La cromatografía es una técnica de separación de los componentes de una mezcla basada en las diferentes velocidades de movimiento de los solutos a través de un medio estacionario. Existen varios tipos de cromatografía como la de adsorción, reparto, exclusión iónica y afinidad. La cromatografía permite separar mezclas e identificar y cuantificar sus componentes.

1. CROMATOGRAFÍA
 QFB. DULCE MARÍA HERNÁNDEZ BERISTAIN

2. CONCEPTO:
• Es una técnica de separación más usual basada en
la diferente velocidad con que se mueven los
solutos a través de un medio estacionario,
mediante el flujo de un disolvente llamado
eluente.
• Las técnicas están asociadas al principio de
retención selectiva.
• Permite separar los distintos componentes de una
mezcla, permitiendo identificar y determinar las
cantidades de dichos componentes.

3. Posee:
 Fase móvil: consiste en un fluido (gas, líquido o
fluido supercrítico).
 Fase estacionaria: se trata de un sólido o un líquido
fijado en un sólido.
 Los componentes de la mezcla interaccionan en
forma diferente con la fase estacionaria y con la
fase móvil.
 Los componentes atraviesan la fase estacionaria a
distintas velocidades y se van separando.

4. ORÍGEN:
1850 F.F. RUNGE (Químico ) descubrió la C. en Papel.
1903 – 1910 MIJAIL TSWETT (Botánico) describió la C. en Columna.
Muestra: Hojas verdes
Fase Estacionaria: Sulfato de Calcio
Fase Móvil: Éter de petróleo.

5.  No se usa en sustancias que son insolubles
en disolventes, o bien en las que se
descomponen con el disolvente o con la fase
estacionaria (f.e.)
LIMITANTES:

6.  Fase fija, estacionaria, soporte o solvente.
 Fase móvil, disolvente o eluente.
 Compuesto o mezcla a separar.
SISTEMA CROMATOGRÁFICO

7.  Todos los componentes de la muestra deben
ser solubles en la fase móvil y deben
interactuar con la fase estacionaria ya sea
disolvente, adsorbiéndose o reaccionando en
la forma química.
REQUISITOS.

8. CRITERIOS PARA ESTUDIAR
LA CROMATOGRAFIA:
1. Por su fase móvil (f.m.).
 LIQUIDO.
 GAS.
 LÍQUIDO:
 La segunda letra significa la Fase móvil.
 C.L.S.
 Cromatografía de adsorción
 C.L.L
 Cromatografía de reparto

10.  GAS
 C.G.L.
 Cromatografía de reparto.
 C.G.S.
 Cromatografía De Absorción.
http://ocw.usal.es/ciencias-experimentales/analisis-aplicado-a-la-ingenieria-
quimica/contenidos/course_files/Tema_10.pdf

11. 2. Por su Mecanismo de separación.
 CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN.
 CROMATOGRAFÍA DE REPARTO.
 CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO.
 CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN.

12. CROMATOGRAFÍA DE
ADSORCIÓN
FUNDAMENTO
 Es un fenómeno superficie que se manifiesta
por el aumento de la concentración del soluto
en la interface que rodea al medio
estacionario.
 Se basa en el proceso adsorción-desorción de
sustancia contenidas en la fase móvil sobre
un sólido estacionario.

13.  La adsorción esta basada en la diferencia de
polaridad entre moléculas de la mezcla y el
sorberte.
 Los compuestos de mayor polaridad se
adsorben mas fuertemente y migran mas
lentos que los no polares o de menor
polaridad.
 Se debe elegir la polaridad del disolvente
igual a la de la muestra y adsorbentes activos
para sustancia no polares y menos activas
para sustancias mas polares.

14. CLASIFICACIÒN.
 C.L.S:
Cromatografía en columna y
Cromatografía en capa fina.
 C.G.S:
Cromatografía en columna.

15. VARIABLES QUE AFECTA EN
EL FENÒMENO DE
ADSORCIÒN.
 ADSORBENTES.
 ELUENTES.
 SOLUTOS O MUESTRAS.

16. CROMATOGRAFÍA DE
REPARTO
 La separación de una mezcla soluto
es función de la distribución de las
moléculas de éstos entre una fase
estacionaria líquida, soportada
sobre un sólido, y una fase móvil o
eluente del sistema.

17. FASE MÓVIL:
 C.L.L.
 Se lleva a cabo en papel, capa fina y en columna.
 La fase estacionaria puede ser: silica gel, celulosa
caprolactana, alumina, etc.
 C.G.L.
 La fase estacionaria, se debe elegir la que presente una
estructura análoga a las sustancias que componen la
muestra.

