S. haemolyticus

3. Características generales
•
•
•
•
Son inmóviles.
Carecen de esporas.
Son Gram positivas.
Su metabolismo es de
tipo fermentativo
• Son aerobios y
anaerobios facultativos
Bernard D. Davis., [et al.] (1999) Tratado de microbiología 4a. ed. Barcelona. Masson.

4. Patógenas
Fermentan manitol
Produce: *hemolisinas
*fosfatasa
*lipasa
Proteolíticas
(licuefacción de
proteínas)
En medio con telurito
→ negro azabache
Temperatura óptima37 °C
Se encuentran en:
*leche
*agua negra
*alimentos con
inadecuada cocción
Forman glucosa en
anaerobiosis
Oxidasa negativo
Produce ADNasa
Bernard D. Davis., [et al.] (1999) Tratado de microbiología 4a. ed. Barcelona. Masson.

5. No patógenas
• Es la causa menos
común en infecciones
oportunistas
• Es un mediador de
infecciones
nosocomiales
• Su crecimiento es no
hemolisis
• No fermenta manitol
*Coagulasa negativo
*Se presenta
frecuentemente en la
piel de humanos y de
animales y en
membranas mucosas
*No es pigmentado
Bernard D. Davis., [et al.] (1999) Tratado de microbiología 4a. ed. Barcelona. Masson.

6. Clasificacion por
especie
Fermentacion de manitol
s. Aureus (+ ) (SIM)
Formacion de acido percibible a
partir del rojo de fenol con
cambio a un halo amarillo
Elmer W. Koneman... [et al.] (1999). Diagnostico microbiologico : texto y atlas color. (5ªed) Buenos Aires

7. S110
Medio selectivo para el
aislamiento y
diferenciación:
• producción de pigmentos
• fermentación de manitol
• hidrólisis de gelatina, a
partir de alimentos y otras
muestras.
Mac Faddin, J (1991). Pruebas bioquimicas para la identificacion de bacterias de importancia clinica. (2ºed) México, Panamericana

8. Es una
hemoproteina
hidroxiperoxidasa
pH optimo 7
Catalasa
Sistema
citocromo
Catalizan
Exceso: tóxico
para la
Bacteria
*Descomposición
aeróbica de
azucares
Peróxido de
hidrogeno
Oxigeno gaseoso
Agua
Mac Faddin, J (1991). Pruebas bioquimicas para la identificacion de bacterias de importancia clinica. (2ºed) México, Panamericana

9. http://www.telmeds.net/AVIM/Abacterio/cocos%20gram%20positivos/images/CatalaseResults1.jpg

10. Fermentación de manitol
• unas gotas de púrpura de
bromocresol a las zonas
donde se encuentran las
colonias sospechosas y en
una zona de la placa donde
no
hay
desarrollo
bacteriano.
• Comparar
el
color
desarrollado entre estas
dos zonas.
• Prueba positiva: cambio
de color del indicador del
medio en la zona de
crecimiento bacteriano. El
medio sin desarrollo de
microorganismos
permanece sin cambio.
Prueba negativa: no hay
diferencias de color entre
las zonas de crecimiento
bacteriano y la zona sin
inocular.
Mac Faddin, J (1991). Pruebas bioquimicas para la identificacion de bacterias de importancia clinica. (2ºed) México, Panamericana

11. http://pathmicro.med.sc.edu/fox/Mannitol.jpg

12. Hidrólisis de la gelatina
cubrir la placa 5 ml de una
solución saturada de
sulfato de amonio y
colocar en estufa, a 35-37
ºC, en aerobiosis durante
10 minutos.
• Positiva: halo transparente
alrededor de las colonias.
Negativa: ausencia de halo
transparente alrededor de
las colonias.
Mac Faddin, J (1991). Pruebas bioquimicas para la identificacion de bacterias de importancia clinica. (2ºed) México, Panamericana

13. Microorganismo Pigmento Fermentació Hidrólisis Prueba de
n de manitol
de la
la
gelatina coagulasa
S. aureus ATCC
25923
+
+
+
+
S. epidermidis
ATCC 14990
-
-
+
-
Elmer W. Koneman... [et al.] (1999). Diagnostico microbiologico : texto y atlas color. (5ªed) Buenos Aires

