El documento describe el virus del papiloma humano (VPH), incluyendo su estructura, tipos, ciclo vital, efectos e implicaciones en lesiones y cáncer de cuello uterino. Existen más de 60 tipos de VPH que pueden causar verrugas genitales o lesiones precancerosas/cancerosas, siendo los tipos 16 y 18 de alto riesgo para el cáncer. El VPH se transmite sexualmente y puede permanecer latente o replicarse activamente, integrando su ADN y potencialmente causando una transformación maligna. La dete

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INFECCIÓN POR VPH. VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO.
1. INTRODUCCIÓN:
- Antes se supuso al virus del Herpes simple tipo II como factor oncogénico del
cáncer de cérvix. No se ha podido confirmar.
- El HPV se conocía como causante del condiloma acuminado (verrugas
genitales).
- Desde los años 70 se conoce el papel oncogénico del HPV en el cáncer de
Cérvix. Los oncogenes Rb y p53 reaccionan con proteinas del HPV.
- El virus HPV NO crece en cultivos celulares, ni en animales. NI se detecta por
serología.
- El virus hpv:
- Pertenece a la familia Papovavirus
- Virus ADN, de doble cadena
- Pequeño (50 nm. ) e icosaédrico (20 caras).
- Hay más de 60 tipos (70 según wellpath), con marcadas diferencias
genéticas.
- Regiones del genoma , ADN, viral:
1) ORF o zonas de lectura abierta. Codifican proteínas:
a) que regulan las funciones virales ( genes E – precoces: hay 7)
b) estructurales (genes L tardíos, hay 2).
2) NCR (URR según wellpath) o región no codificadora:
- encargada del control de la trnascripción y del origen de la
replicación de ADN.
- Papel de los distintos tipos de HPV:
- La mayor parte producen lesions cutáneas:
- Verrugas vulgares
- Verrugas planas
- Epidermodisplasia verruciforme (congénita)
- Enfermedad de Bowen
- Tipos 1 y 2 en palmas y plantas.
- Más de 20 tipos afectan al tracto genital femenino:
- En cérvix: 6,11,16,18, 31, 33 35 y 39.
- Con ME. e Inmunocitoquímica se detecta HPV, pero no se identifica el tipo
- Tampoco informan sobre el tip: citología, colposcopia ni biopsia.
- Técnicas para tipar el HPV son:
• Hidbridación in situ de ADN
• Southern Blot (análisis mediante transferencia por capilaridad de
ADN puesto en funcionamiento por Southern)
• PCR: Reacción en cadena de la Polimerasa.
- Tipos de HPV en lesiones genitales:

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- Condiloma acuminado: 6, 11
- Carcinoma infiltrante: 16, 18, 31
- Lesiones escamosas intraepiteliales pretumorales y condilomas planos:
16,18,31, 33, 35
- Son virus de alto riesgo: 16 y 18
- Son virus de bajo riesgo: 6 y 11
(aunque a veces se encuentran en lesiones de grado contrario (bajo/alto).
Luego: existen otros factores que influyen en el desarrollo del Cáncer de
Cérvix).
2. CICLO VITAL DEL HPV:
- Virus de transmisión sexual
- Inicia su ciclo en las células basales escamosas
- Puede permanecer como infección latente, asintomática, sin replicarse: en 10%
de mujeres asintomáticas, (30 % en embarazadas):¿aumenta el % con vida
sexual activa, y edad?. No es contagioso en esta fase. Tampoco está indicado
programa de detección de HPV aquí.
- Puede replicarse en el núcleo de las células escamosas para producir nuevas
partículas virales. En este caso produce efectos citopáticos: Coilocitosis y
disqueratosis / pseudoparaqueratosis.
- Puede integrarse en el genoma de la célula escamosa, sin producción de
proteínas estructurales, su ciclo vital se paraliza. Este caso se asocia a una
transformación maligna. (No se observa virus integrado en todos los
carcinomas invasores, luego habra otros factores de carcinoma).
3. TRANSMISIÓN:
- En las lesiones de bajo grado suele haber virión completo. Son infecciosas.
(LSIL – HPV)
- En las lesiones de alto grado y carcinoma infiltrante no está completo. No es
contagioso.
- Se recomienda enviar a colposcopia y biopsia a todas las pacientes en cuya
citología aparezca infección por HPV: disminuye la masa viral (y
confirmaremos el grado de la lesión, esta frase entre paréntesis no está en el
texto del Viguer)
4.CAMBIOS INDUCIDOS POR EL VPH:
ASPECTOS HISTOLÓGICOS:
- Se observan coilocitos en capas superficiales e intermedias del epitelio
escamoso:
- Células con núcleos grandes, hipercromáticos
- Membranas nucleares irregulares
- Halos claros perinucleares evidentes (f. 5.1.)