18. CROMATOGRAFÍA EN PAPEL CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

19. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

20.  Baja volatilidad sobre el soporte sólido.
 El soporte debe poseer gran superficie
específica.
 Tamaño de partícula uniforme.
CONDICIONES DE LA FASE MÓVIL.

21. SOPORTES. DISOLVENTES POLARES (F.E.)
ACIDO SALICÍLICO, GEL
DE SÍLICE.
ALCOHOLES, AGUA,
GLICOLES, NITROBENCENO.
TIERRAS DE INFUSORIOS,
ALMIDÓN, CELULOSA
CAPROLACTAMA, VIDRIO.
AGUA, LÍQUIDOS ORGÁNICOS.
POROPAK. AGUA, LÍQUIDOS ORGÁNICOS.
FASE MÓVIL DISOLVENTE PURO O MEZCLA DE DISOLVENTES.

22. CROMATOGRAFÍA DE
EXCLUSION.
 Esta técnica es útil en la separación de
especies de peso molecular elevado.
 Se basa en la separación de los diferentes
volúmenes moleculares de los solutos.
 El tiempo de elusión es proporcional al peso
molecular de los mismos
 Desusos: no se usa en compuestos de alto
peso molecular.
 Usos: C.C.F. y C. en columna.

23.  EMPAQUE:
 Pequeñas partícula de 10 mμ de sílice o de algún
polímero como:
 Sephadex, con una red de poros uniforme, dentro
de los cuales se difunden las moléculas de soluto y
de disolvente.
 Las moléculas dentro de los poros quedan
atrapados y separados del flujo de la fase móvil. El
tiempo de retención depende del tamaño de las
moléculas.

24.  Moléculas de mayor tamaño al del poro del
empaque son excluidas y no experimentan
retención, es decir; viajan a la velocidad de
la fase móvil.
 Moléculas de menor tamaño al de los poros
penetran en ellos, quedando atrapados por
mas tiempo, son las últimas en salir de la
columna.
 Moléculas de tamaño intermedio, que
penetran en los poros tienen un poder de
penetración que dependen de su diámetro.

25. CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN

26. TIPOS DE EMPAQUE:
 HIDROFÍLICOS:
 Se usan con fase móvil acuosa. Se conoce como C.
De filtración en gel.
 HIDROFÓBICOS:
 Usan disolventes orgánicos. Se conoce como C. de
permeación en gel.

27. APLICACIONES:
 Para análisis de azúcares, jugos enlatados,
jugos naturales, resinas, etc.
 Para separación de moléculas de peso
molecular desde algunos cientos hasta
varios millones
 Permite estimar el peso molecular de
polímeros de gran tamaño o de productos
naturales.

28. CROMATOGRAFÍA DE
INTERCAMBIO IÓNICO.
 Comprende materiales de estructura porosa
e insolubles que contienen grupos reactivos
asociados a iones lábiles capaces de
intercambiarse con otros iones presentes en
el medio que lo rodea.

29. GRUPOS INTERCAMBIADORES
 SULFONACIÓN:
 Produce intercambio catiónico fuertemente ácido.
 CLOROMETILACIÓN Y AMINAS
TERCIARIAS
 Produce la forma clorada de un intercambio
aniónico fuertemente básico.

30.  El intercambio iónico, es un proceso
mediante el cual los iones que se mantienen
sobre un sólido poroso, prácticamente
insoluble, se intercambian por iones de una
solución que se pone en contacto con el
sólido.
FUNDAMENTO:
Se utilizan:
RESINAS NATURALES Y SINTÉTICAS

32. CROMATOGRAFÍA DE
AFINIDAD Y DE
INMUNOAFINIDAD.

33.  En la cromatografía de afinidad las
bolas de gel que conforman el lecho
de la columna presentan unido en su
superficie un ligando, que es una
molécula ante la que tiene afinidad
una o más de las proteínas presentes
en la mezcla a separar.

34.  Al atravesar la columna el ligando
secuestra sobre la superficie de las
bolas de gel la proteína afín, y deja
pasar el resto.

35.  La elusión de la proteína afín se
puede conseguir modificando las
propiedades de carga del ligando
(variando el pH hasta alcanzar su
punto isoeléctrico, variando la
fuerza iónica del solvente, etc...) con
lo que se reduce la intensidad de la
interacción hasta anularla.

36. CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD
EN PROTEÍNAS

37.  En ocasiones la cromatografía de afinidad
se realiza incubando el gel recubierto
con el ligando directamente con la
solución que contiene las proteínas a
purificar.
 Posteriormente se empaqueta la columna y
se procede a la elusión, primero de las
proteínas no unidas ('run throught') y
posteriormente de las retenidas (eluido
específico).

38. http://es.scribd.com/doc/16675209/6-EXTRACCION-Y-SEPARACION-DE-
PIGMENTOS-VEGETALES