Este documento describe las lesiones precancerosas y el cáncer de cérvix causados por el virus del papiloma humano (HPV). Explica que existen más de 100 tipos de HPV, siendo los tipos 16 y 18 de alto riesgo. Describe las técnicas para detectar el HPV como la hibridación in situ y la PCR. También describe las lesiones precancerosas como la displasia leve, moderada y grave, y los diferentes tipos histológicos de cáncer de cérvix.

1. FAMILIA PROFESIONAL SANIDAD DIDÁCTICA DE LA CITOLOGÍA 04FP37CF184 HPV y LESIONES ESCAMOSAS DE CÉRVIX

2. LESIONES PRETUMORALES

4. Virus ADN, de doble cadena

5. Pequeño (50 nm. ) e icosaédrico (20 caras).

7. Verrugas vulgares

8. Verrugas planas

9. Epidermodisplasia verruciforme (congénita)

10. Enfermedad de Bowen

11. Tipos 1 y 2 en palmas y plantas.

12. Más de 20 tipos afectan al tracto genital femenino

14. Southern Blot (análisis mediante transferencia por capilaridad de ADN puesto en funcionamiento por Southern)

15. PCR: Reacción en cadena de la Polimerasa.

17. Carcinoma infiltrante: 16, 18, 31

18. Lesiones escamosas intraepiteliales pretumorales y condilomas planos: 16,18,31, 33, 35

19. Son virus de alto riesgo: 16 y 18

21. VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO

22. Replicación Viral MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA REPLICACIÓN VIRAL

23. MICROSCOPÍA ELECTRÓNICApágina:www.ipog.com.br/imagens.htm

25. al 3-5 %, produce coagulación de las proteinas celulares en las zonas de condiloma plano y

26. Aparecen como zonas blanquecinas con el colposcopio.

27. Test de Schiller o test del lugol:

28. Color pardo-caoba en las zonas normales (ricas en glucógeno)

30. Condiloma acuminado de vulva

31. Lesión blanquecina con Acido AcéticoyLesión Lugol negativa

32. Inmunohistoquímica: positividad para HPV

33. SOUTHERN BLOT Digestión del ADN con enzimas de restricción Electroforesis en gel de agarosa. Desnaturalización de los fragmentos separados y cortados. Transferencia de las cadenas simples a una membrana de nitrocelulosa o nylon y fijación por medio de calor (800C). Prehibridación con sondas de ADN inespecífico Marcaje de la sonda con nucleótidos radioactivos Hibridación de la sonda y lavado de la membrana para eliminar el exceso de sonda o aquellas que hayan hibridado mal. Revelado en placa radiográfica.

34. Hibridación in situ y PCR

35. HIBRIDACIÓN IN SITU

37. ALTERACIONES DE LAS CELULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Dr. Pereira 2003 Infección por HPV -Deteccion de HPV por HCT (“hybrid capture”) en tubos La muestra del paciente que potencialmente puede contener el DNA viral es desnaturalizada (1) y la cadena liberada de DNA es hibridizada (2) en una solución mixta de RNA, que contiene 14 tipos virales; 5 de bajo riesgo (6,11,42,43 y 44) y 9 de alto riesgo (16,18,31,33,35,45,51,52,56). Los híbridos de RNA-DNA son capturados (3) en la superficie de un tubo que contiene anticuerpos inmovilizados que reconocen específicamente a los híbridos de RNA-DNA (4). Los híbridos capturados reaccionan con un segundo anticuerpo conjugado con fosfatasa alcalina y con un substrato quimioluminiscente (5); la luz emitida, es leída por una máquina (luminómetro). El resultado numérico y/o cuantitativo no está sujeto al factor subjetivo del examinador; las medidas se expresan en unidades relativas de luz (relative light units - RLU). 1 2 3 4 5

38. ALTERACIONES DE LAS CELULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Dr. Pereira 2003 Infección por HPV -Deteccion de HPV por HIS (“hybrid capture”) CAPTURA HIBRIDA I - HCT - TECNICA EN TUBOS. Es una nueva generación de test de hibridización en solución con señal de amplificación Sensibilidad: 70%-96.8% En conjunto con el Pap, la detección HSIL alcanza un 93-100% Es positivo cuando las relaciones relativas de luz RLU/PCA (controles positivos para virus de bajo riesgo para los virus del Grupo I ) (bajo riesgo) y/o RLU/PCB para los virus del grupo II (alto riesgo) son iguales o mayores que uno. CAPTURA HIBRIDA II – HC II – MICROPLACA. Es 50 veces mas sensible que la Captura Híbrida en tubos y además agrega la detección de 4 tipos virales de alto riesgo (39,58,59 y 68); así están representados casi todos los tipos virales oncogénicos. Ha reemplazado a la técnica en tubos que aún continúa siendo válida aunque menos sensible.

