Este documento describe la cromatografía de intercambio iónico, un método de separación basado en las propiedades de carga de las moléculas. Se utiliza una fase estacionaria con cargas electrostáticas que retienen contraiones móviles que pueden intercambiarse por iones de la fase móvil. Se explican conceptos como adsorción, elución y aplicaciones como la medición de hemoglobina glicosilada y determinación de ácido delta-aminolevulínico y porfobilinógeno en orina.

1. TÉCNICAS BIOQUÍMICAS: CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO FERNANDA FUENTEALBA VALENTINA FUENTES MACARENA LOBO CARLA MORA ROMINA PULVERMÜLLER JONATHAN RIQUELME FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA DE MEDICINA BIOQUÍMICA DOCENTES: Dr. REGINALDO DEL POZO BQ. MIRNA MUÑOZ MIÉRCOLES 30 DE JUNIO DE 2010

6. PROPIEDADES DE LOS INTERCAMBIADORES Intercambiador Iónico: Polímero que tiene grupos cargados unidos. Intercambiador Catiónico: Si un grupo está cargado negativamente, podrá intercambiar iones positivos. Un grupo típico que se utiliza en los intercambiadores de cationes es el grupo sulfónico, SO3-. El grupo ácido sulfónico es un intercambiador de cationes fuertemente acido. Otros grupos de utilización corriente son el carbonilo e hidroxilo fenólico, dos intercambiadores catiónicos débilmente ácidos.

7. PROPIEDADES DE LOS INTERCAMBIADORES Intercambiador Aniónico: Si el grupo cargado es positivo, es un intercambiador de aniones. Los intercambiadores aniónicos débilmente básicos más corrientes son grupos aminos alifáticos o aromáticos.

8. MATERIALES Columna de vidrio Matriz de intercambio iónico (Resina) Eluyente Muestra a fraccionar Colectores.

9. PROCEDIMIENTO Equilibrio: Toda la fase estacionaria se encuentra asociada a iones complementarios (que pueden ser cloro o sodio). Aplicación y Lavado: Aplicar la muestra la cual queremos filtrar a través de la columna mediante un lavado específico. Se aplica un buffer con el mismo pH y fuerza iónica que el buffer inicial para que todas las proteínas cargadas se unan al intercambiador. Elusión: Las moléculas captadas por el intercambiador son eluídas debido a cambios en la composición del buffer. Regeneración: Remover las partículas que aún están asociadas al intercambiador. Se debe generar un cambio más drástico en el pH y la concentración salina. La fase estacionaria puede volver a ser utilizada.

10. PROCEDIMIENTO

12. Reducir la carga neta cambiando el pH

14. VENTAJAS /DESVENTAJAS Ventajas: Alta capacidad Alta resolución Paso concentrador: Se puedesembrar un granvolumenparaluegoeluirlo en un menorvolumen. Con una misma columna se puede utilizar a diferentes pH y obtener diversos perfiles de elución. Desventajas: Las muestras deben estar desalinizadas antes de ser aplicadas a este tipo de cromatografía

18. Las resinas ácidas fuertes siguen ionizadas incluso en disoluciones muy ácidas, en cambio las resinas ácidas débiles se protonan a un pH próximo a 4 y pierden su capacidad de intercambio catiónico, reduciéndose así, el tiempo de retención.

21. Este problema se resolvió mediante un sistema supresor de conductibilidad colocado a la salida de la columna cromatográfica.

24. Registran los cromatogramas.

28. HEMOGLOBINA GLICOSILADA

31. Cuando los pacientes con PAI presentan una crisis aguda, disminuye la actividad de la PBGD y, como consecuencia los niveles de BPG y/o ALA en la orina se incrementan significativamente.

33. El PBG se queda retenido en la aniónica y el ALA en la catiónica. En la columna con PBG, se utiliza ácido acético 1M para que éste eluya y pueda ser cuantificado. En la columna con ALA, se le agrega acetato de sodio 1M para que éste eluya y sea cuantificado. Luego, el eluido de cada columna reacciona con Reactivo de Ehrlich, formando un producto rojo intenso. Este reactivo está conformado por 4-dimetilbenceno diluido en ácido acético y ácido perclórico.

35. Purificación de agua

36. Purificación del fibrinógeno de la leche

37. Determinación de anticonvulsantes en el suero después de la extracción de la fase sólida.

38. Análisis de antibióticos de poliéter

39. Determinación de pesticidas.

40. Identificación de ácidos orgánicos en la fruta y en el jugo.

41. Detección de derivación-fluorescencia post-columna para análisis para varios tipos de pesticidas agrícolas .

43. Purificación de agua

44. Purificación del fibrinógeno de la leche

45. Determinación de anticonvulsantes en el suero después de la extracción de la fase sólida.

46. Análisis de antibióticos de poliéter

47. Determinación de pesticidas.

48. Identificación de ácidos orgánicos en la fruta y en el jugo.

49. Detección de derivación-fluorescencia post-columna para análisis para varios tipos de pesticidas agrícolas .

50. Determinación de metabolitos de Triptofan en el suero umbilical.