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“Estudio de sensibilidad
antibiótica de diferentes cepas
de Yersinia ruckeri procedentes
de diferentes regiones del país”
Luis Cerro Temoche1; Alberto Manchego Sayán2; Jeferson Nuñure
Ortega3; Juan Pihue Taipe3; Nieves Sandoval Chaupe1
1 Sección de Ictiopatología del
Laboratorio de Embriología,
Histología y Patología Veterinaria de
la Facultad de Medicina Veterinaria-
UNSMSM.
2 Laboratorio de Inmunología.
Facultad de Medicina Veterinaria-
UNSMSM.
3 Escuela de Pre-grado. Facultad de
Medicina Veterinaria- UNSMSM.
Noviembre 2017, Lima - Perú
Introducción
La Enfermedad Entérica de la Boca Roja es producida por
Yersinia ruckeri reportada por primera vez en los Estados
Unidos a principios del 1950 [9]. Desde entonces ha sido
identificada en diferentes continentes: Oceania [5], Asia [7],
Europa [1], Afríca [3] y América del sur. En Perú, Bravo y
Kojagura (2004), aislaron Y. ruckeri en 34 piscifactorías del
departamento de Junín, utilizando procedimientos
bioquímicos estándares. Por otro lado, Fernández en el 2011,
en la misma región además de determinar la presencia de
Yersinia ruckeri, demostró la similaridad bioquímica entre las
cepas de esta región con las reportadas en los Estados Unidos
[2].
Diversas especies de bacterias, principalmente Yersinia
ruckeri, se encuentra ampliamente distribuidas en ambientes
acuáticos, infectando especies de cultivo, produciendo pérdidas
económicas significativas. El presente estudio tuvo como
objetivo determinar la sensibilidad de diferentes cepas de Y.
ruckeri, caracterizadas bioquímicamente, procedentes de
diferentes regiones del país, a diferentes fármacos de uso
veterinario.
Figura 1. Lleve exoftlamia, nado en la superficie y erratico
Materiales y métodos
La obtención de las muestras fue realizada en cuatro
piscigranjas localizadas en diferentes regiones del Perú: (1)
una piscigranja localizada a lo largo del rio Rejo en el
departamento de Cajamarca, (2) una piscigranja localizada en
la laguna Punrun en el departamento de Pasco donde se realizó
un doble muestreo (abril y octubre), y (3) dos diferentes
piscigranjas ubicadas en el departamento de Áncash (Huaraz),
en las cuales además de observarse una mortalidad
significativa, se reportó signos clínicos y hallazgos de
necropsia, compatibles con infecciones causadas por Y.
ruckeri. En todos los muestreos fueron colectados entre 10 a
12 especímenes de truchas arcoíris (Oncorhynchus mykiss).
Después de realizada la necropsia de 10-12 especímenes por
muestreo, de aproximadamente 15 -20 cm de talla, fueron
colectadas y cultivadas muestras de riñón y bazo para el
aislamiento bacteriano. Las muestras de los órganos en
mención fueron cultivadas en medio Agar Tripticasa de Soya
(TSA) e incubadas a 25°C por 24-48 horas, posteriormente se
aislaron las colonias uniformes, caracterizadas por ser
pequeñas, color blanquecino, semitranslucidas, lisas (Figura 4).
Luego se procedió a realizar la identificación de cada colonia a
través de coloración de Gram y las pruebas bioquímicas como
oxidasa y catalasa.
Figura 2. Cuadro de enteritis hemorrágico producida por Y. ruckeri
Materiales y métodos
Para el antibiograma, se procedió a cultivar una colonia de
cada lote en medio Mueller Hinton, por el método de difusión
en ágar según la técnica de Kirby-Bauer, recomendado por la
National Comitee for Clinical Laboratory Standars. Los
antibióticos evaluados fueron: Trimetroprim sulfato (SXT),
Florfenicol (FLD), Fosfomicina estabilizada (FO), Clorhidrato
de oxitetraciclina (OXD), Enrofloxacina base (EBD). Cada
placa fue incubada a 25 ° C por 24 h, pasado el tiempo se
realizó la medición de los halos para su interpretación.
Interpretación Abreviatura Halo de Inhibición
Resistente R ≤ 7 mm
Sensibilidad Media M ≤ 8 mm ≤ 11 mm
Sensible S ≥ 12 mm ≤ 16 mm
Muy sensible MS ≥ 17 mm
Figura 3. Parámetros de lectura del halo de inhibición y su
interpretación.
