Este documento describe una investigación sobre los efectos de las proteasas de veneno de serpiente sobre las cadenas de fibrinógeno humano. Los investigadores encontraron que el veneno de Echis carinatus actúa completamente sobre la cadena beta de fibrinógeno y parcialmente sobre la cadena gamma a través de dos metaloproteasas presentes en el veneno.

1. Cortelazzo A et al. Jonathan Cardona Vélez. Medicine student. III Semester. Medellín - Colombia. 2010.

2. Proteases: Are enzymes that break peptide bonds of proteins. Use a water molecule and therefore are classified as hydrolases. Fibrinogen: A protein produced by the liver that helps stop bleeding by helping blood clots. Key words: Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5.

3. Introduction. Venoms from Viperidae family contain a large variety of proteins and peptides affecting the haemostatic system. Activity of enzymes functioned independently of the native fibrinolytic system and produced rapid and consistent thrombolysis. Thus it is important to consider the proteolytic events of the proteinases on plasma proteins. Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5.

4. General Objective. Determine the effects of snake venom proteases on human fibrinogen chains through the proteomic approach of molecular biology test. Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5.

5. Materiales y métodos. Muestra de plasma humano de la sangre de un voluntario sano. Veneno Echis carinatus (EV). Cada muestra fue llevada a cabo bajo las mismas condiciones. Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5.

6. Materiales y métodos. Veneno Echis carinatus crudo. Nombre común: Saw- scaled viper. Familia: Viperidae. Subfamilia: Viperinae. Género: Echis. Especie: Carinatus. Subespecie: Sochureki. Taxonomía: ID. 124223 . La sangre se recogió en dos tubos de ensayo con citrato como anticoagulante. EV fue preparado en solución fisiológica especial. Echis carinatus. Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5.

7. Materiales y métodos. Tipo de electroforesis desnaturalizante por calor usada para caracterizar mezclas complejas de proteínas en presencia de agentes que destruyen los puentes disulfuro, y las separan como cadenas polipeptídicas aisladas. Se utilizó para conocer las óptimas condiciones de plasma y EV por una unidad de tiempo, en donde se revelaran cambios significativos de las bandas proteicas. Electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Imagen de SDS PAGE. Analizar por electroforesis bidimensional (2 DE). Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5.

8. Materiales y métodos . Electroforesis de dos dimensiones (2 DE). La electroforesis bidimensional se basa en separar las proteínas en una mezcla según de acuerdo a dos propiedades moleculares, el punto isoeléctrico y la masa relativa de cada proteína. Permitió evidenciar de forma específica los cambios en las cadenas de fibrinógeno debido al efecto proteolítico del EV. Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5.

9. Materiales y métodos . Digestión tríptica e identificación de proteínas MALDI- TOF MS. Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5. Técnica utilizada en espectrofotometría de masas que permite el análisis de macromoléculas que tienden a hacerse frágiles y fragmentarse cuando son ionizadas por métodos más convencionales. Espectrómetro de masas MALTI- TOF. Se utilizó para identificar modificaciones en las proteínas como la extensión de la cobertura de secuencia y el número de péptidos.

10. Resultados . Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5. Figura 1. Estructura del fibrinógeno. D y E representan los dominios.

11. Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5. Resultados . Electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Figura 2. SDS-PAGE- procedimiento preliminar para estandarizar la electroforesis bidimensional.

12. Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5. Resultados . 0,6 μ g de plasma + 0,22 μ g de EV, incubados por 60 minutos a 37 °C. CONDICIONES IDEALES. Se revelan cambios importantes. BANDAS PROTÉICAS. Electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE).

13. Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5. Resultados . Electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). “ Volumen relativo de las bandas”.

14. Resultados . Figura 3. Electroforesis de dos dimensiones. Plasma control, EV con plasma, EV solo. Electroforesis de dos dimensiones (2 DE). Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5.

15. Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5. Resultados . Mejor evidencia de cambios en las cadenas de fibrinógeno. Cadena de fibrinógeno β (FIBB). Cadena de fibrinógeno γ (FIBG). Representada en la figura 2 con los números 1, 2 y 3. Representada en la figura 2 con los números 4, 5, 6 y 7. Electroforesis de dos dimensiones (2 DE). DESAPARECIÓ. DISMINUYÓ.

16. Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5. Resultados . Tabla 1. Resumen de las proteínas identificadas, donde se muestran variaciones cualitativas y cuantitativas de importancia. *p<0,05, **p<0,01. Cambios significativos de la FIBG.

17. Resultados . Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5. EL EV ACTÚA COMPLETAMENTE EN LA FIBB Y ACTÚA DE FORMA PARCIAL EN LA FIBG.

18. Discussion. Cortelazzo A, Guerranti R, Bini L, Hope-Onyekwere N, Muzzi C, Leoncini R et al. Blood Transfus. 2010 Jun; 8(3):120-5. RESEARCHERS. ARGUMENT. CHECK. Rooney MM, Farrell DH, Van Hemel BM, et al. “ Fibrinogen is a plasma protein that interacts with integrin to mediate a variety of platelet responses including adhesion, aggregation, and clot retraction ”. Agree. Forsyth CB, Solovjov DA, Ugarova TP, Plow EF. “ The proteolysis of the fibrinogen segments can lead to the loss of its property to interact with blood cells”. Agree. Di Cera E. “ Fibrinogen is the specific substrate of the thrombin, a serine protease and the key enzyme of blood coagulation”. Agree. Wu WB, Chang SC, Liau MY, Huang TF. “ The graminelysis I, a metalloprotease, acts as EV, on FIBB and has a little effect on FIBG”. Agree.

20. Mapa conceptual.

21. La noche estrellada , 1889. Van Gogh. MOMA museum, New York . “ A menudo pienso que la noche es más viva y coloreada que el día.” Vincent van Gogh.