3. Histones:
Proteins that play an essential role in the
condensation of the chromatin into
chromosomes.
Cancer:
It is an alteration in the cells that produce an
uncontrolled mitosis. Generally the cells formed
malign tumors.
4. Autoantibodies:
It is an antibody that attacks the own body. Their action
is run to the antigens from the same body.
Glycoxidation:
It is composed by two processes: oxidation and
glycation.
Glyoxidation:
Induced structural alterations in proteins that are
known to form advanced glycation end products with
implications in various pathological disorders.
7. MODIFIED
HISTONES (MG-
H2A)
Could be used
as biomarkers
Because they
generated
specific
antibodies
against them
They are close
to the
processes of
carcinogenesis
In different
types of
cancer
May activate
T cells and B
cells
12. ● Determinación de concentración
proteica:
➔ Coeficiente de absorción molar de
histonas H2A de timo de becerro
➔ Absorbancia de 280 nm.
➔ El peso molecular calculado fue de
14,004 Da.
● Modificación de histonas H2A por
metilglioxal
13. ● Estudios de desnaturalización térmica:
➔ Espectroscopia Far-UV CD
➔ Absorbancia de 222 nm.
➔ Temperatura de 20ºC a 80ºC
● Estudios de microscopía de transmisión electrónica
➔ Histona natural Vs histona modificada con MG
➔ Voltaje de 80 kV. y 5 ul de muestra proteica
➔ Imágenes aumentadas 20,000 veces
14. ● Estudios de inmunización:
5 dosis a
intervalos
semanales.
Conejos blancos
(hembras) de
Nueva Zelanda
H2A natural
MG-H2A
Complejo de
Inyección
intramuscular
Usaron Freund's complete adjuvant
en 1a inyección
Usaron Freund’s incomplete
adjuvant
Luego
15. ● Aislamiento de IgG:
➔ Cromatografía de afinidad en columna de agarosa
Freund’s adjuvant: Solución de antígenos emulsificados en aceite
mineral.
16. Freund’s complete adjuvant: . ( FCA) Compuesto por micobacterias inactivadas
y deshidratadas. Generalmente M. Tuberculosis
Freund's incomplete adjuvant (FIA) Tiene ausencia de componentes
micobacterianos. (emulsión de agua y aceite)
Usado como inmunopotenciador. Importante en experimentos con
enfermedades autoinmunes
17. ● Técnica ELISA:
Técnica
Sustrato específico
sobre la enzima que
producirá
Color
determinado
Enzima
Interrupción de
reacción antígeno-
anticuerpo
Anticuerpo
o antígeno
Basada en
el uso de
Marcado
con una
Se agrega
Al estar uno estos
componentes
marcado y fijado a un
soporte
Se usa para determinar si un anticuerpo particular
está presente en la muestra de sangre de un
paciente.
18. ● SDS- PAGE:
Técnica
Separación de
moléculas
cargadas
Mayor velocidad
cuanto mayor es la
carga de la
molécula
Migración en un
campo eléctrico
De
Por
En la electroforesis en gel de
poliacrilamida con SDS, la separación
de proteínas se hace en función de la
masa molecular.
Se presenta
19. ● Western blot
Una muestra
determinada.
Mediante una
electroforesis en
gel
Detectar
proteínas
específicas en
Técnica
analítica
Usada para
Se separan las proteínas
atendiendo al criterio que
se desee Peso molecular
Estructura
Hidrofobicidad
Se detecta la unión antígeno-
anticuerpo por actividad enzimática
o fluorescencia.
20. ● Análisis Western blot:
Usada en el estudio para
identificar la especificidad de
los anticuerpos generados
en presencia de MG-H2A y
H2A Nativa.
