La Biopsia embrionaria es una técnica que se utiliza en los laboratorios de reproducción asistida con el ánimo de mejorar la eficacia de los procesos de fecundación in vitro. Actualmente, entre las razones que hacen difícil apreciar el beneficio verdadero de esta técnica es su heterogeneidad metodológica, por lo que se pretende describir y valorar su utilidad a la luz de los conocimientos existentes.

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Biopsia Embrionaria “Aspectos Técnicos”
Embryo Biopsy “Technical Aspects”
Juan Manuel Moreno
Unidad de Reproducción Hospital Clínica Vistahermosa de Alicante. e-mail:lab@urvistahermosa.com
RESUMEN
La Biopsia embrionaria es una técnica que se utiliza en los laboratorios de reproducción asistida con el ánimo de mejorar la eficacia
de los procesos de fecundación in vitro. Actualmente, entre las razones que hacen difícil apreciar el beneficio verdadero de esta
técnica es su heterogeneidad metodológica, por lo que se pretende describir y valorar su utilidad a la luz de los conocimientos
existentes.
Palabras clave: Biopsia embrionaria, transferencia embrionaria, ácido Tyrode, DGP.
ABSTRACT
The Embryo Biopsy is a technique that is used in the Assisted Reproduction Laboratories with the spirit to improve the efficacy of the In
vitro fertilization cycles. At the moment, between the reasons that make difficult to appreciate the true benefit of this technique is its
methodological heterogeneity, reason why it is tried to describe and to value his utility to the light of the existing knowledge.
Key words: Embryo biopsy, embryo transfer, Tyrode´s acid, PGD.
INTRODUCCIÓN
La biopsia embrionaria es una técnica mente utilizada no sólo en parejas genéticas o adquiridas (Verlinsky et
que consiste en extraer una o dos cé- portadoras de enfermedades genéti- al., 2007), aunque algunas de estas
lulas de un embrión en división para cas hereditarias, anomalías cromosó- indicaciones no están exentas de po-
analizarlas genéticamente (diagnósti- micas o enfermedades monogénicas lémica tanto desde el punto de vista
co genético preimplantacional, DGP) (Renwick and Ogilvie, 2007) sino de su utilidad como desde la ética
y así poder seleccionar aquellos em- también para aumentar las tasas de (Coulam et al., 2007; Kuliev and
briones libres de una determinada al- implantación en parejas de fecunda- Verlinsky, 2005; Munné et al., 2006;
teración genética antes de ser trans- ción in vitro de mal pronóstico (Kuliev Patricio et al., 2007; Twisk et al.,
feridos al útero. El resultado posibilita and Verlinsky, 2005) tales como pa- 2006).
la identificación de anomalías en es- cientes de edad materna avanzada
tadios previos a la implantación, evi- (Rubio et al., 2005), con fallos de im- VALORACIÓN DE LOS MÉTODOS DE
tando el desarrollo de anomalías ge- plantación (Caglar et al., 2005), abor- REALIZACIÓN DE BIOPSIA
néticas y previniendo el aborto espon- tos previos (Munné et al., 2006) o fac-
táneo provocado por estas. tor masculino (Donoso et al., 2006). Según la literatura existente, es acon-
Incluso, se han incorporado otras in- sejable realizar la microinyección in-
La combinación de estos dos proce- dicaciones como la detección de de- tracitoplasmática (ICSI) para generar
sos, biopsia y posterior estudio gené- terminados tipos de cáncer (Davis et los embriones que se vayan a biopsiar,
tico, surgió en 1990 como alternativa al., 2006), enfermedades degenerati- ya que la ausencia de espermatozoi-
al diagnóstico prenatal en parejas con vas y tipaje de HLA para transplante des y células de la granulosa adheri-
un elevado riesgo genético de células madre procedentes de das a la zona pelúcida, presentes du-
(Handyside et al., 1990). sangre de cordón umbilical en niños rante una fecundación in vitro conven-
Actualmente, es una técnica amplia- afectos de patologías hematológicas, cional (FIV), evitarían riesgos de con-

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taminación durante el análisis genéti- el análisis genético. De hecho en un ejecutar, no de muy buenos resultados