14. COAGULASA
EN PORTA OBJETOS
1 gota de
solución
salina
1 colonia de
estafilococos
más
más
Asa de
plasma de
conejo con
EDTA
Si aglutina es positiva
Elmer W. Koneman... [et al.] (1999). Diagnostico microbiologico : texto y atlas color. (5ªed) Buenos Aires

15. EN TUBO
Inoculación de
0.5 ml
Dilución de 1:4
de plasma de
conejo con EDTA
Formación de 1
coagulo (1-4 hr
35º)
1 asa de la
colonia
sospechosa
Positiva
Elmer W. Koneman... [et al.] (1999). Diagnostico microbiologico : texto y atlas color. (5ªed) Buenos Aires

16. •
ESTÁNDAR
Perlas de látex
Perlas de látex
Más
Más
Fibrinógeno
Inmunoglobulina
(detecta factor de agregación
en las cels. Estafilocócicas)
(detecta proteína A de la
pared cel. de S. aureus)
Aglutinación
s. aureus
Elmer W. Koneman... [et al.] (1999). Diagnostico microbiologico : texto y atlas color. (5ªed) Buenos Aires

17. MANITOL
La mayor parte de cepas de S. aureus
producen manitol y forman ácido
Excelente medio es agar-manitol
saldo para poblaciones mixtas
S. aureus crece
bien en medio
rojo naranjado
Produce colonias
con halo amarillo
Inhibe a S.
aureus (7.5% de
NaCl)
Indica la
producción de
ácido
Elmer W. Koneman... [et al.] (1999). Diagnostico microbiologico : texto y atlas color. (5ªed) Buenos Aires

18. DNA-asa
Agar nutriente
incorpora
DNA
más
Se agrega azul de
toluidina O
Baña la placa con
ácido clorhidrico
Si el microorganismo
crece y produce
DNAsa
El agar que rodea
colonia de S. aureus
cambia
Azul-rosa
Se inocula el
microorganismo en el
agar
Incuba (18-24 hrs)
Producción de
hidrólisis de DNA
Elmer W. Koneman... [et al.] (1999). Diagnostico microbiologico : texto y atlas color. (5ªed) Buenos Aires

19. ADNasa
Comprobación
Azul de toloudina
Prueba adicional
para la
identificación de
muchas cepas
Rodeada con una
zona clara, zonas
opacas(-)
(+) de azul a rosa
Baño con acido
clorhídrico
diluido(+)
Adenasa después de
18 a 24 horas
(-)azul
Elmer W. Koneman... [et al.] (1999). Diagnostico microbiologico : texto y atlas color. (5ªed) Buenos Aires

20. FERMENTACIÓN DE GLUCOSA EN
ANAEROBIOSIS
Se utiliza para la diferenciación de
micrococos y estafilococos
Los micrococos son oxidativos y no
fermentadores en su metabolismo
Hay que determinar si el aislamiento
pude producir glucosa en condiciones
anaerobias
Elmer W. Koneman... [et al.] (1999). Diagnostico microbiologico : texto y atlas color. (5ªed) Buenos Aires

21. estafilococos
cerrado
Abierto
Micrococos
acidificaran
Elmer W. Koneman... [et al.] (1999). Diagnostico microbiologico : texto y atlas color. (5ªed) Buenos Aires

22. Enfermedades producidas por cepas
no patógenas

23. Infecciones de las prótesis articulares
• Se debe principalmente a
estafilococos
coagulasa
negativos.
• Los pacientes presentan
únicamente dolor localizado
y un fallo mecánico de la
articulación.
• Los signos sistémicos como
la fiebre y la leucocitosis no
son
llamativos
y
los
hemocultivos suelen arrojar
resultados negativos.
Murray, P. R. (2007) Microbiología médica (5° ed.) Elsevier

24. Enfermedades producidas por cepas
patógenas

25. Las ampollas contiene un liquido claro, sin microorganismos ni leucocitos. De 7 a 10 el epitelio recupera su estructura gracias a los anticuerpos protectores.
Sindrome de la piel escaldada
Las ampollas contiene un
liquido claro, sin
microorganismos ni
leucocitos.
De 7 a 10 dias el epitelio
recupera su estructura
gracias a los anticuerpos
protectores.
Murray, P. R. (2007) Microbiología médica (5° ed.) Elsevier