39. CAPTURA HÍBRIDA EN MICROPLACAS

40. Sistema de Captura Híbrida

41. D12 Condiloma HE

43. Gran cavidad perinuclear, debilmente teñida, translúcida y de bordes “cortados a pico”

44. Alrededor citoplasma denso, eosinófico o basófilo (aspecto hialino) o anfófilo

45. Núcleo de aspecto variable:

46. Cromatina borrosa, hipercromático, agrandado

47. Menbrana nuclear no visible (sin nucleolos, ni inclusiones)

49. En grupos tridimensionales o aisladas

50. Citoplasma orangófilo denso

54. LSIL-HPV

58. LSIL

59. LSIL

60. LSIL

61. Células Naviculares

62. CLASIFICACIONES DE LESIONES ESCAMOSAS PRETUMORALES DE CÉRVIX

64. CIN II: ½ inferior (entre 1/3 y 2/3)

67. Núcleos aumentados de tamaño

68. Relación núcleo citoplasma N/C inferior a 1/3.

70. Células de tamaño intermedias pequeñas y parabasales grandes.

71. Núcleos aumentados de tamaño

72. Relación núcleo citoplasma N/C entre 1/3 y 2/3, aproximadamente ½.

73. Núcleos hipercromáticos, habitualmente redondos u ovales, pero ya pueden ser fusiformes o irregulares.

74. Cromatina de distribución homogénea.

76. Núcleo aumentado de tamaño

77. Relación núcleo citoplasma N/C superior a 2/3.

78. Núcleos claramente hipercromáticos, de forma irregular, con cromatina tosca, granular, no homogénea.

79. Disposición de las células aisladas, pero también en grupos pseudosincitiales de bordes mal definidos.

80. Citoplasmas en general pequeños, como un anillo alrededor del núcleo.

81. En las lesiones queratinizantes, los citoplasmas pueden ser amplios y eosinófilos.

83. d2 Displasia leve HE

86. D7 Displasia moderada HE

87. D6 Displasia grave

88. D40m Ca in situ

89. D38 Ca in situ

91. HPV 113

92. HPV 93

93. PROTOCOLOS PARA LESIONES INTRAEPITELIALES ESCAMOSASDr. Pereira 2003 Lesión Escamosa Intraepitelial Resumen -LSIL: Repetir el frotis cada 4-6 meses durante 2 años -LSIL: Se puede hacer colposcopia y biopsia directa o curetaje exocervical -HSIL: Requiere comprobación por colposcopia y biopsia

94. D45 Carcinoma microinvasor HE

95. Displasia 53 microinvasión

96. ASC-US Y ASC-H ASC-US (Plantea diagnóstico diferencial con LSIL: CIN I HPV: Pseudocoilocitosis Paraqueratosis ASC-H (Plantea diagnóstico diferencial con HSIL)

97. ASC-US Cytologyweb

98. ASC-US (dd CIN I)

99. ASC-US (dd Coilocitosis)

100. LSIL (DD Disqueratosis viral)

101. ASC-H

102. PROTOCOLOS EN ASC-US Y EN ASC-H Dr. Pereira 2003 -ASCes un diagnóstico de exclusión (debe suponer <5% de todos los diagnósticos y como máximo 2 ó 3 veces el número de SIL) -ASC-US: repetir frotis cada 4-6 meses durante 2 años -ASC-US inespecífico con inflamación: repetir a los 2-3 meses -ASC-US en frotis atróficos postmenopáusicos: tratar con estrógenos -ASC-HSIL: actuar como si fuera una LesiónIntraepitelial

104. Núcleos:

105. Grandes, irregulares

106. Sin nucleolo (es raro que lo tengan)

108. SIL 25

109. Carcinoma Epidermoide Queratinizantepágina:www.ipog.com.br/imagens.htm

110. Ca. Epidermoide queratinizante

111. Ca. Epidermoide queratinizante Thin Prep

115. Relación N/C mucho más alta que en el tipo queratinizante.

116. Núcleos:

117. Grandes, con gran anisonucleosis

118. Macronucleolos

119. Cromatina granular tosca, con bandas gruesas y espacios claros.

121. HPV 103

122. Ca. Epidermoide de células grandes

124. Citoplasma escaso, basófilo

125. Relación N/C altísima, a veces prácticamente no se ve el citoplasma.

127. Displasia 090 Ca. de células pequeñas