co posterior (Lissens and Sermon, estudio (Evsikov and Verlinsky, 1998) debido a que el pequeño orificio que
1997; Sermon et al., 1998). donde se biopsiaron células proce- se crea por la aguja de disección, pro-
dentes de la masa celular interna del duzca la posterior estrangulación del
Hay estudios que demuestran que blastocisto se observó un porcentaje blastocisto cuando intenta eclosionar
la biopsia embrionaria en la etapa de elevado de blastocistos con mosaicis- (Cohen et al., 1990). Otro método me-
8 células. mo. Mas recientemente, Coulam cánico, con resultados prometedores es
(Coulam et al., 2007) ha demostrado el piezo-micromanipulador que consiste
la presencia de un 75% de embriones en un sistema de vibración de alta fre-
con una situación de mosaico, discor- cuencia que rompe la zona pelúcida. Sin
dantes cuando se hace biopsia de dos embargo su inconveniente principal es
células y estudio cromosómico de las que al igual que el láser es un método
mismas mediante FISH en día tres; costoso (Nakayama et al., 1999).
aunque un tercio de estos embriones
anómalos se autocorrigen (Munné et En otro estudio también prospecti-
al., 2005) no se puede excluir, en es- vo randomizado (Jones et al., 2006)
tos casos, la posibilidad de una diso- donde se evaluó el método químico
mía uniparental. Además, hay un es- con ácido de Tyrode y el láser en el
tudio experimental para la beta-talase- desarrollo del blastocisto, ambos mé-
mia (Kokkali et al., 2007) que sugiere todos dieron un resultado similar al no
que la biopsia del trofoectodermo pue- encontrar diferencias significativas en
no es perjudicial para el desarrollo
Embrión humano en el estadio de 8 células de ser más ventajosa que la biopsia del la proporción de blastocistos obteni-
posterior del blastocisto debido a que embrión en división con respecto al re- dos. El método químico, aunque re-
el índice mitótico es más alto, com- sultado del diagnóstico al obtener una quiere entrenamiento previo, tiene la
pensando así con mayor rapidez la cé- tasa de implantación del 47,6% frente ventaja de estar al alcance de cual-
lula perdida y además, la ausencia de al 26,7% procedente de la biopsia y quier laboratorio (Moreno and López,
compactación en los embriones per- análisis efectuado en día 3. 2006a) pero debemos tener cuidado
mite que dicho estadio celular sea el con el ácido pues corremos el riesgo
idóneo para realizar el proceso (Hardy Para poder extraer la célula del de que un volumen excesivo dañe al-
et al., 1990; Cieslak-Janzen et al., embrión es necesario realizar previa- guna célula de los embriones. Por otro
2006). mente la eclosión asistida que consis- lado, el láser endurece el área de la
te en crear, de manera artificial, un zona pelúcida expuesta (Malter et al.,
Al parecer, si se extrae una célula orificio en la zona pelúcida del em- 2001), pudiendo dificultar la posterior
en el estadio de cuatro células, duran- brión. En la literatura hay descritos va- aspiración de la blastómera. Sin em-
te el desarrollo del blastocisto se redu- rios métodos (mecánicos, químicos, bargo, las ventajas de utilizar el láser
ce la relación de la masa celular inter- con láser) y cada laboratorio usa uno frente al ácido de Tyrode son la veloci-
na con el trofoectodermo (Tarín et al., u otro dependiendo de la experiencia dad y precisión en su ejecución, no es
1992). No obstante, los embriones en del embriólogo que lo realiza y la dis- tóxico y puede que se constituya como
el estadio de 6 u 8 células presentan ponibilidad técnica. En cualquier método de elección al reducir la expe-
un cierto grado de compactación de- caso, el proceso requiere mucho cui- riencia técnica necesaria para llevarla a
bido a la formación de uniones celula- dado en su ejecución para que no se cabo (Joris et al., 2003). En otras pala-
res calcio-dependientes. Esto se pue- produzca la lisis de alguna de las cé- bras, puede estandarizar una técnica
de solucionar utilizando un medio que lulas del embrión y reste posibilidades que actualmente no está normalizada.
