CALIBRACION ENSAYOS

1. Unidad de Posgrado
Segunda Especialidad en Bioquímica Clínica
Profesor : Mg. Freddy Alberto Sotelo Quispe
Asignatura: Actividad en Sede I

2. Ayer…
 Hace mas de 100 años, Emil von Behring
introdujo la antitoxina diftérica en el
tratamiento de la difteria.
 La antitoxina tenía una eficacia muy variable.
 Paul Erlich preparó toxina diftérica altamente
purificada (Material de Referencia) y
desarrolló un “procedimiento exacto de
determinación” (Método de Referencia) para
evaluar la eficacia de dicha antitoxina.

3. Ayer y hoy…
Los Materiales y Métodos de
Referencia constituyen un
elemento clave para asegurar
la exactitud de las
determinaciones en el
Laboratorio Clínico.

4. El principal objetivo del laboratorio clínico es proveer información
confiable acerca de los pacientes a través del análisis de diversos
materiales biológicos.
Confiabilidad horizontal
los resultados obtenidos por distintos laboratorios deben ser
comparables.
Confiabilidad vertical
la calibración del procedimiento analítico debe estar relacionada
con referencias establecidas
Confiabilidad durable
la comparabilidad horizontal se mantiene en el tiempo.

5. QUÉ NECESITA EL LABORATORIO CLÍNICO
• métodos trazables, que sólo necesiten
verificación de SU aptitud de medición
• equipamiento validado por el fabricante
• conmutabilidad de los calibradores de trabajo
y muestras humanas (EN ISO 17511 (cláusula
7.2))

6. Propiedad del resultado de
una medición o del valor
de un estándar la cual
permite relacionarlos a
una referencia
establecida, usualmente
estándares de medida
nacional o internacional, a
través de una cadena
ininterrumpida de
comparaciones, todas
teniendo incertidumbres
establecidas.
Trazabilidad

7. Resultado de una medición
La trazabilidad es una propiedad del resultado de la
medición.
ISO 15189
“5.6.3 Debe ser diseñado y ejecutado un programa para la calibración
y verificación de la exactitud, asi como asegurar la trazabilidad de los
resultados al Sistema Internacional de Unidades…”
Permite asegurar la transferencia de la veracidad de los niveles
jerárquicos metrológicos superiores al resultado obtenido.
ISO 17025
“5.6.2.1 … asegurar que las calibraciones y mediciones
hechas por el laboratorio sean trazables a….”

8. MATERIAL DE REFERENCIA
Material de referencia primario (MRP):
Material de referencia que tiene la mayor
jerarquía metrológica cuyos valores son
determinados por medio de un procedimiento de
medición de referencia primario. (BIPM)
El concepto de “calibrador primario” es
subordinado a “calibrador” y a “material de
referencia primario”.

9. MATERIAL DE REFERENCIA
Patrón secundario de medida (patrón secundario o
calibrador secundario): Patrón establecido por medio
de una calibración respecto a un patrón primario de
una magnitud de la misma naturaleza
Patrón de medida de trabajo (patrón de trabajo):
Patrón utilizado habitualmente para calibrar o
verificar instrumentos o sistemas de medida.

10. MATERIAL DE REFERENCIA
Material de referencia certificado (MRC):
Material de referencia acompañado por la
documentación emitida por un organismos
autorizado, que proporciona uno o varios
valores de propiedades especificadas, con
incertidumbres y trazabilidades asociadas,
empleando procedimientos validos.

11. Procedimiento de medida de referencia:
Procedimiento de medida aceptado para producir resultados de
medida apropiados para su uso previsto, para evaluar la
veracidad de los valores medidos obtenidos a partir de otros
procedimientos de medida, para magnitudes de la misma
naturaleza, para una calibración o para la caracterización de
materiales de referencia.
Procedimiento de medición de referencia por convencion
internacional.
Procedimiento de medición de referencia que proporciona
valores que no son metrológicamente trazable al SI pero los
cuales e usan como VR por acuerdo internacional para una
magnitud definida

12. Procedimiento de medición seleccionado por el
fabricante:
Define un sistema de medición, el cual es calibrado por uno
o más calibradores primarios o secundarios, siempre y
cuando estén disponibles.
Procedimiento de medición de rutina del usuario final:
Procedimiento que debe describir un sistema de medición,
frecuentemente proporcionado por el fabricante, calibrado
por uno o más de los calibrantes preparados por el
fabricante, mismos que deben traer la referencia a un
patrón de mayor jerarquía metrológica

