1. LABORATORIO No 5
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA: AISLAMIENTO DE BACTERIAS DEL TRACTO
RESPIRATORIO SUPERIOR
OBJETIVOS
• Nombrar la microbiota normal y patógena de faringe.
• Practicar la toma de muestra de faringe.
• Describir el crecimiento obtenido en un cultivo de faringe.
INTRODUCCION
El hombre mantiene una estrecha relación con los microorganismos, no solo con los presentes en
el ambiente que lo rodea sino también en su propia superficie e interior.
Diversas áreas de nuestro cuerpo están habitadas normalmente por ellos. La colonización
bacteriana no es la misma ni en cantidad ni en tipo en las diferentes áreas corporales. La mayor
cantidad y diversidad esta en la boca y el intestino grueso. Hay áreas colonizadas
transitoriamente como laringe, estómago, porción superior del intestino, entre otros. Y otras son
normalmente estériles como LCR, Líquido pleural y sinovial, médula y el interior de los tejidos.
MICROBIOTA NORMAL Y PATOGENA DE LA FARINGE:
La faringe tiene una microbiota normal residente elevada, procedente en gran parte de la boca y
los alimentos y adherida eficazmente al epitelio. Esta microbiota ejerce interferencia contra
agentes patógenos (antagonismo bacteriano).
MICROBIOTA NORMAL: Estos microorganismos son considerados no patógenos, pero,
cualquiera de ellos puede causar enfermedad en individuos con inmunodeficiencias, desordenes
metabólicos o tratamientos prolongados con algunos antibióticos.
Staphylococcus epidermidis Klebsiella spp
Corynebacterium spp Proteus spp
Estreptococos viridans y del grupo D Bacteroides spp
Branhamella catharralis Fusobacterium spp
Micrococcus spp Enterobacter spp
Peptococcus spp Candida albicans(Hongo)
Neisseria spp
Peptoestreptococcus spp.
MICROBIOTA PATOGENA: La faringe puede albergar un grupo de microorganismos
considerados patógenos. Están allí generando el denominado estado de “portador sano”, es decir
están en bajo número y sin causar enfermedad. Ellos son:
Streptococcus pneumoniae Haemophylus parainfluenzae
Streptococcus pyogenes Neisseria meningitidis
Staphylocuccus aureus
Haemophylus influenzae

2. No hay uniformidad de criterios respecto a si se debe tratar o no el estado de portador sano de
Estreptococos B hemolíticos del grupo A, por un lado opinan que no se debe tratar pues la
cantidad de bacterias es tan pequeña que este individuo no será un transmisor eficaz; por otro
lado opinan que no importa la cantidad de asilados, todo estado de portador (sano, convaleciente,
enfermo) debe tratarse.
Pero hay otra posición intermedia y recomienda el tratamiento de portadores sanos cuando:
Conviven con una persona afectada de fiebre reumática, el mismo sufre o ha sufrido de fiebre
reumática, presenta un cuadro clínico asociado con infección estreptocóccica, es un manipulador
de alimentos y/o trabaja en un centro hospitalario pediátrico.
LAS INFECCIONES:
La amigdalitis, faringitis, faringoamigdalitis son enfermedades muy frecuentes que ocurren
principalmente en niños y adolescentes (5-15 años). La infección usualmente se propaga por gotas
de saliva diseminadas en el aire, pero los microorganismos también pueden ser transmitidos por el
polvo, fómites o infecciones de la piel. En la mayoría de los casos los agentes etiológicos son virus.
Las bacterias solo son responsables del 5-25% de los casos y aunque las causantes pueden ser
varias como Streptococcus pyogenes, Staphylocuccus aureus, Corynebacterium diphteriae,
Haemophylus influenzae y Bordetella pertussis, el microorganismo buscado de rutina es el
Streptococcus pyogenes o Estreptococo Beta Hemolítico del grupo A por las secuelas supurativas
y no supurativas de la infección.
DIAGNÓSTICO CLÍNICO Y DE LABORATORIO:
Hay algunas características clínicas que pueden ayudar a discriminar una etiología viral de una
estreptocóccica, en muchos casos esto no es fácil. Por eso cuando se quiere confirmar una
etiología estreptocóccica es necesario el cultivo cuyo éxito es definitivamente una buena toma de
muestra.
Diagnóstico clínico:
Signos y síntomas diferenciales entre una faringitis viral y una estreptocóccica:
ESTREPTOFARINGITIS FARINGITIS VIRAL
Dolor de garganta Ronquera
Dificultad al tragar Tos
Fiebre elevada, inicio súbito Resfrió
Exudado Secreción nasal acuosa
Ganglios linfáticos cervicales hipersensibles y agrandados Laringitis y Conjuntivitis
Tomado de: Las estreptocóccicas y sus complicaciones. Laboratorios Wyeth. Bogotá 1978.
Diagnóstico de laboratorio:
El material suele recogerse con escobillón estéril, aunque en casos sospechosos de tosferina es
preferible con asa de platino larga y curva para alcanzar la nasofaringe. (Método de Bradford).
Los cultivos se hacen en agar sangre y se incuban a 37º centígrados y en atmósfera de 5 a 10%
de C02 y si se investiga Corynebacterium diphteriae en agar chocolate y/o medio de Loeffler.