bloquee las uniones entre las células de éxito. Además, se ha valorado si la
(Dumoulin et al., 1998) y permita rea- eclosión asistida provocaba algún Varios estudios relacionan el tama-
lizar la extracción de forma correcta. efecto perjudicial en los embriones y ño del orificio en la zona pelúcida con
Sin embargo, para algunos autores se demostró que la técnica no afecta el incremento de la frecuencia de ge-
esto puede provocar la despolariza- en la tasa de anomalías cromosómicas melos monocigóticos (Hershlag et al.,
ción de las células interfiriendo en el en los nacidos vivos (Ma et al., 2006). 1999; Schieve et al., 2000) por lo que
desarrollo posterior del embrión se aconseja no realizar aberturas muy
(Antczak and Van Blerkom, 1999; Un estudio prospectivo randomiza- pequeñas que puedan causar la her-
Edwards and Beard, 1997; Tarín and do (Makrakis et al., 2006) que compa- niación del blastocisto.
Handyside, 1993). Otra posibilidad es raba los métodos mecánicos y el láser Tampoco son recomendables las
realizar la biopsia en la etapa de blas- dio como resultado una tasa de im- aberturas muy grandes ya que se co-
tocisto, en los días 5 y 6 de desarrollo. plantación significativamente más alta rre el riesgo de la salida de algún blas-
Se obtendría un mayor número de cé- en el grupo del láser, además de una tómero que comprometa la capacidad
lulas que permitiría una mayor fiabili- tasa de embarazo a término mayor de desarrollo del embrión. La abertura
dad en el diagnóstico aunque se dis- aunque no significativa. Puede que el del orificio debe ser aproximadamente
ponga de menos tiempo para realizar método mecánico, aunque fácil de _ partes el diámetro del blastómero a

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biopsiar. sión negativa al aspirar posteriormen- observando diferencias significativas
te el blastómero. A continuación, se en la tasa de implantación posterior
Una vez realizado el orificio, la cé- acerca la micropipeta a la abertura de (Van de Velde et al., 2000; Parriego et
lula puede extraerse mediante aspira- la zona pelúcida, se expulsa ligera- al., 2003), aunque hay autores que re-
ción del blastómero o desplazamiento mente medio para expandir la abertu- comiendan extraer dos células para
del mismo, sea con líquido o ejercien- ra que bloquearemos con ayuda de la evitar un posible error de diagnóstico
do presión con la micropipeta contra micropipeta. Posteriormente, se aspi- (Coulam et al, 2007). Sin embargo, en
la zona pelúcida. Nosotros, al igual ra el blastómero de forma suave, reali- este estadio se activa el genoma em-
que la mayoría de los centros, biopsia- zando un movimiento de arriba para brionario (Tarín and Handyside, 1993;
mos utilizando la aspiración con líqui- abajo, de tal manera que éste pueda Fraude et al., 1988; Mottla et al.,
do (Moreno and López, 2006b) pues adaptarse a la luz de la micropipeta y 1995) y la aspiración de dos células
se controla mejor el proceso sin llegar no se rompa. Para ello, se debe pre- afectaría a dicha diferenciación pu-
a dañar la célula extraída ni al embrión sionar el blastómero al tiempo que lo diendo dar lugar a blastocistos con
biopsiado (Cieslak-Janzen et al., aspiramos poco a poco una menor proporción en el número
2006). de células de la masa celular interna y
del trofoectodermo, comprometiendo
Para realizar el proceso de biopsia así su capacidad de implantación.
