Este documento describe varias pruebas realizadas para identificar aminoácidos y proteínas, incluyendo reacciones de coloración con ninhidrina, xantoproteica, Millon, para aminoácidos azufrados y Biuret. También describe la desnaturalización de la albumina y la precipitación de proteínas mediante cationes e iones. Los resultados indican que la muestra problema es albumina y contiene aminoácidos como tirosina, triptófano y cisteína.

1. Aminoácidos y
proteínas
Duodécima práctica de Lab. Química Orgánica
Los ensayos que se realizaron en esta práctica son: reacción de ninhidrina para identificar la
presencia de aminoácidos libres, reacción xantoproteica, prueba de Millon para identificar restos
fenólicos, prueba para aminoácidos azufrados y la reacción de Biuret.
Cap. 12 Química Orgánica 2010 II _ UNALM
Autor: Eltsyn Jozsef Uchuypoma

2. AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS
1. Introducción
La proteína, como su nombre indica, han sido consideradas durante muchos años como
el componente primario de la materia viviente. Hasta mucho mas tarde no se reconoció la
gran importancia de los ácidos nucleicos y han constituido materia de discusión a lo largo
de las últimas décadas. El principio básico de la estructura de las proteínas es bastante
simple. Consisten en largas cadenas de aminoácidos enlazados unos a otro mediante
enlace péptidos. No obstante aparecen complicaciones:1) procedentes de la presencia de
alrededor de veinte tipos diferentes de radicales de aminoácidos en las cadenas péptidas;
2) procedentes de la larga longitud de estas cadenas.
En este informe se discuten algunas reacciones de coloración: reacción con ninhidrina,
reacción xantoproteica, Prueba de Millon, Prueba para aminoácidos azufrados y la
reacción de Biuret. Así también se realiza la desnaturalización de proteínas. Y finalmente
la precipitación de la albumina con iones.
2. Objetivo
• Identificar a qué tipo de aminoácido o proteína pertenece la muestra problema.
• Realizar las reacciones de coloración: (reacción ninhidrina, xantoproteica, de
Millon, para aminoácidos azufrados y de Biuret).
• Realizar la desnaturalización de la albumina.
• Ensayar la precipitación de proteínas mediante cationes e iones.
3. Metodología
A. Reacción con Ninhidrina. (presencia de aminoácidos libres)
Materiales/Solventes:
• Triptófano
• Glicina
• Cisteína
• Albumina
• Tirosina
• Muestra problema
• Solución de ninhidrina

3. Procedimiento:
I. Para realizar el ensayo con ninhidrina, primero a 6 tubos de ensayo agregar 1
mL de: triptófano, glicina, cisteína, albumina, tirosina y MP.
II. Agregar a cada uno de los tubos 3 gotas de la solución de ninhidrina al 0,3%.
III. Calentar unos 3 minutos en b.m. y observar. Se considera positiva la reacción
positiva si la solución toma un color azul purpura.
Muestras a ensayar Color antes de la reacción Cambio de coloración
Triptófano Translúcido Violeta
Glicina Translúcido Azul purpura
Cisteína Translúcido Translúcido
Albumina Blanco lechoso Purpura suave
Tirosina Translúcido Translúcido
MP Translúcido Blanco plomizo
MINICONCLUSION: la cisteína y la tirosina no presenta grupos amino libres. La
albumina si presenta aminoácidos libres.

4. B. Reacción Xantoproteica (presencia de aminoácidos aromáticos)
Materiales/Solventes:
• Triptófano
• Glicina
• Cisteína
• Albumina
• Tirosina
• Muestra problema
• Solución de acido nítrico concentrado.
Procedimiento:
I. Colocar en 6 tubos de prueba 1 mL de la muestra a ensayar.
II. Añadir a los tubos de ensayo 1 mL de acido nítrico concentrado.
III. Llevar a baño maría durante 3 minutos.
IV. Agregar 1 mL de hidróxido de sodio al 20% a cada uno de los tubos.
Observar y anotar.
Muestras a ensayar Color antes de calentar Cambio de coloración
Triptófano Amarillo amarillo naranja
Glicina Translúcido Translúcido
Cisteína Translúcido Translúcido
Albumina Blanco lechoso Amarillo
Tirosina Translúcido Amarillo
MP Blanco lechoso Amarillo suave