3. Acción de los microorganismos sobre los glóbulos rojos:
Varias especies bacterianas producen hemólisis de los glóbulos rojos presentes en el medio de
cultivo agar sangre, entre los microorganismos que causan este efecto están algunas cepas de
estafilococos, estreptococos, E.coli, Bacillus spp., etc.
La hemólisis es una característica usual para identificar los estreptococos. La acción hemolítica
de los estreptococos en los eritrocitos es de los siguientes tipos:
Hemólisis alfa(α ): Formación de una zona parcial de destrucción de los eritrocitos alrededor de
la colonia en un cultivo de agar sangre, a menudo acompañada de una decoloración del medio de
verdosa a pardusca.
Hemólisis beta(β): Formación de una zona clara por la total destrucción de los eritrocitos
alrededor de la colonia del estreptococo.
Ninguna hemólisis: Actividad hemolítica no aparente o sin ninguna decoloración del medio
alrededor de la colonia.
Las UFC de S.pyogenes, son pequeñas entre 0.5-2.0 mm, transparentes, mucoides, lisas, de borde
entero y rodeada de una zona de ß hemólisis usualmente de 2 a 4 veces el tamaño las UFC.
Generalmente un portador sano tiene menos de 20 UFC con las características anotadas
anteriormente.
PRACTICA #2
AISLAMIENTO DE BACTERIAS DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
A. Toma de muestra:
Materiales: Escobillones, baja lengua.
Procedimiento:
1. En un sitio con buena luz, se ubican el paciente sentado y la persona que va a tomar la muestra
de pie. Si la persona esta sintomática, se tiene la precaución de preferir para tocar con el
aplicador aquellas zonas que presente supuración o inflamación en la pared faringea posterior.
2. Se enciende el mechero, se toma el escobillon y el baja lenguas y se toma la muestra como lo
indica la Figura 1. La toma de muestra debe ser rápida y la presión ejercida con el aplicador no
debe ser tan suave que solo se obtenga saliva ni tan fuerte que lastime a la persona. Debe tener
cuidado de no tocar otras áreas de la cavidad oral.

4. B. Examen directo con coloración de Gram y cultivo
Materiales: Lámina portaobjeto estéril
Caja de petri con agar sangre
Colorantes de Gram
Asas bacteriológicas
Procedimiento: Una vez tomada la muestra se desecha el baja lenguas. El escobillón con la
muestra se pasa sobre la lámina portaobjetos (esteril) haciendo movimientos rotatorios, (dejar
secar y realizar coloración de Gram) y con el mismo escobillon se siembra en un lado de la caja de
agar sangre como lo muestra la Figura 2 y se bota el aplicador.
Coloración de Gram:
a. Cubra la muestra con cristal violeta durante dos minutos. Lave con agua corriente y escurra.
b. Agregue solución de Lugol durante dos minutos. Lave con agua corriente y escurra el exceso.
c. Decolore con la mezcla alcohol-acetona por 30 segundos a un minuto. Lave con agua corriente
y escurra el exceso.
d. Cubra la preparación con fuschina o safranina por 1 minuto. Lave con agua corriente
suficiente y deje secar.
Siembra por agotamiento:
Procedimiento: En la caja de agar sangre inicie una siembra por agotamiento con el asa desde el
punto de siembra inicial donde puso la muestra con el escobillón. Incube la caja en atmósfera de
5 a 10% de C02.

5. RESULTADOS PRÁCTICA #5
AISLAMIENTO DE BACTERIAS DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
NOMBRE____________________________________FECHA______________GRUPO____
RESULTADOS DÍA 1:
Examen directo:
Morfología bacteriana Coloración de Gram
RESULTADOS DÍA 2:
Observación del medio de cultivo agar sangre:
Cuantas UFC diferentes observa en el cultivo:______________________________________
Este es un cultivo mixto: _____________________________________________________
Porqué: __________________________________________________________________
Según sus conocimientos, que tipo de hemólisis predomina en su cultivo: ___________________
Observa alguna UFC con hemólisis ß: _____________________________________________
Describa 2 UFC diferentes de su cultivo
Color Elevación Forma Margen Superficie
Colonia 1
Colonia 2
TALLER:
1. Qué tipos morfológicos de bacterias aisló de su garganta?
2. En el caso de aislar un Estreptococo Beta Hemolítico del grupo A, sería necesario erradicarlo?
Explique:
3. Es indiferente el empleo de sangre bovina, equina, ovejas y de conejo para la práctica de
hemólisis? Explique.
________________________________________________________________________
4. Qué sustancias son las responsables de la destrucción de los glóbulos rojos?

6. ________________________________________________________________________
5. Qué tipo de Estreptococos son patógenos para el hombre? Y con qué tipos de infecciones están
involucrados?
________________________________________________________________________
6. Que otros grupos de estreptococos, diferentes al grupo A pueden causar Beta Hemólisis?
________________________________________________________________________
7. En una muestra de faringe normal coloreada con Gram, puede observar las siguientes
estructuras, señale la correcta:
e Cocos Gram positivos, bacilos Gram negativos, bacilos Gram positivos
C Streptococcus pyogenes, Staphylocuccus aureus, Neisseria meningitidis.
S Bacterias, protozoos, levaduras, virus, células epiteliales.
8. Mencione factores externos e internos que puedan alterar la microbiota normal de la garganta
de una persona:
________________________________________________________________________
9. Consultar la morfología bacteriana con la correspondiente coloración de Gram de las bacterias
que se nombran en la introducción:
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