13. CALIBRACION
Conjunto de operaciones que
establecen, en determinadas
condiciones, la relación existente
entre los valores de una magnitud
indicados por un instrumento de
medida, un sistema de medida o los
valores representados por un material
de referencia y los valores
correspondientes de esa magnitud
realizado por los patrones

14. CALIBRADOR
 Posee un valor asignado que tiene una
trazabilidad con un patrón
 El fabricante o casa comercial debe
proporcionar información de trazabilidad.
 Se utiliza para estandarizar el método y
nos permite calcular los valores de las
muestras de los pacientes

15. CARACTERISTICAS DE UN CALIBRADOR
 Concentración del analito en rangos
similares a los medidos
 Estabilidad (temperatura, fecha de
caducidad)
 Matriz similar a la utilizada por el analito
(suero acuoso)
 Presentación (liofilizado, liquido)
 Condiciones de almacenamiento

16. Calibrador de trabajo del fabricante:
Material que debe tener su valor asignado de
acuerdo a uno o más de los procedimientos de
medición seleccionados por el fabricante. Este
calibrador algunas veces es llamado “calibrador
maestro del fabricante” (o calibrador interno).
Calibrador del fabricante: Calibrador propuesto
para utilizarse por el fabricante como producto final.
Este debe tener su valor asignado de acuerdo con el
procedimiento de medición establecido por el
fabricante y su propósito de uso es la calibración del
procedimiento de medición de rutina del usuario
final.

17. Parte de la cadena
trazabilidad
Organización responsable
Parte superior
Organizaciones internacionales reconocidas, tales
como OMS, IFCC, IRMM (Institute for Reference
Materials and Measurements, European Union) e
Institutos Metrológicos, BIPM, ISO
Nacionales (NIST, CENAM, entre otros), etc.
Parte de la media Fabricantes de productos médicos para el
Diagnóstico In Vitro
Parte inferior Laboratorios clínicos

18. Definición SI
Calibrador secundario
Calibrador de
trabajo del fabricante
Calibrador del kit
Muestra del paciente
Resultado
Procedimiento de rutina
Procedimiento de medida de
trabajo del fabricante
Procedimiento de medida
elegido por el fabricante
Procedimiento secundario
Procedimiento Primario
Calibrador primario
CGPM
BIPM, INM, LRA
INM, LRA
INM, LRA
LF
LF
LF
LF
LF, USUARIO
USUARIO
USUARIO
ISO 17511
µc(y)

19. CASO 1
Procedimiento de
medición primario y
calibrador primario
trazable al SI
Es aplicable a
analito tales como:
Electrolitos,
glucosa, colesterol,
hormonas tiroideas,
fármacos y drogas
de abuso

20. ENSAYO MAGNIT
UD
MATERIAL DE REFERENCIA PRIMARIO CALIBRADOR COMERCIAL PRODUCIDO POR EL FABRICANTE
MUESTRAS DEL
PACIENTE EN EL
LABORATORIO
CLÍNICO
MATRIZ
PROCEDIMIENTO
DE
MEDICIÓN
DE
REFERENCIA
PRIMARIO
MATERIAL
DE
REFERENCIA
PRIMARIO
PROCEDIMIENTO
DE
MEDICIÓN
DE
REFERENCIA
SECUNDARIO
CONCENTRACIÓN
INCERTIDUMBRE
ANALITO
MARCA
CONCENTRACIÓN
INCERTIDUMBRE
IDENTIFICACIÓN
DEL
FABRICANTE
MATRIZ
PROCEDIMIENTO
DE
MEDICIÓN
DE
RUTINA
DEL
FABRICANTE
PROCEDIMIENTO
DE
MEDICIÓN
DE
RUTINA
DEL
LABORATORIO
MAGNITU
D
A
CUANTIFIC
AR
UNIDADES
MATRIZ
ÁCIDO
ÚRICO
SÉRICO
Fracción
de
masa
Cristales de
ácido úrico
Dilución
Isotópica
Espectrometr
ía de Masas
(DIEM)
SRM
913a,uric
acid
99,60% 0,10% ácido
úrico
Vitros
Cal 1:0.7;
cal 2:6.0;
cal 3: 16.5
mg/dL.
188 2208 Suero
bovino
Uricase /
CDC
Reflactanci
a
Conce
ntra
ción
mg/dL Suero
CLORURO
S EN
SUERO
Fracci
ón
mas
a
Cristales de
cloruro de
sodio
Gravimetría
NIST SRM
919a
99,89%
0,03% Cloruros Vitros
Cal 1: 65 ;
cal 3: 150
mmol/L.
166 2659
Suero
bovino Coulometrí
a
Reflactanci
a
Conce
ntra
ción
mmol /
L
Suero
SODIO
EN
SUERO
Fracción
de
masa
Cristales
sodioen
cloruro de
sodio
Gravimetría
NIST SRM
919a
99,89% 0,03% Sodio Vitros
Cal1:95;
cal2:54;
cal 3:220;
cal 4: 16
mmol/L
166 2659
Suero
bovino
Espectros
copia de
flama de
emisión
atómica
Reflactanci
a
Conce
ntra
ción
mmol /
L
Suero
UREA EN
SUERO
Fracción
de
masa
Cristales de
urea
SRM 912a DSC, CG 99.9% 0,10% Vitros
Cal 1:1.4 ;
cal 2:17.8
cal 3: 41
(mmol /L)
Ref 188
2208
Suero
bovino
CDC
(ureasa /
GLDH)
Reflactanci
a
Conce
ntra
ción
mg/dL Suero
LITI
O
Fracci
ón
mas
a
Disolución
acuosa
acidificada
Espectrometr
ía de emisión
óptica
inductivamen
te acoplado
a plasma.
(ICP-OES)
NIST
3129a
10,01
mg/g
0,04
mg/g
Litio High
Purity
1000
ug/mL
+/-
3ug/m
L
100029-1
HNO3 al 1%
ICP/OES AA
Concent
ra ción
de
masa
meq/L Suero