5. MINICONCLUSION: la reacción xantoproteica nos indica si el aminoácido presenta anillos
aromáticos y si la reacción es positiva presenta una coloración amarilla. Entonces el
triptófano y la tirosina, presentan un anillo aromático en su estructura. La albumina y la
MP presenta aminoácidos aromáticos.
C. Prueba de Millon (Presencia de restos fenólicos)
Materiales/Solventes:
• Triptófano
• Glicina
• Cisteína
• Albumina
• Tirosina
• Muestra problema
• Reactivo de Millon
Procedimiento:
I. En cada uno de seis tubos de ensayo agregar 1 mL de: triptófano,
glicina, cisteína, albumina, tirosina y MP.
II. A todos los tubos agregar 3 gotas del reactivo de Millon.
III. Calentar por unos minutos y observar.

6. Muestras a ensayar Color antes de calentar Cambio de coloración
Triptófano Amarillo Amarillo
Glicina Translucido Translucido
Cisteína Blanquecino dos fases Blanqueció
Albumina Blanquecino Un rojo pero muy suave
Tirosina Translúcido Rojo
MP Blanquecino Un rosado suave
MINICONCLUSION: esta prueba nos indica si presenta restos fenólicos o no,
identificamos que el único aminoácido que presenta un fenol en su estructura es la
Tirosina. Además identificamos que la albumina y la MP presenta tirosina en su secuencia
de aminoácidos.
D. Prueba para aminoácidos azufrados.
Materiales/Solventes:
• Triptófano
• Glicina
• Cisteína
• Albumina
• Tirosina
• Muestra problema
• Solución de NaOH al 40%
• Acetato de plomo al 10%
Procedimiento:
I. En cada uno de seis tubos de ensayo agregar 1 mL de: triptófano,
glicina, cisteína, albumina, tirosina y MP.
II. Adicionar a todos los tubos 8 gotas de NaOH al 40% y llevar a baño
maría.
III. Añadir 5 gotas de acetato de plomo al 10%. Observar si existe algún
cambio de color.

7. Muestras a ensayar Color antes de la reacción Cambio de coloración
Triptófano Translúcido Translucido
Glicina Translúcido Translucido
Cisteína Translúcido Marrón suave
Albumina Blanco lechoso Marrón intenso
Tirosina Translúcido Translucido
MP Translúcido Marrón débil
MINICONCLUSION: La cisteína, es un aminoácido azufrado; la albumina y la MP
presenta aminoácidos azufrados.
E. Reacción de Biuret (presencia de enlaces peptidicos)
Materiales/Solventes:
• Albumina
• Glicina
• Muestra problema
• Solución de NaOH
• Sulfato de cobre CuSO4
Procedimiento:
I. En cada uno de 3 tubos de ensayo agregar 1 mL de: glicina, albumina,
y MP.
II. Añadir 20 gotas de NaOH al 10%.
III. Luego adicionar 2 gotas de CuSO4. Observar el color que se forma.

8. Muestras a ensayar Color antes de la reacción Cambio de coloración
Glicina Translúcido Celeste
Albumina Blanco lechoso Violeta
MP Translúcido Violeta
MINICONCLUSION: las proteínas y péptidos que contienen por lo menos 3 unidades de
aminoácidos dan coloración violeta. La albumina y la MP dan una coloración violeta, eso
evidencia que presentan más de 3 aminoácidos unidos con enlaces peptidicos.
F. Desnaturalización de la albumina:
Materiales/Solventes:
• Albumina
• Etanol
• Acido clorhídrico HCl
• Acido nítrico HNO3
• Hidróxido de sodio NaOH al 40%

9. Procedimiento:
I. En cada uno de 5 tubos de ensayo agregar 1 mL de albumina.
II. El primer tubo se lleva a baño maría.
III. Al segundo tubo se adiciona 4 mL de alcohol etílico.
IV. Al tercer tubo se adiciona unas gotas de acido clorhídrico concentrado.
V. Al cuarto tubo se agrega una gotas de acido nítrico.
VI. Al quinto tubo se adiciona 4 mL de hidróxido de sodio al 40%.
VII. Anotar en que tubos se forma coagulación.
Albumina
con
Alcohol etílico HCl HNO3 NaOH al 40%
Reacción + - + + +
MINICONCLUSION: la desnaturalización de la albumina se da con agentes
desnaturalizantes como el calor, HCl, HNO3 y NaOH.
G. Precipitación de proteínas mediante cationes.
Materiales/Solventes:
• Agua
• Albumina
• Acido clorhídrico
• Hidróxido de sodio
• Solución de CuSO4