21. ● Estudios clínicos: Muestra
climatizada
a 56ºC por
30 min
Almacena
da a 20ºC
con sodio
al 0,2 %
n=98
SUERO DE
PACIENTES
n=35
NORMALES
CON CÁNCER
57 Mujeres Edad
35+/-13
31 hombres edad de
36 +/- 12 años
15 hombres
20 Mujeres
Rango edad 35 +/- 19
22. ● Shift assay= Ensayo de cambio en la corrida electroforética
Técnica
Fragmentos de
DNA o RNA
marcados
Presencia de
extractos
celulares.
Interacciones
entre
proteínas y
ADN o ARN
Utilizada
para investigar
Se basa en
Una corrida
electroforética
entre
23. ● Shift assay: 3 líneas de corrida
1. Solo AND
2. ADN más proteínas que no interaccionan
3. ADN y proteínas interactuando
Fue realizado para
detectar si había unión
antígeno-anticuerpo y
complejos inmunes
formados.
25. El resultado del estudio indica la generación de
autoanticuerpos dirigidos contra la histona
modificada por glicoxidación en el suero de
pacientes con cáncer.
26. Fig. 2
Se genera agregación no en fibrillas en la MG-H2A y no
agregación en la H2A nativa.
28. Fig. 10
Aumento de la [ ] de la interacción IgG con MG-H2A. Disminución de
antígeno no ligado.
Débil interacción de IgG con H2-A de pacientes con cáncer. Alta [ ]
del anticuerpo.
29. Las 3 gráficas corresponden a los autoanticuerpos nativos y autoanticuerpos contra
MG-H2A en diferentes tipos de cáncer: prostático, de seno, de la región de la cabeza
y el cuello.
En todas las gráficas hay un aumento de autoanticuerpos contra MG-H2A
Autoanticuerpos MG-
H2A
Anticuerpos nativos
31. ‘’The modified histone was found to be highly immunogenic that generates specific
immune response.’’
‘’The anti-methylglyoxal modified H2A antibodies were found in the circulating
antibodies in various types of cancer patients.’’
‘’Clearly indicate the formation of highly specific antibodies in cancer patients with
cross reactive tendencies with other glycated proteins and nucleic acids.”
32. AUTHOR WHAT SHE/HE SAID YES
/NOT
Z. Makita, H.
Vlassara, A.
Cerami, R.
Bucala
‘’Glycoxidation reactions induce structural perturbations in
proteins and produce multi-specific natural antibodies with
implications in a variety of pathological disorders’’
Y
S. Ghosh, N.K.
Pandey, A. Singha
Roy, D.R. Tripathy, A.
K. Dinda, S.
Dasgupta,
“Though , the literature review shows the fibril type amyloid aggregate
formation as a dominant structural modification in the glycated proteins
having toxic implications in a variety clinical disorders, it appears that
amyloid formation is not the sole consequence of glycoxidation, instead
it can also promote the formation of cross-linked oligomers of
amorphous type as earlier observed in case of hen egg white lysozyme
glycation”.
Y
33. AUTHOR WHAT SHE/HE SAID YES/
NOT
A.R. Mir
‘’The thermal denaturation studies by Far-UV CD
spectroscopy infer towards an enhanced thermal stability
of histone H2A upon glycoxidation which may be due to
the induction of alpha and beta structural patterns in H2A
upon modification’’
Y
R. Abe, S.
Yamagishi
“Earlier it has been reported that advanced glycation end
products (AGEs) have a role in development and
progression of cancer and there is a link between
hyperglycemic conditions created in diabetes and
increasing risks for cancers in patients”
Y
35. 1. This study is useful because of the possibility of identify cancer early and
make opportune treatments.
2. It is important to relationed different illnesses with AGEs, because that could
be a way to find better treatments, and to understand the way how
glycosylation affects the organism.
3. The recognition of structural changes in cellular components are one of the
main causes of activation of the immune system.
4. According to this study you could expect that the measurement of the
immunogenicity of molecules, in this case the histones, be used as a
biomarker in early recognition of autoimmune diseases such as cancer.