*AVIMEX 2002
Basado en disposiciones internacionales del National Committee for Clinical Laboratory
Standards de USA (NCCLS)
Resultados
Los aislados de Yersinia ruckeri que infectan a truchas arco iris
en una piscigranja de tres regiones del país (Ancash, Pasco y
Cajamarca) muestran características fenotípicas diferentes a las
reportadas en otras regiones como Huancavelica y Junín.
Se encontró variación fenotípica en los aislados de Yersina
ruckeri en las pruebas de motilidad, degradación de citrato,
fermentación ácido mixta, producción de ornitina
descarboxilasa y arginina deshidrogenasa, reducción de
nitratos, producción de ácido a partir de manitol, producción
de ácido a partir de sucrosa y degradación de gelatina, siendo
de mayor presentación los resultados negativos a la prueba de
degradación de citrato.
Figura 4. Crecimiento de Y. ruckeri en medio Agar Tripticasa de Soya
(TSA) e incubadas a 25°C por 24-48 horas
Resultados
En relación a los resultados, Y. ruckeri demostró una mayor
sensibilidad frente a FLD. Sin embargo se encontró
diferencias de sensibilidad, siendo el orden de mayor a menor
sensibilidad antibiótica SXT, OXD, EBD y FO,
respectivamente (Cuadros 1,2,3,4 y 5). Además se encontraron
cepas resistentes a Oxitetraciclina en el Departamento de
Cajamarca y Pasco
Cuadro 2. Sensibilidad antimicrobiana de Yersinia ruckeri aislada de una
piscigranja localizada en el Departamento de Pasco, Junio 2017. Flecha
roja indica resistencia
Cuadro 1. Sensibilidad antimicrobiana de Yersinia ruckeri aislada de una
piscigranja localizada en el Departamento de Cajamarca, Junio 2017.
Flecha roja indica resistencia
Muestras FLD SXT EBD FO OXD
B1 MS S S S R
R4 MS S MS M S
R9 S S S M R
B8 MS S MS S R
B11 MS MS S M S
P9 MS MS S M M
P12 MS MS S R R
P14 MS S MS R S
MUESTRA FLD SXT EBD OXD FO
T-B1 MS MS MS S MS
T-B2 MS MS S MS M
T-B3 MS MS MS S M
G-B1 MS MS MS S MS
G-B11 MS MS S MS R
G-R14 MS MS MS MS R
G-P13 MS M R R S
Resultados II
Cuadro 3. Sensibilidad antimicrobiana de Yersinia ruckeri aislada de una
piscigranja localizada en el Departamento de Pasco, Octubre 2017.
Cuadro 4. Sensibilidad antimicrobiana de Yersinia ruckeri aislada de una
piscigranja localizada en el Departamento de Áncash (Piscigranja A),
Octubre 2017.
Cuadro 5. Sensibilidad antimicrobiana de Yersinia ruckeri aislada de
piscigranja localizada en el Departamento de Áncash (Piscigranja B),
Octubre 2017.
MUESTRA FLD SXT FO EBD OXD
T1 MS MS S S S
T5 MS MS MS S S
T8 MS MS MS S S
T9 MS MS MS S S
MUESTRA FLD SXT FO EBD OXD
T1 MS MS MS S S
T2 MS MS MS S S
T3 MS S S S M
T4 MS MS MS S S
MUESTRA FLD SXT FO EBD OXD
T3 MS S S S S
T4 MS MS MS S S
T5 MS MS MS S S
T6 MS MS MS MS S
Conclusiones
Agradecimientos
• Existe una variabilidad en la sensibilidad de Y. ruckeri
frente a los diferentes antibióticos estudiados.
• Y. ruckeri demostró se altamente sensible frente a FLD en
los Departamentos de Pasco, Áncash y Cajamarca.
• Existen cepas resistentes a Oxitetraciclina en el
Departamento de Cajamarca y Pasco.
Este trabajo ha sido realizado gracias al convenio N° 078 –
INNOVATEPERU-IAPIP-2017 entre la Facultad de Medicina
Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos e
INNOVATE PERÚ.