10. Procedimiento:
I. Agregar a 6 tubos las siguientes soluciones:
a. 3 mL de H2O
b. 3 mL de albumina
c. 3 mL de H2O + 3 gotas de HCl
d. 3 mL de albumina + 3 gotas de HCl
e. 3 mL de H2O + 3 gotas de NaOH
f. 3 mL de albumina + 3 gotas de NaOH
II. Importante: observar que se formaron 3 parejas de tubos. Los ensayos
sin albumina son necesarios para observar si el efecto observado en
los tubos de prueba con albumina se debe a la precipitación de la
proteína o es el hidróxido metálico el que esta precipitando.
III. Adicionar 20 gotas de sulfato de cobre (CuCO4) al 10%.
IV. Hacer las comparaciones por parejas. Anotar los tubos donde se formo
precipitados.

11. Tubo de prueba Formación de p.p. Reacción
a No No hubo formación de p.p.
pero si cambio de color.
b No Solo se evidencia un
cambio de color (celeste).
c No No hay formación de p.p.
pero si hay cambio de color.
d No Cambia de color (azul
caribeño)
e Si Hay precipitación del agua
f Si Se precipita la proteína y
hay cambio de color.
MINICONCLUSIÓN: Los tubos a, c y me son aquellos tubos de comparación y no
presentan albumina. El tubo a esta en medio neutro, el tubo c en medio acido y el tubo f
en medio alcalino. De lo experimentado en el tubo e y f hay formación de precipitado.
Entonces la precipitación de albumina mediante CuSO4 se da solo en medio básico.
H. Precipitación de proteínas mediante aniones.
Materiales/Solventes:
• Albumina
• Acido clorhídrico
• Hidróxido de sodio
• Solución de ferricianuro
Procedimiento:
I. Agregar a 3 tubos las siguientes soluciones:
a. 3 mL de albumina
b. 3 mL de albumina + 3 gotas de HCl
c. 3 mL de albumina + 3 gotas de NaOH
II. A todos los tubos adicionar 2 gotas de ferricianuro.
III. Agitar y observar el tubo que presenta precipitación.

12. Tubo de prueba Formación de p.p. Reacción
a Si Cambio a un color amarillo
débil.
b Si Presenta una coloración
celeste verdoso suave
c No Color amarillo y dos fases.
MINICONCLUSIÓN: Los tubos a y b forman precipitado cuando reacciona el ferricianuro
con la albumina en medio neutro y en medio acido respectivamente. Cosa que no ocurre
en medio acido (albumina con HCl).
4. Conclusiones
• la reacción xantoproteica nos indica si el aminoácido presenta anillos aromáticos y si la
reacción es positiva presenta una coloración amarilla. Entonces el triptófano y la
tirosina, presentan un anillo aromático en su estructura. La albumina y la MP presenta
aminoácidos aromáticos.
• La prueba de Millon nos indica si presenta restos fenólicos o no, identificamos que el
único aminoácido que presenta un fenol en su estructura es la Tirosina. Además
identificamos que la albumina y la MP presentan tirosina en su secuencia de
aminoácidos.
• La muestra problema (5-P) es una albumina. La cisteína, es un aminoácido azufrado;
la albumina y la MP presenta aminoácidos azufrados.
• las proteínas y péptidos que contienen por lo menos 3 unidades de aminoácidos dan
coloración violeta. La albumina y la MP dan una coloración violeta, eso evidencia que
presentan más de 3 aminoácidos unidos con enlaces peptidicos.
• la desnaturalización de la albumina se da con agentes desnaturalizantes como el calor,
HCl, HNO3 y NaOH.