21. CASO 2
Procedimiento de
medición de
referencia por
convención
internacional y uno
o mas calibradores
de CI sin
trazabilidad al SI
Es aplicable a
magnitudes que
implican
componentes
Hemoglobina
glicosilada

22. ENSAYO MAGNITU
D
MATERIAL DE REFERENCIA PRIMARIO CALIBRADOR COMERCIAL MUESTRAS DEL PACIENTE EN
EL
LABORATORIO CLÍNICO
MATRIZ
MRCs
MÉTODO
DE
REFERENCIA
CONCENTRACIÓN
INCERTIDUMBRE
SUSTANCIA
MARCA
CONCENTRACIÓN
INCERTIDUMBRE
IDENTIFICACIÓN
DEL
FABRICANTE
MATRIZ
PROCEDIMIENTO
DE
MEDICIÓN
DEL
FABRICANTE
PROCEDIMIENTO
DE
MEDICIÓN
DE
RUTINA
DEL
LABORATORIO
MAGNITUD
A
CUANTIFICAR
UNIDADES
MATRIZ
HEMOGLOBI
NA
GLICOSILAD
A
Concentr
ación de
hemoglob
ina
glicosilad
a
Sangre de
bovino
hemolizad a
CRM-522
HPLC/M S
49,61 µmol/L
0,08
µmol/L
HbA1c
Bio
Systems
S1-S4
Sangr e
human a y
ovina Espectrofotom
etría
Concentr
ación
% Sangre
PROTEÍNAS
TOTALES EN
SUERO
Concentr
ación de
cantidad
de
sustancia
Suero de
albúmina
bovina
(Disolución
al 7%)
SRM 927 c
Método
Biuret y
cromato
grafía de
líquidos
71,57 g/L
0,74
g/L
Proteína
s totales
Roche /
Hitachi
5,47
g/dL ó
54,7 g/L
0,0580
g/dL ó
0,580
g/L
Calibrador
(C.f.a.s.)
Suero
Espectrofoto
metría
Concentr
ación
g/dL ó
g/L
Suero
ALBÚMINA
EN SUERO
Concentr
ación de
cantidad
de
sustancia
Suero
humano
CRM470 (2)
Turbidim
etría,
Nefelom
etría y
espectro
metría
UV/VIS
Roche /
Hitachi
3,70
g/dL ó
36,0 g/L
0,03
g/dL ó
0,30 g/L
Calibrador
(C.f.a.s.)
Suero
Espectrofoto
metría
Concentr
ación
g/dL ó
g/L
Suero

24. CASO 3
Procedimiento de
medición de
referencia por
convencion
internacional (no
es primario) sin
calibrador por CI y
sin trazabilidad al
SI
Es aplicable a
magnitudes que
implican
componentes
Colesterol
HDL,células
sanguineas

25. ENSAYO MAGNITU
D
MATERIAL DE REFERENCIA PRIMARIO CALIBRADOR COMERCIAL MUESTRAS DEL PACIENTE EN EL
LABORATORIO
CLÍNICO
MATRIZ
PROCEDIMIENTO
DE
MEDICIÓN
DE
REFERENCIA
POR
CONVENCIÓN
INTERNACIONAL
CONCENTRACIÓN
INCERTIDUMBRE
SUSTANCIA
MARCA
CONCENTRACIÓN
INCERTIDUMBRE
IDENTIFICACIÓN
DEL
FABRICANTE
MATRIZ
PROCEDIMIENTO
DE
MEDICIÓN
DEL
FABRICANTE
PROCEDIMIENTO
DE
MEDICIÓN
DE
RUTINA
DEL
LABORATORIO
MAGNITUD
A
CUANTIFICAR
UNIDADES
MATRIZ
AMILASA EN
SUERO
Concentr
ación de
cantidad
de
sustancia
suero
humano
IFCC(1998)
(0,102 a
12) >= 2,7 %
Roche /
Hitachi
192 U/L
ó 3,21
mkat/L
4,12 U/L
ó 0,0688
mkat/L
Calibrad
or
(C.f.a.s.)
Suero
IFCC(19 98) Espectrofotomet
r ía
AMY U/L Suero
ISOENZIMAS
DE
FOSFATASA
ALCALINA
Fosfatasa
alcalina
suero fresco
y congelado
IFCC
Phosphatasa
alkalina
líquido 37°C
Roche /
Hitachi
204 U/l 2,32 U/l
Calibrad
or
(C.f.a.s.)
Suero
IFCC
Phospha tasa
alkalina liquido
37°C
Analizador
Hitachi a
917
(fotometría)
Fosfatas
a
alcalina
U/l Suero
HDL
COLESTERO
L
HDL
colesterol
suero fresco
y congelado
Método de
referencia
CDC:
Ultrafiltración
/
Espectrofoto
m etría ref
CYC_II_L_I_
R PM_04
JCTLM
DB
1,3 a
9,7
mmol/L
Reacción
oxidasa-
esterasa,
colorimetrí
a
HDL
colesterol
mg/dL
Suero
fresco,
congela
d o o
liofilizad
o

27. CASO 4
Se cuenta con un
calibrador por CI
sin Procedimiento
de medición de
referencia por CI y
sin trazabilidad al
SI
Es aplicable a
magnitudes que
implican
componentes
AgsHb,
G.corionica,
anticuerpos

28. ENSAYO MAGNITUD
MATERIAL DE REFERENCIA PRIMARIO CALIBRADOR
COMERCIAL
MUESTRAS DEL PACIENTE EN EL LABORATORIO
CLÍNICO
MATRIZ
PROTOCOLO
INTERNACIONA
L
CONCENTRACIÓN
INCERTIDUMBRE
SUSTANCIA
MARCA
CONCENTRACIÓN
INCERTIDUMBRE
IDENTIFICACIÓ
N
DEL
FABRICANTE
MATRIZ
PROCEDIMIENTO
DE
MEDICIÓN
DEL
FABRICANTE
PROCEDIMIENTO
DE
MEDICIÓN
DE
RUTINA
DEL
LABORATORIO
MAGNITUD
A
CUANTIFICA
R
UNIDADES
MATRIZ
PLAQUETAS
Contenido de plaquetas Sangre
fresca
humana
ICSH
Reference
method
(expert panel
on Cytimetry:
Am J Clín
Pathol,115:46
0
-464,2001,
Evaluation of
prototype for
reference
platelet
counter: J
Clin
Pathol,43:932
-
936,1990)
Sysmex
270.9x
10(9)/L
-7,9
Calibrad
orSCS-
100
Sangre
Método
SSF
:ratio
plaqueta
s/eritroci
t os
Citometrí a de
Flujo
Contenid
o
Plaqueta
s
X10(9)/L Sangre
FACTOR VIII Actividad funcional Plasma WHO97/586
de1998
Stago plasma Coagulo métrico Actividad
funcional
% plasma
FACTOR VIII
Actividad funcional
Plasma 5rd IS:02/150 0.68IU 0,07% FVIII Stago 7,70%
STA-
Unicalibr
ator
Plasma
human
o
Coagul
o
métrico
Coagulo métrico
Actividad
funcional
% plasma
FACTOR V
Actividad funcional
Plasma 1st.IS:03/116 0.74IU 0,05% FV Stago 4,90%
STA-
Unicalibr
ador
Plasma
human
o
Coagul
o
métrico
Coagulo métrico
Actividad
funcional
% Plasma