Referencias bibliográficas
Datos de contacto
1. Austin D.A., P.A.W Robertson & B. Austin (2003) Recovery of a new biogroup of
Yersinia ruckeri from diseased rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum).
Systematic and Applied Microbiology 26: 127-131.
2. Austin, B., Austin, D.A (2007) Bacterial Fish Pathogens. Diseases of Farmed and
Wild Fish. Springer-Verlag, 2nd Edn, 188-226
3. Bragg R.R. (1991) Health status of salmonids in river systems in Natal (South
Africa). III. Isolation and identification of bacteria. Onderstepoort J. Vest. Res. 58:
67-70.
4. Bravo S., & V. Kojagura (2004). First isolation of Yersinia ruckeri from rainbow trout
(Oncorhynchus mykiss) in Peru. Bull. Eur. Ass. Fish Pathol. 24: 104-108.
5. Bullock G.L., H.M. Struckey & E.B.Jr. Shotts (1977) Early records of North American
and Australian outbreaks of enteric redmouth disease. Fish Health News 6(2): 96.
6. Fernandez, C (2011) Determinación de Yersinia ruckeri y sus características
lesiónales anatomo - histopatológicas en truchas Arco Iris (Oncorhynchus mykiss)
en etapa pre-comercial en una piscigranja de la región Junín. Tesis de Médico
Veterinario. Facultad de Medicina Veterinaria. Universidad Nacional Mayor de San
Marcos. Lima 57 p.
7. Raidal S., G. Cross, S. Fenwick, P. Nicholls, B. Nowak, K. Ellard & E. Stephens (2004)
Aquatic Animal Health: Exotic Disease Training Manual. FRDC Project 2002/645.
Pp: 40–42.
8. Ross A.J, R.R. Rucker & W.H. Ewing (1966) Description of a bacterium associated
with redmouth disease of rainbow trout (Salmo gairdneri). Canadian Journal of
Microbiology. 12: 763-770.
9. Rucker R (1966) Redmouth disease of rainbow trout (Salmo gairdneri). Bulletin de
L’Office International des Epizooties 65: 825-830.
Laboratorio de Histología, Embriología y Patología Veterinaria
Sección de Ictiopatología
Facultad de Medicina Veterinaria
Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Responsable del Sector: Mg. MV Nieves Sandoval Chaupe
email: nieves.sandovalchaupe@gmail.com

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CISIPA 2017: 02. Estudio de sensibilidad antibiótica de diferentes cepas de Yersinia ruckeri procedentes de diferentes regiones del país.

  • 1. “Estudio de sensibilidad antibiótica de diferentes cepas de Yersinia ruckeri procedentes de diferentes regiones del país” Luis Cerro Temoche1; Alberto Manchego Sayán2; Jeferson Nuñure Ortega3; Juan Pihue Taipe3; Nieves Sandoval Chaupe1 1 Sección de Ictiopatología del Laboratorio de Embriología, Histología y Patología Veterinaria de la Facultad de Medicina Veterinaria- UNSMSM. 2 Laboratorio de Inmunología. Facultad de Medicina Veterinaria- UNSMSM. 3 Escuela de Pre-grado. Facultad de Medicina Veterinaria- UNSMSM. Noviembre 2017, Lima - Perú
  • 2. Introducción La Enfermedad Entérica de la Boca Roja es producida por Yersinia ruckeri reportada por primera vez en los Estados Unidos a principios del 1950 [9]. Desde entonces ha sido identificada en diferentes continentes: Oceania [5], Asia [7], Europa [1], Afríca [3] y América del sur. En Perú, Bravo y Kojagura (2004), aislaron Y. ruckeri en 34 piscifactorías del departamento de Junín, utilizando procedimientos bioquímicos estándares. Por otro lado, Fernández en el 2011, en la misma región además de determinar la presencia de Yersinia ruckeri, demostró la similaridad bioquímica entre las cepas de esta región con las reportadas en los Estados Unidos [2]. Diversas especies de bacterias, principalmente Yersinia ruckeri, se encuentra ampliamente distribuidas en ambientes acuáticos, infectando especies de cultivo, produciendo pérdidas económicas significativas. El presente estudio tuvo como objetivo determinar la sensibilidad de diferentes cepas de Y. ruckeri, caracterizadas bioquímicamente, procedentes de diferentes regiones del país, a diferentes fármacos de uso veterinario. Figura 1. Lleve exoftlamia, nado en la superficie y erratico