13. 5. Bibliografía
• Keese R., Müller R.K., Toube T.P. Métodos de laboratorio para Química
Orgánica. 1° edición. Editorial Limusa. México DF. 1990
• Durst H.D. Química Orgánica Experimental. Editorial Reverté. España 1985.
• Morrison Robert. Química Orgánica. 5° edición. Addison Wesley
Iberoamericana. Estados Unidos. 1990.
• Rodney Boyer. Conceptos en Bioquímica. International Thomson Editores.
México. 2000.
• Carey Francis. Química Orgánica. 3° edición. editorial Mc Graw Hill. España.
1999.
• Holum John. Fundamentos de Química General, Orgánica y Bioquímica para
ciencias de la salud. Editorial Limusa. México. 1999.
• Solomons Graham. Química Orgánica. 2° edición. Editorial Limusa Wiley.
México. 2000.
• Haurowitz Felix. Química y funciones de las proteínas. Ediciones Omega.
Barcelona – España. 1969.
CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es el grupo responsable de la reacción positiva con la reacción
xantoproteica? La seroalbumina dará positiva la reacción.
El grupo responsable es el anillo aromático que presenta el aminoácido. Característico
del triptófano que se precipita a partir de sus disoluciones en acido sulfúrico al añadir
sulfato mercúrico. La fenilalanina, al igual que otros compuestos también presenta un
anillo aromático. La tirosina presenta una intensa absorción y da lugar a una serie de
reacciones coloreadas.
Fenilalanina, Phe, F Tirosina, Tyr, Y Triptófano, Trp, W
La secuencia de aminoácidos de la seroalbumina contiene un total de 17 puentes di
sulfuro, un tiol libre (Cys 34) y un único triptófano (Trp 214). Debido a la presencia del
triptófano la prueba xantoproteica con la seroalbumina dará positiva.

14. 2. ¿La albumina de hubo contiene aminoácidos azufrados?
La albumina presenta 609 aminoácidos en su secuencia con sólo 585 aminoácidos en
el producto final observado en la sangre. Debido a la presencia de los grupos SH de la
cisteína y la metionina; la albumina da positivo en la Prueba para aminoácidos
azufrados.
3. ¿Cuál o cuáles de los siguientes aminoácidos dan reacción positiva con
el reactivo de Millón?
La reacción de Millon para determinar la presencia de restos fenólicos
( tirosina). Para ello, se procede a la mezcla de los reactivo de Millon a la sustancia, y
lo lleva a una cierta temperatura (alrededor de 50 ° C). En este momento un color rojo
ladrillo aparece si la presencia de tirosina.
Entonces de los siguientes aminoácidos: triptófano, tirosina, histidina, fenilalanina,
metionina y glicina. El único que dará positivo con la prueba de Millon es la tirosina.
4. ¿con que prueba reconocería usted los enlaces peptidicos de una
proteína?
Con la prueba de Biuret: El nombre de la reacción procede del compuesto coloreado
formado por la condensación de dos moléculas de úrea con eliminación de amoníaco.
Esta reacción está dada por aquellas sustancias cuyas moléculas contienen dos
grupos carbamino (-CO.NH) unidos directamente o a través de un solo átomo de
carbono o nitrógeno. El reactivo de Biuret contiene Cu2SO4 en solución acuosa
alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación
de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no
compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos. Esta última
reacción provoca un cambio de coloración: violeta púrpura o violeta rosado. Debe
Señalarse que el color depende de la naturaleza de las proteínas; proteínas y péptidos
dan un color rosado; la gelatina da un color azul.
5. Si se tiene una solución neutra de proteína y se le añade algunos mL de
soda al 10%. Indicar si se precipita la proteína al añadir unos mL de:
La precipitación con iones se debe a que algunos cationes de metales pesados y
algunos aniones causan la precipitación de la proteína. Los cationes reaccionan con
las proteínas cuando se encuentran en su forma aniónica o básica dando sales con los
iones carboxilato de proteína. Los aniones formaran sales con las proteínas cuando
estas se encuentren en su forma catiónica o acida.
Ahora tenemos una proteína en un medio neutro y se le añade soda (NaOH). Entonces
el medio de la proteína cambia de neutro a básico.
a. Ferricianuro de potasio: (K4[Fe(CN)6] · 3 H2O) No forma precipitado, porque el
ferricianuro para reaccionar necesita de una proteína en su forma catiónica o acida.