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- Tres tipos de lesiones histológicas:
1. Lesión plana o CONDILOMA PLANO
- La más frecuente en cérvix
- Mejor llamada “lesión plana”, ya que engloba lesiones potencialmente malignas
(riesgo muy bajo de progresión a carcinoma)
- F. 5.2.) Ligera acantosis, papilomatosis, y superficie plana o algo espiculada
(papilomatosis : aumento de longitud y grosor de las papilas y crestas
interpapilares).
- Abundantes coilocitos y disqueratosis.
2. LESIÓN EXOFÍTICA O PAPILAR (F. 5.3.)
- Finas proyecciones papilares centradas por un vaso
- Condiloma acuminado: múltiples papilas (frecuente el vulva y pene)
3. LESIÓN INVERTIDA (F. 5.4.)
- Metaplasia escamosa de las glándulas, con afectación por VPH (coilocitos)
- Rara en cérvix.
CITOLOGÍA:
Son cambios característicos:
- Coilocitosis
- Disqueratosis/ pseudoparaqueratosis.
1. COILOCITOSIS:
Historia:
- Células balonizadas de Ayre (1949)
- “Atipia coilocítica” de Koss (1956)
- Meissels y Fortin en 1976: descubren al VPH como agente causal del coilocito
y descubren al coilocito en la mayoría de “displasias leves”.
Morfología:F.5.5.
- Célula escamosa madura
- Gran cavidad perinuclear, debilmente teñida, translúcida y de bordes “cortados
a pico”
- Alrededor citoplasma denso, eosinófico o basófilo (aspecto hialino) o anfófilo
- Núcleo de aspecto variable:
• Cromatina borrosa, hipercromático, agrandado(F.5.6.)
• Menbrana nuclear no visible (sin nucleolos, ni inclusiones (F.5.7.)
• (f.5.8.) Binucleación frecuente, a veces un solo núcleo o multinucleación sin
amoldamiento
• Cariorrexis.
Criterios diagnósticos:
- Estrictos: .Es patognomónico de infección por VPH
- DD:
- Infecciones con cambios inflamatorios que incluyen halos claros
perinucleares (no cortados a pico, sin cambios nucleares coilocíticos)

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2. DISQUERATOSIS/PSEUDOPARAQUERATOSIS (LSIL – HPV):
- Queratinización anómala de células escamosas
- En grupos tridimensionales o aisladas
- Citoplasma orangófilo denso
- Núcleo variable, puede mostrar cambios coilocíticos o picnosis
- Mejor llamada disqueratosis como queratinización anómala por efecto viral.
- DD: Disqueratosis inespecífica (f. 5. 10) o paraqueratosis:
- Debida a irritantes
- En forma de:
- Células aisladas
- Perlas córneas benignas
- Bandas alargadas de células paralelas
- Ausencia de cambios nucleares coilocíticos. El DD se realiza por la
ausencia en la paraqueratosis de alteraciones nucleares virales: núcleo
grande, denso y borroso.
5.ASOCIACIONES CIN –VPH:
RELACIÓN CIN – VPH:
1. El virus VPH como causa de CIN)
2. Aparición simultánea de céluals VPH y células de CIN
3. La misma célula con cambios por VPH y cambios por CIN
TIPOS DE ASOCIACIONES CIN – VPH:
1. Asociación vertical:
- 1/3 superior: lesión por VPH
- 2/3 inferiores: lesión CIN
- En citología suelen aparecer solamente las células con cambios por VPH
(la lesión CIN no sería diagnosticada) cuadro 5.2. F. 5.18)
2. Asociación horizontal
- En diferentes puntos de cérvix y/o vagina hay:
- Cambios VPH
- Cambios CIN
- En citología observamos ambos tipos de células (cuadro 5.3)
3. Asociación mixta:
- Cambios VPH + CIN en la misma célula
- “Condiloma atípico” de Meissels de 1981
- Citología:
• Gran polimorfismo, gran variabilidad del tamaño celular
• Citoplasmas queratinizados
• Núcleos:
- Voluminosos
- Cromatina borrosa difuminada
- Hipercromatismo (f.5.19)
- Diagnóstico diferencial: con carcinoma epidermoide(F.5.20)
- Suelen ser SIL de alto grado (f.5.21)