  • 3. Materiales y métodos La obtención de las muestras fue realizada en cuatro piscigranjas localizadas en diferentes regiones del Perú: (1) una piscigranja localizada a lo largo del rio Rejo en el departamento de Cajamarca, (2) una piscigranja localizada en la laguna Punrun en el departamento de Pasco donde se realizó un doble muestreo (abril y octubre), y (3) dos diferentes piscigranjas ubicadas en el departamento de Áncash (Huaraz), en las cuales además de observarse una mortalidad significativa, se reportó signos clínicos y hallazgos de necropsia, compatibles con infecciones causadas por Y. ruckeri. En todos los muestreos fueron colectados entre 10 a 12 especímenes de truchas arcoíris (Oncorhynchus mykiss). Después de realizada la necropsia de 10-12 especímenes por muestreo, de aproximadamente 15 -20 cm de talla, fueron colectadas y cultivadas muestras de riñón y bazo para el aislamiento bacteriano. Las muestras de los órganos en mención fueron cultivadas en medio Agar Tripticasa de Soya (TSA) e incubadas a 25°C por 24-48 horas, posteriormente se aislaron las colonias uniformes, caracterizadas por ser pequeñas, color blanquecino, semitranslucidas, lisas (Figura 4). Luego se procedió a realizar la identificación de cada colonia a través de coloración de Gram y las pruebas bioquímicas como oxidasa y catalasa. Figura 2. Cuadro de enteritis hemorrágico producida por Y. ruckeri
  • 4. Materiales y métodos Para el antibiograma, se procedió a cultivar una colonia de cada lote en medio Mueller Hinton, por el método de difusión en ágar según la técnica de Kirby-Bauer, recomendado por la National Comitee for Clinical Laboratory Standars. Los antibióticos evaluados fueron: Trimetroprim sulfato (SXT), Florfenicol (FLD), Fosfomicina estabilizada (FO), Clorhidrato de oxitetraciclina (OXD), Enrofloxacina base (EBD). Cada placa fue incubada a 25 ° C por 24 h, pasado el tiempo se realizó la medición de los halos para su interpretación. Interpretación Abreviatura Halo de Inhibición Resistente R ≤ 7 mm Sensibilidad Media M ≤ 8 mm ≤ 11 mm Sensible S ≥ 12 mm ≤ 16 mm Muy sensible MS ≥ 17 mm Figura 3. Parámetros de lectura del halo de inhibición y su interpretación. *AVIMEX 2002 Basado en disposiciones internacionales del National Committee for Clinical Laboratory Standards de USA (NCCLS)
  • 5. Resultados Los aislados de Yersinia ruckeri que infectan a truchas arco iris en una piscigranja de tres regiones del país (Ancash, Pasco y Cajamarca) muestran características fenotípicas diferentes a las reportadas en otras regiones como Huancavelica y Junín. Se encontró variación fenotípica en los aislados de Yersina ruckeri en las pruebas de motilidad, degradación de citrato, fermentación ácido mixta, producción de ornitina descarboxilasa y arginina deshidrogenasa, reducción de nitratos, producción de ácido a partir de manitol, producción de ácido a partir de sucrosa y degradación de gelatina, siendo de mayor presentación los resultados negativos a la prueba de degradación de citrato. Figura 4. Crecimiento de Y. ruckeri en medio Agar Tripticasa de Soya (TSA) e incubadas a 25°C por 24-48 horas
  • 6. Resultados En relación a los resultados, Y. ruckeri demostró una mayor sensibilidad frente a FLD. Sin embargo se encontró diferencias de sensibilidad, siendo el orden de mayor a menor sensibilidad antibiótica SXT, OXD, EBD y FO, respectivamente (Cuadros 1,2,3,4 y 5). Además se encontraron cepas resistentes a Oxitetraciclina en el Departamento de Cajamarca y Pasco Cuadro 2. Sensibilidad antimicrobiana de Yersinia ruckeri aislada de una piscigranja localizada en el Departamento de Pasco, Junio 2017. Flecha roja indica resistencia Cuadro 1. Sensibilidad antimicrobiana de Yersinia ruckeri aislada de una piscigranja localizada en el Departamento de Cajamarca, Junio 2017. Flecha roja indica resistencia Muestras FLD SXT EBD FO OXD B1 MS S S S R R4 MS S MS M S R9 S S S M R B8 MS S MS S R B11 MS MS S M S P9 MS MS S M M P12 MS MS S R R P14 MS S MS R S MUESTRA FLD SXT EBD OXD FO T-B1 MS MS MS S MS T-B2 MS MS S MS M T-B3 MS MS MS S M G-B1 MS MS MS S MS G-B11 MS MS S MS R G-R14 MS MS MS MS R G-P13 MS M R R S