15. b. Sulfato de cobre (II): (CuSO4 ) Si forma hay precipitación de la proteína. Por el sulfato
reacciona con la proteína en su forma aniónica o básica.
6. Explique a que se debe la desnaturalización de las proteínas.
Una proteína se desnaturaliza cuando pierde si estructura secundaria, terciaria o
cuaternaria. La desnaturalización es la desorganización de la forma molecular
completa de una proteína. Esta puede presentarse como un desdoblamiento o
desenrolla miento de las hélices o como separación de subunidades. La efectividad de
un agente desnaturalizante depende del tipo de proteína.
La primera teoría sobre desnaturalización razonable fue enunciada por Wu. En esta
teoría se supuso que la desnaturalización consiste en una reorganización de las
cadenas péptidas en la molécula de la proteína debido a la rotura de ciertos enlaces
débiles, mediante agentes de desnaturalización (calor, detergentes, disolventes
orgánicos, ácidos y bases fuertes, radiación UV, solución de urea, radiación por
microondas, etc.); los enlaces débiles mencionados mantendrían juntas las cadenas.
Aplicando los conceptos de Wu se puede decir con seguridad que la desnaturalización
consiste en una alteración de la conformación de cadenas.
7. ¿Por qué el acido nítrico produce una coloración amarilla cuando se pone
en contacto con un pedazo de cabello o piel?
La queratina es una proteína con estructura helicoidal, muy rica en azufre, que
constituye el componente principal de las capas más externas de la epidermis de
los vertebrados y se encuentra en el cabello. El colágeno es una molécula
proteica que forma fibras, las fibras colágenos. Estas se encuentran en todos
los animales pluricelulares. Son secretadas por las células del tejido conjuntivo como
los fibroblastos, así como por otros tipos celulares. Es el componente más abundante
de la piel y de los huesos. El acido nítrico produce una coloración amarilla debido a la
presencia de aminoácidos aromáticos de la queratina y el colágeno.
8. ¿Cómo separaría usted una mezcla de aminoácidos?
Mediante la electroforesis: Las proteínas son moléculas cuya carga neta depende del
contenido de una serie de aminoácidos (fundamentalmente acido glutamico, acido aspartico,
lisina, arginina e histidina) y del grado de ionización de estos al pH considerado.
La separación depende de la densidad de carga de las moléculas y, así, cuanto mayor sea la
densidad, mayor será la velocidad de migración en un campo eléctrico hacia el polo que
determine su carga neta.
La primera etapa del proceso es la aplicación de la muestra. En papel o acetato de celulosa,
esto se puede efectuar de forma puntual (permite el análisis de varias muestras
simultáneamente en pequeñas cantidades) o longitudinalmente (permite el estudio de una sola
muestra pero en mayor cantidad). La muestra se aplica disuelta en el tampón de electroforesis,
del que está impregnado el soporte y que se encuentra en los reservorios de la cubeta, y se
deposita en una pequeña zona, lo más estrecha posible, en el centro o en un extremo del
soporte (si se conoce cuál va a ser la dirección de desplazamiento de la misma) y de forma
perpendicular a la dirección del campo eléctrico. Conviene evitar la proximidad de los bordes del
papel, ya que allí el campo eléctrico no es homogéneo y se distorsionan las bandas según
avanzan.

16. En los geles de agarosa, se perfora el gel con ayuda de un troquel o una pipeta de diámetro
adecuado y se elimina esa porción por succión. La perforación puede ser cilíndrica o rectangular,
dependiendo del número y cantidad de muestra a analizar y la muestra se deposita en el orificio
practicado sin que llegue a rebosar. En este caso, el tampón esta embebido en el soporte
(agarosa).
La electroforesis termina cuando se haya producido la máxima separación de los componentes
de la muestra, pero sin sobrepasar los límites del soporte.
9. Aplicación de la reacción de un aminoácido con la ninhidrina en
cromatografía. Haga la ecuación.
Todos los aminoácidos que poseen un grupo amino libre reaccionan y forman dióxido
de carbono, amoníaco y un aldehído que contiene un átomo de
Carbono menos que el compuesto original. Esta reacción da lugar a la formación de un
producto color azul o púrpura (que posteriormente puede ser utilizado para cuantificar
el aminoácido). En el caso de la prolina, que estructuralmente no posee el grupo amino
libre, sino un grupo imino, la
Coloración final es amarilla. El amoníaco, la mayoría de los polipéptidos y las proteínas
pueden desarrollar coloración en esta reacción, pero a diferencia de los aminoácidos,
no liberan CO2. Recuerde que la coloración azulada o violeta será proporcional a la
concentración del aminoácido.
La reacción entre un aminoácido y la ninhidrina es la siguiente: