VacunasVPH - Modo de compatibilidad - Reparado.ppt

VacunascontraVPH y
CáncerCérvico Uterino
DELEGACIÓN REGIONAL ESTADO DE MÉXICO ORIENTE
Hospital General Regional N° 196
U.V.E.H

CENTRO DE INVESTIGACIONES SOBRE ENFERMEDADES INFECCIOSAS

CONTENIDO
1.Respuesta Inmune a la Infección
por el virus del Papiloma humano.
2. Desarrollo de Vacunas Génicas
3. Status de las vacunas profilácticas
y Terapéuticas
4. Impacto de las Vacunas en México

El CaCu es la Enfermedad viral que
más mujeres mata en México

Clasificación del VPH de acuerdo
al riesgo de inducir una neoplasia
Grupo de VPH Tipo de VPH
Alto riesgo
Riesgo intermedio
Bajo riesgo
16, 18, 45, 56
31, 33, 35, 51, 52, 58
6, 11, 42, 43, 44

2000
7906/1
1000
6000
5000
4000
3000
7000
VPH 16
E6
E7
E4
E1
E5
E2
L2
L1
Transformación e
inmortalización celular
Replicación
Regulación
Regulación de la
Transcripción viral
Proteína principal
de la cápside
Proteina secundaria
de la cápside
Estimulo de
crecimiento
Alteración de la
Matriz Intracelular
Biología Molecular del VPH
RLC p53
Rb

• Inicio temprano de vida sexual activa
• Multiples parejas
• Multiparidad
• Alcoholismo
• Tabaquismo
• Uso de anticonceptivos orales
• Desnutrición
• Stress
• Virus del Papiloma Humano*
*Una Causa Necesaria pero no Suficiente
INMUNOSUPRESIÓN
FACTORES DE RIESGO EN
CANCER CERVICAL

Infección
por
HPV
Infección
Persistente
NIC
de bajo grado
NIC
de alto grado
Cáncer
invasor
Infección
transitoria
•Tipo de HPV
• Edad de la infección
• Factores inmunológicos
• Factores hormonales
• Factores genéticos
4 a 5 años
9 a 19 años
Factores
de Riesgo
80%
20% 1.2
%
•98.8%
• Inmunología curativa.
Inmunosupresión
Selectiva. Evasión
Inmunidad
insuficiente
Historia Natural del Cáncer Cérvico uterino

D
GANGLIO LINFATICO V. Madrid,
2005
INF-g
T
CD4+
IL-2
CD40L
CD28-CD80
IL-
12
T
CD8+

PRESENCIA DE LINFOCITOS T EN
ESTROMA DE BIOPSIAS CERVICALES
LIEBG LIEAG CaCU
CD3
CD4
CD8

PROLIFERACION DE LINFOCITOS T
PERIFERICOS DE PACIENTES CON LIE Y CaCU.
0
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
S/MIT
SANA
C/MIT
SANA
(12)
S/MIT
MIOMA
C/MIT
MIOMA
(1)
S/MIT
LIEBG
C/MIT
LIEBG
(6)
S/MIT
LIEAG
C/MIT
LIEAG
(4)
S/MIT
ADENO
C/MIT
ADENO
(4)
S/MIT
CaCU
EPID
C/MIT
CaCU
EPID
(10)
A-CD3 0.5 ug/mL
PHA 5 ug/mL
PACIENTES CON LIE O CaCU/MITOGENO
MC Cinthya Diaz B

CELL-MEDIATED IMMUNITY IN
PATIENTS WITH CERVICAL
CANCER
GROUPS TOTAL-CELLS (mm3)
B-Cells ADCC NK-Cells IL-2 U/ml
Healthy (31) 12.3 + 1.3 62.0 + 1.4 40.0 + 2.1 7.3 + 3.0
High Grade 11.1 + 0.6 53.0 + 2.6 30.1 + 3.2 5.8 + 1.2
(20)
Cervical Cancer 11.0 + 1.0 52.0 + 1.5 25.0 + 2.5 3.6 + 1.1
(30)
Values of Immune Parameters.

