El documento describe el procedimiento para determinar la concentración de glucosa en sangre mediante el método enzimático. Se explica que la glucosa es una fuente importante de energía y que la diabetes es una patología relacionada con alteraciones en los niveles de glucosa. El método involucra la oxidación de la glucosa por la enzima glucosa oxidasa, formando peróxido de hidrógeno que reacciona con otros reactivos para generar un color rojo cuya intensidad permite calcular la concentración de glucosa original.

1. PRACTICA Nº 3
DETERMINACIÓN ENZIMÁTICA DE GLICEMIA
I- LOGRO.
 El estudiante determina la concentración de glucosa sanguínea por el método enzimático,
interpretar los resultados con fines diagnósticos, aplicando las normas de bioseguridad.
II. MARCO TEORICO.
2.1. Importancia Clínica.
La glucosa es un carbohidrato que constituye la principal fuente energética, son fuente primaria
del cerebro, eritrocitos y células retinales en humanos, su concentración en sangre se mantiene
dentro de los estrechos márgenes, pese a los cambios que ocurren tras la alimentación y los
episodios de ayuno, esta regulación esgraciasa la participación de la hormona insulina, glucagón,
glucocorticoides, cortisol y hormonas del crecimiento.
La patología más común relacionada con el metabolismo de carbohidratos es la diabetes mellitas, en
la que se muestra una incapacidad para producir insulina en la cantidad necesaria que satisfaga la
cantidad metabólica. La Diabetes mellitus constituye un síndrome con un metabolismo alterado e
hiperglucemia inapropiada, debido a una deficiencia en la secreción de insulina o la combinación de
una resistencia a la insulina y una secreción inadecuada compensatoria de esta, ya que constituye la
sustancia principal responsable del mantenimiento de valores adecuados de azúcar en sangre, permite
que la glucosa sea transportada al interior de la célula de modo que estas producen energía o se
almacenan hasta que sea necesaria.
Se establece el diagnóstico cuando un persona tiene los valores anormales elevados de azúcar en
sangre (hiperglicemia)
 Glucosa plasmática ≥ 126 mg/dl
 Concentración de glucosa ≥ 200 mg/dl después de una dosis de 75 gr glucosa por via oral.
Cuando pacientes asintomáticos cumplen con criterios de diagnostico establecidos (poliuria,
polidipsia, pérdida de peso etc.) el estudio selectivo es necesario en pacientes con antecedentes
familiares: obesidad significativa, infecciones cutáneas, genitales u orinarias, prematuridad o peso al
nacer superior a 4 KG.
2.2. VALORES NORMALES.
Suero o plasma.
0.7 a 1.1 gr/lit.
70 a 110 mg/dl.
R.N- 200 a 800 mg/dl.
2.2. Fundamento del método.
La glucosa es oxidada en presencia de la enzima glucosa oxidaxa (GOD), formando los productos
ácido glucorónico y peroxido de hidrógeno, que en presencia de peroxidasa (POD) da como resultado
la fusión oxidativa del fenol con 4 aminofenazona (4AF) originando una quinona coloreada (rojo
cereza) con absorbancia máxima a 505 nm.
GOD
Glucosa + O2 + H2O  ácido gluconico + H2O2
POD
2H2O + 4-AF + fenol  quinona coloreada + 4H2O
PARTE EXPERIMENTAL.
Materiales:
 Tubos de ensayo.
 Baño maría
 Micropipetas graduadas.

2.  Gradilla.
 Fotocolorimétro.
 Cronómetro.
Reactivos:
 Reactivo A: solución de 4-aminofenazona 25 mmol/l en Buffer Tris 0,92 mol/l.
 Reactivo B: solución de fenol 55 mmol/l.
 Reactivo C: solución de glucosa oxidasa (1000 U/ml) y peroxidasa (120 U/ml).
 Standard: solución de glucosa 1 g/l.
 Agua destilada
Equipo: Fotocolorímetro o espectofotómetro.
Muestra: Suero o plasma.
Procedimiento:
 Extraer la sangrevenosa, en casos deextrema urgencia sangre capilar y obtener suero de la manera
usual.
 Centrifugar la sangre dentro de las dos horas posterior a la extracción, hasta obtener un
sobrenadante limpio y transferir a otro tubo hasta para su conservación 4 horas temperatura
ambiente y 24 horas refrigerada (2-10ºC).
 En tres tubos marcados B (blanco) S (stándar) y D (Desconocido) colocar:
B S D
Standard 20ul
Muestra 20 ul
Reactivo de Trabajo. 2 ml 2 ml 2 ml
 Incubar 10 min en baño de agua a 37 ºC, luego leer en espectofotómetro a 505 nm o en
fotocolorímetro con filtro verde a (490-530nm) llevando a cero con el blanco.
 El color de la reacción es estable 1 hora, por lo que la absorvancia debe ser leída dentro de este
lapso.
Condiciones de Reacción:
 Longitud de onda: 505 nm espectofotómetro o en fotocolorímetro con filtro verde (490-530nm).
 Temperatura de reacción: 37º C.
 Tiempo de reacción: 10 min.
 Volumen de la muestra: 20 ul.
 Vol de reactivo de trabajo: 2 ml.
 Vol final de la reacción: 2.02 ml.
Calculo de resultados:
Glucosa g/l = D x f Donde f :
S
lg /00.1
IV. COMENTARIOS.
V. CONCLUSIONES.
VI. RESOLUCIÓN DEL CUESTIONARIO.
 Que otros métodos existen para determinación de glucosa, explicar fundamento. y v evntajas
 Que anticuagulantes debemos utilizar en caso de utilizar plasma en la determinación y cuales
presentan interferencia.
 Que factores presentan interferencia en la determinación de glucosa en sangre.
 Que patologías están asociadas a una hiperglicemia e hipoglicemia.
 Que fármacos elevan y disminuyen los valores de glucosa