  • 7. Resultados II Cuadro 3. Sensibilidad antimicrobiana de Yersinia ruckeri aislada de una piscigranja localizada en el Departamento de Pasco, Octubre 2017. Cuadro 4. Sensibilidad antimicrobiana de Yersinia ruckeri aislada de una piscigranja localizada en el Departamento de Áncash (Piscigranja A), Octubre 2017. Cuadro 5. Sensibilidad antimicrobiana de Yersinia ruckeri aislada de piscigranja localizada en el Departamento de Áncash (Piscigranja B), Octubre 2017. MUESTRA FLD SXT FO EBD OXD T1 MS MS S S S T5 MS MS MS S S T8 MS MS MS S S T9 MS MS MS S S MUESTRA FLD SXT FO EBD OXD T1 MS MS MS S S T2 MS MS MS S S T3 MS S S S M T4 MS MS MS S S MUESTRA FLD SXT FO EBD OXD T3 MS S S S S T4 MS MS MS S S T5 MS MS MS S S T6 MS MS MS MS S
  • 8. Conclusiones Agradecimientos • Existe una variabilidad en la sensibilidad de Y. ruckeri frente a los diferentes antibióticos estudiados. • Y. ruckeri demostró se altamente sensible frente a FLD en los Departamentos de Pasco, Áncash y Cajamarca. • Existen cepas resistentes a Oxitetraciclina en el Departamento de Cajamarca y Pasco. Este trabajo ha sido realizado gracias al convenio N° 078 – INNOVATEPERU-IAPIP-2017 entre la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos e INNOVATE PERÚ.
  • 9. Referencias bibliográficas Datos de contacto 1. Austin D.A., P.A.W Robertson & B. Austin (2003) Recovery of a new biogroup of Yersinia ruckeri from diseased rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum). Systematic and Applied Microbiology 26: 127-131. 2. Austin, B., Austin, D.A (2007) Bacterial Fish Pathogens. Diseases of Farmed and Wild Fish. Springer-Verlag, 2nd Edn, 188-226 3. Bragg R.R. (1991) Health status of salmonids in river systems in Natal (South Africa). III. Isolation and identification of bacteria. Onderstepoort J. Vest. Res. 58: 67-70. 4. Bravo S., & V. Kojagura (2004). First isolation of Yersinia ruckeri from rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in Peru. Bull. Eur. Ass. Fish Pathol. 24: 104-108. 5. Bullock G.L., H.M. Struckey & E.B.Jr. Shotts (1977) Early records of North American and Australian outbreaks of enteric redmouth disease. Fish Health News 6(2): 96. 6. Fernandez, C (2011) Determinación de Yersinia ruckeri y sus características lesiónales anatomo - histopatológicas en truchas Arco Iris (Oncorhynchus mykiss) en etapa pre-comercial en una piscigranja de la región Junín. Tesis de Médico Veterinario. Facultad de Medicina Veterinaria. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima 57 p. 7. Raidal S., G. Cross, S. Fenwick, P. Nicholls, B. Nowak, K. Ellard & E. Stephens (2004) Aquatic Animal Health: Exotic Disease Training Manual. FRDC Project 2002/645. Pp: 40–42. 8. Ross A.J, R.R. Rucker & W.H. Ewing (1966) Description of a bacterium associated with redmouth disease of rainbow trout (Salmo gairdneri). Canadian Journal of Microbiology. 12: 763-770. 9. Rucker R (1966) Redmouth disease of rainbow trout (Salmo gairdneri). Bulletin de L’Office International des Epizooties 65: 825-830. Laboratorio de Histología, Embriología y Patología Veterinaria Sección de Ictiopatología Facultad de Medicina Veterinaria Universidad Nacional Mayor de San Marcos Responsable del Sector: Mg. MV Nieves Sandoval Chaupe email: nieves.sandovalchaupe@gmail.com