MECANISMOS DE EVASION DE RESPUESTA INMUNE
TGF-b
IL-10
T-lymphocyte

EXPRESION DE CITOCINAS EN PACIENTES CON CaCu

Dr. JM Alcocer
DETECCION DE LA PROTEINA IL-10
POR INMUNOHISTOQUIMICA
EN CANCER CERVICAL

0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
NORMAL BAJO
GRADO
ALTO
GRADO
CaCu
0%
42.5 %
62.5 %
90 %
PORCENTAJE DE EXPRESION DE IL-10
EVOLUCION DEL CANCER CERVICO UTERINO
MC Víctor H. Bermudez
Porcentaje de
Expresión de IL-2
PREVALENCIA DE LA EXPRESION DE IL-10
DURANTE LA PATOGENESIS DEL CANCER CERVICAL

Controles
LIS-BG
LIS-AG
CaCU
LIS-BG: Lesiones intraepiteliales de bajo grado
LIS-AG: Lesiones intraepiteliales de alto grado
CaCU: Cáncer cervico uterino
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Controles LISbajo grado LISalto grado CaCU
%
de
pacientes
que
expresan
TGF-b
Diferentes estadios de la evolución
del cáncer cervical
QFB. Alma Vazquez
EXPRESIÓN DEL RNAm DE TGF-B1 EN
LA EVOLUCIÓN DEL CÁNCER CERVICAL

RESPUESTA INMUNE
EN CANCER CERVICAL
CITOCINAS
Th 1 Th 2
RESPUESTA INMUNE POLARIZADA HACIA
LA RESPUESTA DE ANTICUERPOS
IL-2
IL-12
IFNg
TNF-
IL-4
IL-6
IL-10
TGF-b1
Dr. Juan Manuel Alcocer

Linfocito T
Cooperador (Th1)
RESPUESTA INMUNE
ANTITUMORAL EN CaCU
IL - 2
IFN-g
TNF
IL - 4, IL-13, IL - 10
TNF
IL-1
IL -4
IL - 6
Linfocito B
Células NK
Linfocito T
Cooperador (Th2)
Macrófago
Linfocitos T
Citotóxicos
TUMOR
HPV
T
CD8+
IL - 4
IL-12
IL - 2
IFN-g
TNF
IL - 4,
IL- 13,
IL - 10
IFN-g
TGF-b
IL-10
Anticuerpos
NK

Célula Tumoral
Macrófago Células NK
IgG
IgM
Células dendriticas
Respuesta inmune
humoral
IL-10/TFG-b
Respuesta inmune
celular
Linfocitos T
CD4+ CD8+
IL-1, IL-2, IL-3, IL-6, IL-8, IL-12,
TNF-, INF-g y el GM-CS
MHC clase I y II, ICAM, B-7
EFECTOS NEGATIVOS SOBRE
MECANISMO DE EVASION DE LA
RESPUESTA INMUNE
Linfocitos B
(Th2)
M. en C. Victor H. Bermudez
M. en C. Oscar Peralta Zaragoza
E2, E6, E7
HPV

• La proteína E5 del VPH induce disminución de la expresión de INF-g
• La proteína E6 induce la disminución de la expresión de las moléculas TAP
• La proteína E2 induce aumento de la expresión de IL-10 y TGF-b1
• Las proteínas E6 y E7 inducen aumento de la expresión de TGF-b1
• La proteína L1 de la capside induce la producción excesiva de IL-10 y TGFb
VPH INDUCE DE
INMUNOSUPRESIÓN

Sobrevivienciaal CaCua 5 años
despuésdeTerapia
 Lesiones de Bajo y Alto grado 100%
 Carcinoma in situ 100%
 Cáncer localizado grado I a IIa 80%
 Cáncer Avanzado grado IIb a III 40%
 Cáncer Avanzado grado III a IV 30%
 Cáncer Avanzado con metástasis incurable
 Cáncer cervical total 40%
 Cada año mueren 4,500 mujeres en México

Una Nueva Alternativa de Vacunación
VACUNAS
DE DNA

Fundamentos para el diseño lógico de una vacuna
1. Proteínas Estructurales Virales son el blanco mayor para
Vacunas Profilácticas. Inmunidad mediada por Anticuerpos
2. Proteínas No-estructurales son el blanco mayor para
Vacunas Terapéuticas. Inmunidad Mediada por células T
L1
L2
E1
E2
E5
E4
E6 E7
Proteínas Estructurales Proteínas No-estructurales
PARADIGMAS PARA EL ENTENDIMIENTO
DE LA INTERACCION HPV-HUESPED Y
TUMOR-HUESPED

