1. A. 3. Ensayos químicos para la identificación de distintas familias de
compuestos químicos.
El material vegetal seco fue sometido a un estudio químico preliminar
mediante reacciones de identificación que caracterizan a diferentes familias de
compuestos químicos(Figura 3.6).
Como primer paso se extrajo el material vegetal mediante un proceso de
maceración con EtOH-H2O(1:1). Luego, el extracto resultante fue concentrado a
sequedad para eliminar el contenido alcohólico y poder realizar las particiones
sucesivas con el fin de separar las sustancias químicas según su polaridad,
llevándose a cabo reacciones de identificación que caracterizan a diferentes familias
de compuestos químicos. Para ello, se siguió la marcha analítica de la Figura 3.6.

2. Esta marcha química involucra la realización principalmente de reacciones
de coloración que permiten obtener una visualización del contenido químico de la
planta (Rondina y Coussio, 1969; Harborne, 1984):
Figura 3.6: Marcha analítica para realizar el estudio químico preliminar.

3.  Taninos: A 0,5 ml del filtradoI se agregó 5 gotas de FeCl3 al 1 % en EtOH. La
reacción se consideró positiva cuando apareció un precipitado o coloración
azul-negruzca o pardo verdoso (Harborne, 1984).
 Proantocianidinas: A 1 ml del filtradoI se le agregó HCl hasta pH 2 y se
calentó a la llama. La reacción se consideró positiva, cuando la coloración
cambia a rojiza, y con agregado de n-butanol o alcohol amílico ésta
coloración pasa a la fracción alcohólica (Harborne, 1984).
 Hidratos de carbono reductores: Al extractoacuosoII (2 ml) se le agregó3
gotas de reactivo de Molich y luego, se vertió por las paredes del tubo
H2SO4de manera cuidadosa para formar dos fases. Se consideró positivo si el
límite entre las dos fases se visualizó de color rojo (Evans, 1991).
 Antocianinas y betacianinas: para diferenciar estos 2 tipos de estructuras, al
extractoacuosoII se le realizaron diferentes test (Tabla 3.1):

4. Tabla 3.1: Ensayos para diferenciar antocianinas de betacianinas. Si bien ambas presentan la
misma coloración (rojo), son químicamente diferentes. Los primeros son derivados fenólicos y los
segundos, derivados nitrogenados.
 Saponinas: A 2 ml del extractoacuosoII se le añadieron 3 ml de agua y se
agitó vigorosamente, luego de 5 min si la espuma permanece, la reacción es
positiva.
 Flavonoides sulfatados: Se agregó 8 gotas de HCl al extractoacuosoII, se
calentó a baño maría durante 30 min, se dejó enfriar y se le adicionó una
solución acuosa de Cl2Ba 2M. Se consideró positivó cuando apareció un
precipitado blanco (Markham, 1982).
 Flavonoides (Ensayo de Shinoda)
o (A) Glicósidos: al extractoacuosoIV (2 ml) se le añadieron 8 gotas de
HCl y limaduras de Mg. Se consideró positiva la reacción, cuando
apareció una coloración roja que pasó al n-ButOH (butanol) cuando
éste fue agregado (0,5 ml) (Geissman, 1962).
o (B) Aglicones: se concentró el extractoetéreoV a sequedad y se
retomó con 2 ml de agua destilada, luego se procedió como se
describió en el inciso anterior.
 Antraquinonas(Reacción de Bortraëger)
o (A) Aglicones (Reacción de Bortraëger directa): al
Test Respuesta de antocianinas
Respuesta de
betacianinas
Calentar con HCl 2M
durante 5’ a 100 ºC
Color rojo que es extraído
con alcohol amílico
Color rojo que se
desvanece con el tiempo.
Agregar NH4(OH) en gotas Cambia de rojo a azul/verde Cambia de rojo a amarillo
Cromatografía en papel
(CP) en HCl 1%
Rf bajos a intermedios Rf altos
CP en BAW (4:1:5) Rf medios (10-40) Rf muy bajos (00-10)
Electroforésis (10 mV) con
papelWhatman nº 1 y
buffer pH 2
Migra al cátodo Migra al ánodo
Espectro visible en MeOH-
HCl
Máximo en el rango
505-535 nm
Máximo en el rango
532-554 nm

5. extractobencénico(XIII) se le agregó 1 ml de KOH 10 % (en etanol) o
NH4(OH). Fue positivo cuando apareció una coloración
rosa/roja(Wagner et al., 1984).
o (B) Glicósidos (Reacción de Bortraëger indirecta): al extractoacuosoXII
se le agregó 5 gotas de HCl y se colocó a baño maría durante 60 min
con el fin de hidrolizar los glicósidos. Se enfrío y se extrajo con
benceno (Inoue et al., 1981). A 1 ml de benceno se añadió 1 ml de KOH
10 % (en etanol) o NH4 (OH). La reacción se consideró positiva cuando
apareció una coloración rosa/roja en la fase inferior.
 Fitoesteroides (Lieberman-Burchard): A 1 ml del extracto clorofórmicoXI
se le agregó igual volumen de anhídrido acético y 5 gotas de ácido sulfúrico
concentrado. La reacción fue positiva cuando apareció una coloración
verde azulada.
 Alcaloides: Con los extractos, clorofórmicoVIII y acuosoácidoX, se realizó
una prueba de toque en una placa de sílica gel, luego se agrego una gota de
"Reactivo de Dragendorff". Se consideró positiva si apareció una coloración
rojo ladrillo (Harborne, 1984).
Cabe destacar que los extractos obtenidos, tanto orgánicos como
acuosos, también fueron sometidos a los ensayos arriba mencionados a fin de
establecer el tipo de compuestos predominantes en los mismos.
A.3.1.Reactivos utilizados
 Reactivo de Molich: 5 gr. de timol se disolvieron en cantidad suficiente de
EtOH 90º hasta completar 100 ml y finalmente se filtró (Farmacopea
Nacional Argentina, 1978).
 Reactivo de Dragendorff: la solución A se preparó disolviendo 0,85 gr. de
nitrato de bismuto en 40 ml de agua y se agregaron 10 ml deAcOH glacial. La
solución B se obtuvo disolviendo 20 gr. de ioduro de potasio en 50 ml de
agua. El reactivo se consiguió mezclando la solución A con la B y agregando
200 ml de AcOH glacial y agua en cantidad suficiente para 1000 ml (Sthaland

6. Schorn,1969).
 BAW (4:1:5): Butanol: acido acético: agua (4:1:5).
Sustancias que se necesitan:
- Ethanol (ETOH)
- FeCl3
- HCl
- n-butanol
- H2SO4
- NH4(OH)
- Cl2Ba
- H2O destilada
- K(OH)
- Benceno