Metodologia y descripcion de la electroforesis y cromatografia en columna y de permeacion en gel

1. UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE FILOSOFÍA LETRAS Y
CIENCIAS DE LA EDUCACIÓN
PEDAGOGÍA DE LAS CIENCIAS
EXPERIMENTALES QUÍMICA Y BIOLOGÍA
Electroforesis, cromatografía en columna
y de permeacion en gel
Daniel Jaramillo
2do Semestre
Paralelo “A”

2. Cromatografía en columna
En este tipo de cromatografía, la fase estacionaria utilizada, es decir,
el absorbente, se coloca en el interior de una columna de vidrio, la
cual finaliza con una llave para controlar el paso de sustancias al
exterior de la columna. La fase estacionaria se impregna con el
eluyente o fase móvil. Seguidamente la mezcla orgánica que nos
interesa separar la depositamos por la parte superior de la fase
estacionaria, y así la fase móvil podrá ir atravesando el sistema.
Los compuestos que se encuentran disueltos en la fase móvil, poco
a poco saldrán de la columna cromatográfica, y se recogen en
fracciones. Las fracciones menos polares, que son por lo general las
que se retienen poco o nada en el absorbente, serán las primeras en
salir de la columna

3. En cambio, las sustancias más polares, quedan retenidas
por más tiempo en el absorbente, y a menudo es
necesario el uso de diferentes disolventes con la finalidad
de incrementar su polaridad para que sean arrastradas
por estos.
El absorbente mayormente utilizado para las
cromatografías en columna, es el gel de sílice
Cuando vamos a realizar una cromatografía en columna,
lo primero que debemos hacer es elegir un disolvente
adaptado para nuestro caso, para así optimizar la
separación de los componentes de la mezcla
Generalmente la cromatografía a media presión, produce
mejores resultados que la cromatografía por gravedad, y
además, al ser más rápida, es la más utilizada.

4. ELECTROFORESIS
La mayoría de las biomoléculas poseen una carga eléctrica, cuya magnitud
depende del pH del medio en el que se encuentran. Como consecuencia, se
desplazan cuando se ven sometidas a un campo eléctrico.
Se denomina electroforesis a la técnica mediante la cual se separan las
biomoléculas en disolución cuando se ven sometidas a un campo eléctrico.
Se trata de una técnica fundamentalmente analítica, aunque también se
puede realizar con fines preparativos.
Cada molécula se desplaza por efecto del campo, alcanzando rápidamente
una velocidad constante al equilibrarse la fuerza impulsora (fuerza del
campo eléctrico) con la resistencia al avance (fuerza de fricción o
rozamiento) impuesta por el medio en el que se desplaza.

5. El coeficiente de fricción mide la resistencia intrínseca debida a las
características de cada molécula, siendo éstas esencialmente su
forma y su tamaño. Así, por ejemplo, las moléculas grandes y de
forma irregular poseen un mayor coeficiente de fricción que las
pequeñas y compactas.

6. La muestra debe situarse en o sobre un medio soporte, principalmente para
evitar perturbaciones mecánicas y corrientes de convección durante la
separación. En algunos soportes (papel o similares) la muestra queda sobre
la superficie y avanza a lo largo de ella, con escasa fricción, por lo que el
mecanismo principal de separación es la magnitud de la carga de cada
componente de la muestra

7. CROMATOGRAFIA DE PERMEACION EN GEL
La cromatografía de permeacion en gel, también conocida como cromatografía de
exclusión es una variante de la CLAE que consiste en una columna cromatográfica
empacada de tal manera que las partículas de dicho empacamiento tienen
diferentes tamaños de poros o de redes de poros con el fin de que las moléculas de
soluto sean retenidas o excluidas basándose en su forma y tamaño y no en el peso
molecular. Bajo este entendido, las moléculas de mayor tamaño no caben dentro de
los poros y son arrastrados alrededor de la fase estacionaria, por lo que son
excluidas y eluyen en el volumen de “cama de vacío” de la fase móvil. Por el
contrario, las partículas de menor tamaño eluyen hasta el final porque tiene más
espacio de columna que recorrer debido a un fenómeno de difusión hacía los poros
que tienen accesibles. Las moléculas de tamaños intermedios tardan diferentes
tiempos en eluir, debido a la cantidad de poros por los que puedan pasar.

8. Empaquetamientos de columna: Existen distintos tipos de
empacamientos columna. Entre ellos están los polímeros
macromoleculares semirrígidos, los entrecruzados, las
sílices rígidas o las de “poro controlado”. Los materiales
semirrígidos se hinchan ligeramente se debe tener cierto
cuidado en su uso ya que se limitan a una presión de
300psi. Las cuentas de poli estireno parcialmente sulfonado
que tienen un tamaño usual de 5μm, son buenas para
usarse con sistemas acuosos mientras los no sulfonados
son compatibles con sistemas no acuosos

9. Disolventes: La cromatografía de exclusión requiere un
solo disolvente durante el análisis en el cual se pueda
disolver la muestra. El único inconveniente que pude
presentarse con los disolventes es la relación de
viscosidades. Cuando la viscosidad de la muestra
inyectada difiere mucho con la viscosidad de la fase móvil
se pueden dar, una distorsión en los picos
cromatográficos y cambios anómalos en los tiempos de
retención

10. BIBLIOGRAFIA
Universidad Autónoma de México.( 2007 ) Técnicas Cromatograficas. [
archivo PDF ] . México . Recuperado de :
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.
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