How the Immune System “Sees” and Responds to Tumor Antigens
Cervical cancer
AKN
A
IL-12
Adeno-E2
(Apoptosis)

ESTRATEGIAS DE TERAPIAGÉNICA
EN CÁNCER CERVICO UTERINO
 RNA de Interferencia (RNAi)
 Vacunas de Vectores Adenovirales
 Vacunas de ADN
 Inmunoterapia: Antígenos virales

Ca Cu
Infección por VPH
(alto riesgo)
VPH-16
RNAm E7
RNAm E6 Oncoproteína
E6
Oncoproteína
E7
p53
pRB
RNA de
interferencia
Bloqueo de la
traducción
Degradación
Secuestro
Arresto del
Ciclo celular
Reparación
del daño
Apoptosis
Transformación
Inmortalización
Integración
Posible erradicación
del tumor
Estrategia de Terapia
contra Ca Cu
Paciente
MARCO CONCEPTUAL

Control (0 hrs)
Control (24 hrs) E6 16 (24
hrs)
Control (36 hrs) E 16 (36 hrs)
hrs)
hrs)
INDUCCION DE MUERTE CELULAR POR E6 RNAi
DE HPV 16 EN CELULAS HPV-16 POSITIVAS
VICTOR

ESTRATEGIAS DE TERAPIAGÉNICA
EN CÁNCER CERVICO UTERINO
 Vacunas de ADN
 Inmunoterapia: Antígenos virales

HPV
Célula Tumoral
TERAPIA GENICA CON VECTORES
ADENOVIRALES
Adenovirus
. AdE2HPV16
. AdE2mIL-12
. Represión de la expresión de E6 y E7
. Apoptósis de la célula tumoral
. Represión de la expresión de E6 y E
. Apoptósis de las células tumorales
. Disminución de la masa tumoral
. Inhibe angiogénesis
AdE2HPV16 (E2)
E2 E2 E2 E2 SP1 SP1
5´ mIL-12
pCMVE2 E2 HPV 16
AdE2mIL-12 (IL-12)
Activador
Transcripciónal
1
2
E2

E6
E7
Bcl-2
Bax
b-actina
PM C- 0 12 18 24 36 48 60 72 horas
0
20
40
60
80
100
120
140
160
0 12 18 24 36 48 60 72
TIEMPO (Horas)
UNIDADES
RELATIVAS
E6
E7
Bcl-2
Bax
A
B
INDUCCION DE APOPTOSIS MEDIANTE
LA PROTEÍNA E2 DE HPV

24 H
36 H
48 H
60 H
72 H
INDUCCIÓN DE APOPTOSIS POR E2
Control
Luz blanca Fluoresencia
ENSAYO DE TUNEL

Caspasas Efectoras
(Caspasas-3,-6,-7)
Pro-caspasa 8
FADD
caspasa 8
TNF/Fas/TRAIL
A P O P T O S I S
VIA EXTRINSECA
VIA EXTRINSECA DE LA APOPTOSIS
E2 HPV

NATURE 410:383-387, 2001
• Aumenta la expresión de
moléculas HLA clase I y II.
• Induce la expresión de
moléculas co-estimuladoras
CD80, CD86.
• Por tanto, favorece la
respuesta inmune secundaria.
• En consecuencia, es un buen
candidato para uso en Terapia
Génica contra cáncer.
M en C Liliana Guzmán Rojas
DESCUBRIMIENTO DE UNA NUEVA
MOLÉCULA: AKNA, Factor de Transcripción.