29. ENSAYO MAGNITUD
MATERIAL DE REFERENCIA PRIMARIO CALIBRADOR COMERCIAL MUESTRAS DEL PACIENTE EN EL LABORATORIO
CLÍNICO
MATRIZ
PROTOCOLO
INTERNACIONAL
CONCENTRACIÓN
INCERTIDUMBRE
SUSTANCIA
MARCA
CONCENTRACIÓN
INCERTIDUMBRE
IDENTIFICACIÓN
DEL
FABRICANTE
MATRIZ
PROCEDIMIENTO
DE
MEDICIÓN
DEL
FABRICANTE
PROCEDIMIENTO
DE
MEDICIÓN
DE
RUTINA
DEL
LABORATORIO
MAGNITUD
A
CUANTIFICAR
UNIDADES
MATRIZ
FACTOR X
Actividad
funcional Plasma 3er.IS:99/826 0.93IU 0,09% FV Stago 4,40%
STA-
Unicalibr
ador
Plasma
humano
Coagulo
métrico
Coagulo métrico
Actividad funcional % Plasma
FACTOR XII Actividad
funcional
Plasma FXII Stago 6,10%
STA-
Unicalibr ator
Plasma
humano
Coagulo
métrico,
usando un
internal
master lot
calibrado
frente a un
pool de
plasma
fresco
Coagulo métrico Actividad funcional % Plasma
FACTOR VII
Actividad
funcional Plasma
3er
st.IS:99/826 1.00IU 0,09% FVII Stago 4,50%
STA-
Unicalibr
ador
Plasma
humano
Coagulo
métrico
Coagulo métrico
Actividad funcional % plasma
ANTÍGENO
PROSTÁTICO
ESPECÍFICO
TOTAL
Concentra
ción
Proteína de
plasma
purificado
WHO 96/670
Prostate
specific
antigen
(90:10),
Lyophilized., 1
μg total PSA
por vial. 1 st
1 μg total
PSA por
vial
Antígen o
prostátic o
SIEMEN
S
MEDICA L
Nivel bajo
0.0 ug/dl
Nivel alto
65 ug/dL
Nivel bajo
NA Nivel
alto 29.5
ug/dL
CAL Q
NIVEL LOW
NIVEL HIGH
Quimiolu miniscen cia
Concentración ug/mL

30. CASO 5
Procedimiento de
medicion
seleccionado por
los fabricantes, no
cuentan
Procedimiento de
medición ni
calibradores
establecidos por
CI y sin
trazabilidad al SI
Es aplicable a
magnitudes que
implican
componentes
Dimero D,
marcadores
tumorales,

32. • LISTA I: ANALITOS BIEN DEDEFINIDOS
ELECTROLITOS, ENZIMAS, DROGAS, METABOLITOS Y SUSTRATOS,
HORMONAS NO PEPTÍDICAS, Y ALGUNAS PROTEÍNAS.
• LISTA II: SUSTANCIAS NO TRAZABLES A UNIDADES SI Y/O
SIN PROCEDIMIENTOS DE MEDIDA DE REFERENCIA
FACTORES DE COAGULACIÓN, ÁCIDOS NUCLEICOS, PSA
• ANALITOS NO INCLUÍDOS EN I ni II
PE MARCADORES TUMORALES
* EN FLUIDOS BIOLÓGICOS
LABORATORIO DE ANÁLISIS CLÍNICOS
MIDEN ANALITOS DE LA .....

33. Paris, Sèvres BIPM
Joint Committee of Traceability in Laboratory Medicine
JCTLM
Comité Conjunto de Trazabilidad en Medicina de Laboratorio
El International Committee of Weights and Mesures† (CIPM), la International
Federation for Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (IFCC), y la International
Laboratory Accreditation Cooperation (ILAC) acuerdan cooperar para establecer el
Joint Committee for Traceability in Laboratory Medicine, con el acrónimo JCTLM.
Para los propósitos de del Comité Internacional de Pesas y Medidas (CIPM) va a ser representado por el Bureau
Internacional de Pesas y Medidas BIPM)

34. BASE DE DATOS ACTUAL DEL JCTLM
• 298 MATERIALES DE REFERENCIA PARA 175
MENSURANDOS
• 180 MÉTODOS DE REFERENCIA PARA 80
MENSURANDOS
• 146 SERVICIOS DE MEDIDA DE REFERENCIA PARA
39 MENSURANDOS

35. Conclusiones
 La trazabilidad ofrece la mejor estrategia para lograr
la estandarización de los laboratorios.
 Las instituciones científicas deberán desarrollar
Sistemas de Referencia para cubrir las necesidades del
laboratorio clínico.
 La industria deberá proveer los calibradores y
controles con valores trazables utilizando los Sistemas
de Referencia.
 El laboratorio deberá transferir la veracidad de los
calibradores a los resultados de los pacientes.
 Los laboratorios deberán realizar –indefectiblemente-
acciones programadas para garantizar la calidad
analítica.