26. Impétigo ampolloso
• Las cepas especificas
productoras de toxina (p. ejm el
fago tipo 71) se asocian a la
formación de ampollas cutáneas
superficiales.
• Aquí se muestran resultados
positivos en los cultivos.
• El eritema no se extiende mas
allá de de los límites de la
ampolla y no está presente el
signo de Nikolsky.
Murray, P. R. (2007) Microbiología médica (5° ed.) Elsevier

27. Sindrome del shock toxico
• La producción de la toxina
impone una atmosfera
aerobia y un pH neutro.
• Las
manifestaciones
clínicas aparecen de forma
brusca y consiste en
fiebre, hipotensión y
exantema macular difuso.
• Se observa una afectación
multiorgánica y toda la
piel
se
descama
incluyendo palmas y las
plantas.
Murray, P. R. (2007) Microbiología médica (5° ed.) Elsevier

28. Intoxicación alimenticia estafilocócica
Estafilococos
penetran los
alimentos
Inicio de la
enfermedad
• Puede ser por un estornudo
• Debe permanecer a temperatura ambiente
• No presentan olor ni sabor desagradable
• El calentamiento posterior destruye a las bacterias pero no inactiva las toxinas
• Abrupto y rapido
• Periodo de incubacion de 4 horas( tras la ingestion)
• Los sintomas duran generalmente menos de 24 hrs.
• Vomitos importantes, diarrea (acuosa y no sanguinolienta), dolor abdominal, nauseas,
sudoracion y cefalea
• Alivio de los sintomas, no se recomienda antibioticos porque se trata de una toxina
Tratamiento
Murray, P. R. (2007) Microbiología médica (5° ed.) Elsevier

29. Material

30. • 2 tubos con plasma citratado
• 2 tubos con caldo manitol rojo de fenol con
campana de Durham
• 2 tubos con caldo glucosa rojo de fenol con
campana de Durham
• 2 tubos con caldo de glucosa rojo de fenol con
campana de Durham y sello de Vaspar
• 2 tubos con gelatina bacteriológica

31. •
•
•
•
•
•
Microscopio
Mechero
Asa y porta asa bacteriológica
Peróxido de hidrogeno
Colorantes para Gram
Porta objetos

32. Procedimiento

33. • 1.- de los cultivos de la sesión anterior, realizar
tinción de Gram.
• 2.- sembrar los tubos de caldo a partir de los
medios de agar S-110, escogiendo las colonias
mas típicas y etiquetando con cuidado un juego
de medios para las colonias blancas y otro para
las colonias amarillas.
• 3.- sembrar el tubo de gelatina por picadura y
dejar incubar a temperatura ambiente por 24 hrs

34. • Observar si hay licuefacción.
• 4.- incubar el resto de los medios de cultivo a
37° C durante 24 hrs.
• 5.- la prueba de la coagulasa se efectúa
tomando una asada de la cepa e inocular por
suspensión en el tubo de plasma
citratado, incubar a 37°C durante 4, 8 y 24
hrs, observar la formación de coagulo.

35. • Si en este tiempo no se ha formado reportar la
prueba como negativa.
• 6.- para efectuar la prueba de la catalasa,
tomar una asada de la cepa y suspender en
una gota de agua sobre un portaobjetos,
adicionarle una o dos gotas de peróxido de
hidrogeno y esperar la formación inmediata
de burbujas, de ser así reportar la prueba
como positiva.

36. • 7.- hacer una tabla donde se indiquen todos
los resultados.
• 8.- interpretar los resultados.

37. Bibliografia
• Bernard D. Davis., [et al.] (1999) Tratado de microbiología 4a.
ed. Barcelona. Masson.
• Elmer W. Koneman... [et al.] (1999). Diagnostico
microbiologico : texto y atlas color. (5ªed) Buenos Aires
• Mac Faddin, J (1991). Pruebas bioquimicas para la
identificacion de bacterias de importancia clinica. (2ºed)
México, Panamericana
• Murray, P. R. (2007) Microbiología médica (5° ed.) Elsevier
• http://www.telmeds.net/AVIM/Abacterio/cocos%20gram%20
positivos/images/CatalaseResults1.jpg
• http://pathmicro.med.sc.edu/fox/Mannitol.jpg