Localización Cromosomal
deAKNA: 9q32

A K N A
C E L U LA S T U M O R A L E
M en C Guillermo Perales
AKNA
Vector de
ADN
CD4+ CD8+
Linfocito T
cooperador
Linfocito T
Citotoxico
CPA
IFN-g
Induce expresión
Moléculas
Coestimuladoras
AKNA
Inducción de la inmunogenicidad del tumor
mediante el regulador transcripcional AKNA:
Aumento de la expresión de proteínas
inmunomoduladoras

AKNA INDUCE LA EXPRESION
DE CD80, CD86, MHC CLASE I y II

ESTRATEGIAS DE TERAPIA GÉNICA EN
CÁNCER CERVICO UTERINO
 Vacunas de ADN
 Inmunoterapia: Antígenos Virales

Inmunoterapia usando Antigenos
Virales
Cervical cancer
IL-12
E7

Administracion intramuscular de
3 dosis de 100 µg de E7 e
IL-12 en los días 1, 3, 5
0 10 20 30 40
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
E7/IL-12 Plasmid
E7 Plasmid
Days Post Tumor Inoculation
Survival
Percent
Control Plasmid
nducción de actividad antitumoral por la administración
de los plasmidos pcDNA3E7mutante y pNGVLIL-12
Celulas Tumorales
BMK16Myc
Analisis de sobrevivencia
a 40 días
E7
IL12

0
500
1000
1500
2000
2500
3000
3500
Days Post Tumor Challenge
Mean
Tumor
Size
(
mm³
)
E7/IL-12 Plasm
E7Plasmid
Control Plasm
Celulas Tumorales
BMK16Myc
Medición del tamaño del tumor
hasta los 40 días
E7
IL12
La inducción de actividad antitumoral inhibe el
desarrollo del tumor por la administración de
pcDNA3E7mutante y pNGVLIL-12
Administracion intramuscular de 3 dosis
de 100 µg los plasmidos de E7 y IL-12
en los días 1, 3, 5

Administración intramuscular de 100 µg
los plasmidos de E7 y IL-12 en los días 1,
7, 14
0
5000
10000
15000
20000
25000
30000
CPM
Control E7/IL-12
E7
Inducción de inmunidad celular durante el desarrollo
del tumor mediante la por administración de
pcDNA3E7mutante y pNGVLIL-12
Celulas Tumorales
BMK16Myc
Obtención de linfocitos de bazo para
ensayos de proliferación a los 21 dias
con 1 µg de la proteínaE7 recombinante
E7
IL12

Las vacunas se encuentran en la fase de estudio III y los datos de la
fase II reportaron que son seguras y efectivas.
Comparación de vacunas (VLP 16), (VLP 6,11,16 y 18)
vs.
Placebo (aluminio)
Fase de estudio de las vacunas de MSD

VACCINES VS PAPILLOMAVIRUS
HPV-16 Prophylactic Vaccine (Merck)
ADVANTAGES DISADVANTAGES
1. Good Immunogenicity Age group subject/country
2. HPV persistance Definition of persistance
3. Systematic Analysis Short time of Study
4. No Adverse Effects Decay of antibody response
5. Some protection after How valid is the chosen
months follow up end point 17.4 months?

VacunaCuadrivalentevsVPH
de Merck:publicación

VPH 16 10 mg
VPH 16 20 mg
VPH 16 40 mg
VPH 16 80 mg
Tiempo (Meses)
Título
Medio
Geometrico
(mMU/mL)
0 3 7 12 18 24
1
10
100
1000
Anticuerpos Anti-VPH 16 en mujeres con infección por
VPH 16 previa o en curso
Vacunación
Villa LL et. al. Lancet Oncology Early Online Publication. Available at:
http://oncology.thelancet.com/ournal/vol6;iss4/early_online_publication. Accessed April 8, 2005.
Estudio Fase II Niveles de
Anticuerpos Anti-VPH 16 solamente

Company Antigen Vaccine Type
Xenova/Cantab
Transgene
Xenova/Cantab
Cantab
Stressgen
CSL
Cytel, University of Leiden
CEL-SCI
Zycos
MediGene
NCI
E6 + E7 HPV16,18
E6, E7 + IL-2 HPV16
L2 / E6/E7 HPV16
L2 / E7 HPV6
E7 HPV16, Mb HSP65
E6/E7 HPV16
E7 HPV16
Multikine
E7 HPV16 DNA
L1, E7 HPV16
Live vaccinia
Live vaccinia
Fusion Protein
Fusion Protein
Fusión Protein
Fusion Protein
Peptide
Cytokines
Microparticles
Chimeric VLPs
L1 / L2 / E7 HPV16 Chimeric VLPs
UNAM
INSP
E2, HPV18
E2, HPV16, IL-12
Live vaccinia
Adenovirus
Vacunas Terapéuticas, 2004