es necesario usar un medio suple- A veces, es necesario separar la
mentado con un 10% de HSA para micropipeta intentando arrastrar el Los resultados de un ciclo de DGP
evitar que el embrión y el blastómero blastómero hacia el exterior del em- también van a estar influenciados por
extraído se fijen a la placa. Además, brión pero en este caso hay que evitar el número de embriones que se pue-
debe llevar como solución amortigua- la aspiración porque se corre el riesgo dan analizar en cada caso. Por ello,
dora HEPES que impida cambios de hay grupos que aconsejan cancelar
pH durante la realización de la técni- aquellos ciclos en los que se espera
ca, e incluso carecer de Ca y Mg para obtener menos de 6 ovocitos, ya que
bloquear las uniones entre los blastó- las expectativas de transferencia y
meros del embrión y así favorecer la embarazo se reducen considerable-
extracción. No obstante, es recomen- mente pues no todos los ovocitos se
dable que el embrión no esté más de fecundan, ni todos los embriones son
10 minutos en estos medios ya que aptos para realizar el proceso
pueden comprometer el desarrollo in (Vandervorst et al., 1998; Platteau,
vitro posterior. 2006). Incluso, durante el proceso al-
gún embrión puede dañarse acciden-
La biopsia embrionaria se puede talmente, comprometiendo así su des-
efectuar con ayuda de un microinyec- arrollo.
tor pero nosotros utilizamos un siste- Durante la biopsia se debe presionar el
de lisis. Una vez extraído el blastóme-
ma bucal blastómero al tiempo quepróximo al em-
ro, se deja en el medio lo aspiramos poco a
poco.
brión. COMENTARIOS FINALES
de fabricación propia que nos permite Por último, se devuelve el embrión
realizar el proceso de una forma rápi- biopsiado a la placa de cultivo hasta La incorporación de la biopsia em-
da, económica y controlada (Moreno obtener el diagnóstico. brionaria a los Laboratorios de
and López, 2006b). Mediante acción Fecundación in vitro y posterior estu-
controlada con la boca, se aspira en el El número de células a extraer de dio genético parece mejorar en el re-
interior de la micropipeta la cantidad cada embrión va a depender de la ca- sultado general de los programas de
lidad del embrión a biopsiar y del aná- reproducción asistida pues favorece
un embarazo sano evolutivo con un
menor gasto psicológico, fisiológico, e
incluso económico. Es una técnica
ampliamente utilizada no sólo en pa-
rejas con cariotipo alterado (Renwick
and Ogilvie, 2007) sino también para
aumentar las tasas de implantación en
parejas de fecundación in vitro de mal
pronóstico (Kuliev and Verlinsky,
2005; Rubio et al., 2005; Caglar et al.,
2005; Munné et al., 2006; Donoso et
al., 2006). Incluso, se han incorpora-
suficiente de medio que evite la pre- lisis genético que se vaya a realizar, no do otras indicaciones como la detec-
Sistema bucal de fabricación para biopsia Blastómero una vez biopsiado
embrionaria

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ción de determinados tipos de cáncer gene expression first occurs betwe- Edwards R, Beard H. Oocyte polarity
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dores (Twisk et al., 2006) se ha con- Ilkevitch Y, Bernal A, Morris R, embryos sexed by Y-specific DNA am-
cluido que en los casos de edad mater- Verlinsky Y. Multiple micromanipu- plification. Nature 1990; 344:768-70.
nal avanzada, fallos repetidos de FIV, lations for preimplantation genetic
abortos de repetición y factor masculi- diagnosis do not affect embryo de- Hardy K, Martin KL, Leese HJ, Winston
no su eficacia sigue siendo confusa. velopment to the blastocyst stage. RM, Handyside AH. Human preim-
De hecho, los datos disponibles para la Fertil Steril 2006; 85:1826-29. plantation development in vitro is not
edad maternal avanzada no demostra-
adversely affected by biopsy at the
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tanto, concluían que hasta que no se Impairment of the hatching process
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debemos evitar su uso rutinario. provement of implantation by assis- Scholl GM, Rawlinson K, Kvapil G.
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