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En la fase de infección latente no hay cambios morfológicos. Sólo podemos
detectar el virus mediante PCR
En la fase de infección viral completa hay cambios morfológicos en citología y
es fácil detectar el virus mediante Inmunohistoquímica.
De los virus de alto riesgo el VPH 16 se asocia más a carcinoma epidermoide de
cérvix y la progresión de lesión pretumoral a tumoral es más lenta; mientras que
el VPH 18 se ha visto más en Adenocarcinoma cervical.
En la infección viral incompleta, los virus de alto riesgo incorporan su material
genético al de la célula, generalmente en presencia de otros factores
coadyuvantes como inmunosupresión, tabaco, embarazo... Su identificación y
tipaje se puede hacer por técnica de Hibridación in situ de ADN. La técnica de
Southern Blot permite diferenciar si el genoma viral está integrado en el ADN de
la célula (convirtiéndola en cancerosa)).
COLPOSCOPIA:
Consiste en la visualización y magnificación mediante un sistema óptico
(colposcopio, lupa) del cuello uterino.
Se complementa con una serie de test como son l:
- Aplicación de Acido Acético AA:
- Aplicación de ácido acético al 3-5 %,
- Produce coagulación de las proteinas celulares en las zonas de
condiloma plano y
- Aparecen como zonas blanquecinas con el colposcopio.
- Test de Schiller o test del lugol:
- Con una solución de yodo se pintan los epitelios
- Color pardo-caoba en las zonas normales (ricas en glucógeno)
- Las áreas de condiloma plano o SIL no se tiñen porque tienen
muy poco glucógeno.
Inmunohistoquímica PAP Hibridación in situ de ADN PCR del VPH 16
Lesión blanquecina con AA Lesión lugol negativa

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Hibridación in situ (de Miguel Angel Dasi)
Permite la detección de genes o expresión de genes dentro del contexto morfológico de
la célula o tejido. Para conseguirlo se requiere que el ácido nucleico sea liberado de su
entorno celular para tener acceso la sonda, pero preservando la morfología para la
consiguiente interpretación y análisis. Para ello se emplean fijadores especialmente de
entrecruzamiento, como la formalina, paraformaldehido, glutaraldehido. El empleo de
proteasas, que facilitan el acceso de la sonda al ácido nucleico diana debe ser realizado
cuidadosamente para no provocar el desmantelamiento de la morfología celular. Se
recomienda el empleo de oligosondas.
Hibridación Southern Blot (SB)
O hibridación con sondas. Necesita de la extracción del ADN de la muestra con
fenol/cloroformo y de ¡a eliminación de ARN y proteínas de la misma por digestión
enzimática. Con la aplicación de endonucleasas de restricción-la enzima Pst 1 es la mas
utilizada, pues corta los genomas de HPVs en fragmentos de diferentes tamaños
ofreciendo un patrón característico en el gel de agarosa-el ADN se rompe, realizándose
una separación electroforética de los fragmentos en gel de agarosa los cuales pueden ser
visualizados con bromuro de etidio. El ADN se desnaturaliza y se transfiere a una
membrana realizándose una hibridación. El SB es el método de referencia actual para el
tipaje de HPVs. La especificidad de esta técnica es superior a cualquier otra debido a la
purificación extra del ADN por electroforesis. Además es el único método que permite
conocer si el genoma viral está en situación episomal o integrado en el ADN celular.
Las desventajas fundamentales del SB son su gran complejidad técnica, duración de la
misma y la necesidad de utilizar tejidos no fijados, puesto que existen protocolos para
material fijado, su sensibilidad se reduce muy notablemente.
Esta técnica consta básicamente de las siguientes etapas:
Target DNA
Biotin-labelled Probe
Fluorescein-conjugated
Streptavidin
Propidium
Iodide
Mountingmedium
Containing Propidium Iodide

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1. Digestión del ADN con enzimas de restricción tras
conseguir extraer un ADN de alta molecularidad.
2. Separación de los fragmentos obtenidos por medio
de una electroforesis en gel de agarosa.
3. Desnaturalización de los fragmentos separados y
cortados.
4. Transferencia de las cadenas simples a una
membrana de nitrocelulosa o nylon y fijación de las
mismas por medio de calor (800C).
5. Prehibridación con sondas de ADN inespecífico
para bloquear los lugares de unión inespecíficos que
pudiera haber en la membrana.
6. Marcaje de la sonda con nucleótidos radioactivos
(32 P normalmente).
7. Hibridación de la sonda marcada y desnaturalizada
con los fragmentos de ADN fijados a la membrana,
y lavado de la membrana para eliminar el exceso de
sonda o aquellas que hayan hibridado mal.
8. Revelado en placa radiográfica e interpretación de
los resultados.