VACUNA TERAPEUTICA (TRANSGENE)
CONTRA CANCER CERVICO UTERINO
(Abril 10, 2003)
COMPAÑIA VACUNA CARACTERISTICAS
TRANSGENE TG4001.04 MVA-E6/E7HPV16-IL2
PACIENTES TAMIZADOS 120
PACIENTES HPV-16 POSITIVOS 58
PORCENTAJE HPV+ 48%
MULTI-INFECCION 8
HPV NEGATIVOS 12
PORCENTAJE HPV NEGATIVOS 6%
PORCENTAJE HPV POSITIVOS 94

VACUNA DE TRANSGENE CONTRA
CANCER CERVICO UTERINO
(Abril 1°, 2003)
COMPAÑIA VACUNA CARACTERISTICAS
TRANSGENE TG4001.04 MVA-E6/E7HPV16-IL2
PACIENTES EN TRATAMIENTO 30
PACIENTES CON ENFERMEDAD ESTABLE 3
PACIENTES CON ENFERMEDAD AVANZADA 27
PORCENTAJE + 10%
PACIENTES CON ENFERMEDAD ACTIVA 13
MONTERREY 7
HOSPITAL GENERAL DE MEXICO 1
INSTITUTO NACIONAL DE CANCEROLOGÍA 1
GUADALAJARA 4

• Cada año se reportan ~11,000 nuevos casos de CaCu.
• Cada año muere el 41%, ~ 4,500 mujeres.
• La vacuna profiláctica más efectiva estaría lista para el 2005.
• Esta vacuna es contra el tipo de VPH-16, presente en el 50%.
• Si vacunaran mujeres de 15 años de edad y Considerando
• El pico máximo de edad de CaCu en México, es a los 45 años
• Estaríamos viendo resultados hasta el año 2035.
Impacto de la vacuna
contra VPH en México*
*Suponiendo que el Programa de Detección Temprana de Cáncer no mejore.

• Si la vacuna contra VPH-16 fuera 100% efectiva,
• Y se aplicara en una cobertura optima del 80%,
• Tendría una efectividad del 30%, y considerando que
• Mueren ~ 4,500 mujeres por año, morirían 3,000 por año,
• Así, si vamos a ver el impacto real en el año 2035,
• En ese período de 30 años morirán ~ 90,000 mujeres
• Por supuesto, esto es mejor que 135,000 muertes sin vacuna.
*Suponiendo que el Programa de Detección Temprana de Cáncer no mejore.
Impacto de la vacuna
contra VPH en México*

HPV L-1 Original Sin
CD4+
T-cell
B-cell
IL-10
TGF-b1
L-1
HPV-16
CD28-CD80
D
T
CD4+
IL-2
CD40L IL-12
T
CD8+
HPV-16
Cytotocity
HPV-18 HPV-31 HPV-52
HPV-33 HPV-56
HPV-48
HPV ONCOGENICS

HPV-VACCINATION RISES MORE
QUESTIONS?
• Nature of vaccine: Prophylactic or Therapeutic?
• Population Target: Who, When, How?
• Evaluation points: Dificult to evaluation and
Ethical problems
• Will it be effective and a wise for poor countries?
• It must not be allowed deflect from imperative of
providing important health interventions for
those.

E N M É X I C O
• Las vacunas profilácticas:
Merck: VPH-16, mediados del 2006
• Las vacunas terapéuticas:
UNAM: Todo tipo VPH, Noviembre 2005

CONCLUSIONES
 Hay una primera generación de vacunas profilácticas
 Todas ellas con excelente inmunogenecidad a L1
 No existe inmunidad cruzada con otros tipos VPH
 Dirigidas a VPH oncogénicos tipos 16 y 18 y
 No “oncogénicos” tipos 6 y 11.
 Los resultados de las vacunas terapéuticas no son tan
halagadores.
 Se requieren más y mejores vacunas para impactar en
los índices de mortalidad en México.

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